QuEChERS前處理液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測葡萄中35種農(nóng)藥殘留

張憶萍，賈曉菲，黎小鵬，林慶昶，溫馨，譚淑鏵

（中山市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗所，廣東中山528437）

近幾年，迅猛發(fā)展的廣東葡萄產(chǎn)業(yè)暴露出不少問題。當?shù)馗邷囟酀褚自斐善咸巡『Α⒅β介L、產(chǎn)量和品質(zhì)下降等。部分果園采用“超密植”和“超負荷”的種植模式，導致果實成熟遲，不均勻，品質(zhì)低，果實營養(yǎng)不足，抗病力下降，生理和病理病害嚴重等。為了應對此類問題，部分果園過度使用農(nóng)藥，對環(huán)境以及消費者的健康造成影響。本實驗將針對葡萄進行35種農(nóng)藥殘留的高效檢測。

QuEChERS前處理方法是2003年由美國農(nóng)業(yè)部Anastassiaeds.M等提出的一種非常簡易便捷的方法，被廣泛應用于農(nóng)藥多殘留分析。該方法采用乙腈提取，硫酸鎂和氯化鈉鹽析，無水硫酸鎂與PSA分散固相萃取凈化，可以大大縮減前處理時間，適用于質(zhì)譜儀多農(nóng)藥殘留的檢測。使用配有Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱的Agilent 1200 Infinity高效液相色譜系統(tǒng)進行分離，使用配有安捷倫電噴霧離子源（ESI）的Agilent 6410液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，采用動態(tài)多反應離子監(jiān)測模式（DynamicMRM）結(jié)合低量基質(zhì)進樣，進一步減少了基質(zhì)干擾，提高了定性定量準確度，有效地提高檢測靈敏度，對35種農(nóng)藥殘留的檢測達到了高效率低消耗的效果。

1 儀器與材料

HZT A500電子 天平；IKA KS-501振 蕩器；KA VORTEX2旋渦振蕩器；Thermo ST40高速離心機；Agilent 1200-6410高效液相串聯(lián)質(zhì)譜。

乙腈，LCMS級色譜純，色譜科公司；甲酸，優(yōu)級純，默克公司；實驗用水，屈臣氏蒸餾水；氯化鈉，分析純，廣州化學試劑廠；15 mL分散固相萃取農(nóng)殘凈化管（部件號5982-5056），內(nèi)含150 mg PSA、900 mg硫酸鎂，安捷倫公司；35種農(nóng)藥標準品：滅蠅胺，霜霉威，涕滅威亞砜，多菌靈，涕滅威砜，滅多威，噻蟲嗪，3-羥基克百威，吡蟲啉，啶蟲脒，涕滅威，克百威，氯吡脲，甲拌磷亞砜，甲萘威，嘧霉胺，甲霜靈，氯蟲苯甲酰胺，烯酰嗎啉，甲拌磷砜，多效唑，嘧菌酯，咪鮮胺，三唑酮，除蟲脲，滅幼脲，甲維鹽；蟲酰肼；吡唑醚菌酯，二嗪磷，辛硫磷，甲拌磷，氟啶脲，噠螨靈，阿維菌素，農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心；21個葡萄抽檢樣品，中山市各鎮(zhèn)區(qū)葡萄種植基地。

2 實驗方法

2.1 樣品處理

2.1.1 樣品的制備

抽取不少于1 000 g的新鮮葡萄，去柄充分混勻放入食物料理機中粉碎勻漿，分裝保存制成待測樣，于-18℃冰箱中保存，備用。

2.1.2 樣品的提取和凈化

準確稱取10.00 g樣品于50 mL塑料離心管中，加乙腈10.0 mL、氯化鈉約5 g和陶瓷均質(zhì)子，振蕩混合20 min，4 000 r/min離心5 min。取約5 mL上清液于15 mL分散固相萃取農(nóng)殘凈化管中，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心5 min，取上清液100μL加入900μL水混勻待測。

2.2 儀器條件

液相部分：色譜柱為安捷倫公司ZORBAX SB-C18，2.1 mm×150 mm，3.5μm；柱溫40℃；進樣體積50μL；流速0.400 mL/min；流動相A相為0.1%（V/V）甲酸水，B相為乙腈，梯度洗脫程序：洗脫程序：0～1.5 min，10%B；1.5～3.0 min，10%～50% B；3.0～6.0 min，50%～60%B；6.0～8.5 min，60%～100% B；8.5～11.5 min，100%B；11.5～12.3 min，100%～10%B；12.3～13.5 min，10%B；后運行3 min。

質(zhì)譜部分：ESI源；干燥氣溫度250℃；干燥氣流速8.5 L/min；霧化器壓力38 psi；正模式，掃描類型Dynamic MRM。

表1 35種農(nóng)藥的色譜質(zhì)譜參數(shù)

3 結(jié)果與討論

3.1 標準曲線配置與基質(zhì)效應、回歸方程、相關(guān)系數(shù)

35種標準品用甲醇配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的混合標準貯備液，貯存于-16℃冰箱中，有效期6個月；標準曲線用空白葡萄基質(zhì)配成0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.08 mg/L、0.10 mg/L混合標準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，使用液質(zhì)聯(lián)用儀按2.2所述儀器條件進行測定，以各定量離子色譜峰面積為縱坐標，樣品濃度為橫坐標分別進行線性回歸處理，結(jié)果顯示，35種農(nóng)藥中除蟲脲等24種農(nóng)藥在0.08 mg/L、0.10 mg/L濃度點偏離度較大，標準曲線相關(guān)系數(shù)達不到要求。在增加濃度等級，并縮小標準曲線最高濃度至0.02 mg/L后，線性基本符合要求。

考慮到LC-MS QQQ普遍存在基質(zhì)效應，基質(zhì)常對分析有顯著干擾，并影響分析結(jié)果的準確性，盡可能減少最終提取液中的基質(zhì)成分是有效清除基質(zhì)效應的方法。為得到準確結(jié)論，對標準曲線配制采用兩組對照進行，A組用空白葡萄基質(zhì)各配成0.001 mg/L、0.002 mg/L、0.004 mg/L、0.008 mg/L、0.012 mg/L、0.016 mg/L、0.020 mg/L混合標準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用；B組采用空白葡萄樣品，按2.1.1制備，按2.1.2稱取7個平行樣品后分別添加混合標準物使其標準品含量達到0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.04 mg/kg、0.08 mg/kg、0.12 mg/kg、0.16 mg/kg、0.20 mg/kg，提取凈化，得到0.001 mg/L、0.002 mg/L、0.004 mg/L、0.008 mg/L、0.012 mg/L、0.016 mg/L、0.020 mg/L的基質(zhì)-溶劑混合標準溶液。A組混合標準工作溶液及B組提取凈化后樣品按2.2所述儀器條件進行測定，以各色譜峰面積為縱坐標，樣品濃度為橫坐標分別進行線性回歸處理。按基質(zhì)效應=基質(zhì)匹配標準曲線斜率/純?nèi)軇藴是€斜率，斜率比越接近1，則基質(zhì)效應越小，比值越小則基質(zhì)效應越大。本次實驗中，基質(zhì)效應≈A組標準曲線斜率k/B組標準曲線斜率k，對比發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)效應最明顯的分析物為甲拌磷砜、多效唑、甲拌磷、氟啶脲和阿維菌素，其k/k值均小于0.1，基質(zhì)抑制效應強烈。以0.020 mg/L為例，A組甲拌磷砜響應值僅為2 456，甲拌磷響應值為628，氟啶脲響應值為2 195。

為保證低濃度樣品分析結(jié)果的準確性，以及盡量降低基質(zhì)干擾，最終確定B組方案配置標準曲線。35種農(nóng)藥在0.001～0.020 mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.995 1～0.999 9。以3倍基線噪聲所對應的標準品濃度（ng/mL）為儀器的檢出限，最低方法檢出限為0.01 ng/g，低于國家標準的限量值要求，各項實驗數(shù)據(jù)見表2、表3。

表2 35種農(nóng)藥基質(zhì)效應比較

3.2 回收率和方法精密度

本實驗采用在空白樣品（經(jīng)檢測不含目標化合物）中加標的方法進行回收率和方法精密度測試。取12個空白樣品進行加標，分別添加混合標準物使樣品含量為0.01 mg/kg和0.02 mg/kg的2個水平濃度（簡稱1組、2組），每個濃度檢測6次，結(jié)果見表3。2個添加濃度水平下35種農(nóng)藥的回收率在62.37%～118.56%之間，相對標準偏差1.01%～9.21%。

表3 葡萄糖中35種農(nóng)藥殘留的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、方法檢出限、回收率及相對標準偏差

3.3 結(jié)果與討論

本次實驗前處理較為簡單，主要難點在于去除共提取基質(zhì)干擾物對定量準確度、靈敏度及儀器污染的影響。在使用分散固相萃取農(nóng)殘凈化管進行前處理提取的基礎上，進一步稀釋上機提取液以減少最終進入儀器的基質(zhì)含量，并將制備標準曲線的過程與前處理結(jié)合，更大程度上減少干擾和縮小誤差，提高方法準確性。對于多農(nóng)殘檢測時回收偏低的滅蠅胺，此方法亦保證了較為穩(wěn)定的回收率，且基本不低于60%。

用此法檢測21個葡萄樣品，共檢出14項農(nóng)殘，其中8項為殺菌劑，4項為殺蟲劑，2項為植物生長調(diào)節(jié)劑，結(jié)果見表4。根據(jù)GB 2763-2019中規(guī)定農(nóng)藥最大殘留限量（MRL）對檢測結(jié)果進行判定，未有MRL規(guī)定的2個農(nóng)藥品種不作判定。其中7號樣品的氯吡脲和8號、9號樣品的霜霉威測定值接近MRL；13號樣品氯吡脲測定值為0.05 mg/kg，等于最大殘留限量值，存在超標風險；7號、8號、9號、12號、14號5個樣品單個最高檢出項目大于等于6項。檢測結(jié)果表明，個別葡萄種植戶存在過度依賴農(nóng)藥行為，同類型農(nóng)藥殘留較多，對這部分種植戶加大監(jiān)管力度及科普宣傳，將有利于提高食品質(zhì)量，保障食品安全。

表4 21個葡萄樣品35種農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果

綜上所述，本文建立了使用QuEChERS前處理結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用儀同時快速檢測葡萄中35種農(nóng)藥殘留的方法，該方法可同時檢測多種農(nóng)藥；使用QuEChERS前處理，具有處理快速，提取效率高，有機溶劑用量少，對環(huán)境友好，靈敏度高，準確性高，重復性好等特點；使用Agilent 1200 Infinity高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)，采用動態(tài)多反應離子監(jiān)測模式，進一步減少基質(zhì)干擾，有效提高檢測靈敏度，提高定性定量準確度，達到一次性檢測多種農(nóng)殘的最終目的。