薰衣草的離體快繁技術(shù)研究

丁雪珍

（濰坊職業(yè)學(xué)院，山東 濰坊 262737）

薰衣草（Lavandula angustifolia Mill.）為唇形科、薰衣草屬小灌木或多年生草本，多種花色，最常見(jiàn)是藍(lán)紫色，花期一般為6—8月[1]。薰衣草主要作為香料植物栽培，同時(shí)也是布置花壇、營(yíng)造花海、設(shè)計(jì)景觀的常用植物，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品、制皂、食品、保健品等行業(yè)[2]。

薰衣草多采用播種和扦插等方法繁殖。因薰衣草以花為主要產(chǎn)品，種子形成量少，發(fā)芽率低，且種子繁殖品種易退化。扦插育苗時(shí)老枝扦插不易生根，嫩枝扦插易腐爛。國(guó)內(nèi)外研究者利用組培進(jìn)行薰衣草的快速繁殖，取得一些研究成果[3-5]，本試驗(yàn)對(duì)薰衣草的離體快繁技術(shù)進(jìn)行研究，以找到一種適合工廠化快速繁殖的方法。

1 選用試驗(yàn)材料與條件

1.1 外植體材料

試驗(yàn)用薰衣草取自山東宋香園生態(tài)世界。2019年11月至2020年11月選取幼嫩莖段作為接種材料。

1.2 儀器用具

試驗(yàn)在濰坊市植物組培快繁工程研究中心進(jìn)行。主要設(shè)備與用具：電子天平、超凈工作臺(tái)，壓力蒸汽滅菌器，培養(yǎng)基定量灌裝機(jī)、接種器械消毒器，電磁爐等。

1.3 培養(yǎng)基的配制

以MS為基本培養(yǎng)基，添加2%～3%的白砂糖和0.65%的瓊脂粉。根據(jù)各階段培養(yǎng)需要設(shè)計(jì)不同濃度和配比的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH為6.2。

1.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度23～25℃，光周期為12h光照、12h黑暗，光強(qiáng)為1500～2000lx。

2 試驗(yàn)方法[6]

2.1 外植體的選擇與處理

從室外長(zhǎng)勢(shì)良好的植株上，選取健壯無(wú)病蟲(chóng)害的當(dāng)年生幼嫩枝條（2～3cm）作為外植體。

將枝條上的葉片剪去，先用流水沖洗掉表面的浮塵，再放到5%的洗潔精溶液中浸洗約5min，最后用流水沖洗干凈，放到帶蓋的廣口瓶中備用。

2.2 外植體的表面滅菌與接種

將洗凈的外植體放到消毒好的廣口瓶里，倒入75%酒精浸泡30～60s，倒出酒精迅速倒入有效氯2%的次氯酸鈉溶液，振搖滅菌10～15min。滅菌時(shí)間到，將薰衣草莖段取出放到無(wú)菌水中沖洗1min，重復(fù)3次，最后吸干莖段表面水分備用。

2.3 外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)

將外植體切口被消毒劑殺死的組織剪掉，按照無(wú)菌操作要求接種到預(yù)先準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上（MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L），接種后放到組培苗培育室，設(shè)定好培養(yǎng)條件，每天觀察記錄分化情況，30d統(tǒng)計(jì)污染率和成活率。

2.4 增殖培養(yǎng)

把初代培養(yǎng)分化出的新生小苗，接種到以下5種配方的增殖培養(yǎng)基上：

（1）MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L；

（2）MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；

（3）MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L；

（4）MS+CPPU 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L；

（5）MS+CPPU 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L。

共5個(gè)處理，每個(gè)處理接種20瓶，30d統(tǒng)計(jì)增殖情況。

2.5 生根培養(yǎng)

將增殖得到的小苗，剪切成1.5～2.0cm長(zhǎng)的嫩莖，轉(zhuǎn)接至1/2MS培養(yǎng)基上，添加生長(zhǎng)素種類與濃度見(jiàn)表4，每個(gè)處理接種200株，觀察統(tǒng)計(jì)生根情況，選出最適宜的生根培養(yǎng)基。

3 結(jié)果與分析

3.1 外植體初代培養(yǎng)情況

（1）不同季節(jié)采集莖段的接種成活率情況（見(jiàn)表1）。

表1 薰衣草莖段不同季節(jié)接種的成活率

注：污染指細(xì)菌或真菌侵染，死亡指外植體未被微生物侵染但變色死亡。

由表1可見(jiàn)，接種時(shí)間對(duì)薰衣草外植體接種成活率影響很大，春季接種成活率明顯高于秋季，所以盡量在春季進(jìn)行外植體的處理與接種。

（2）采用不同方式滅菌對(duì)莖段接種成活率影響（見(jiàn)表2）。

表2 不同方式滅菌薰衣草莖段接種的成活率

對(duì)薰衣草外植體采用四種滅菌方式進(jìn)行處理，從表2可以看出，75%酒精處理30～60s，2%次氯酸鈉滅菌15min效果較好，成活率可達(dá)到50%左右。

3.2 不同培養(yǎng)基配方對(duì)增殖培養(yǎng)的影響

將莖段誘導(dǎo)出的小芽，轉(zhuǎn)入不同的增殖培養(yǎng)基中，觀察生長(zhǎng)增殖情況，30d后得到的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同培養(yǎng)基配方上薰衣草叢生芽增殖情況

由表3可知，不同濃度和種類的植物激素組合對(duì)薰衣草增殖的影響較大，高濃度的CPPU雖能促進(jìn)芽體增殖，但芽體細(xì)弱，對(duì)下一階段的生根培養(yǎng)不利。因此，增殖培養(yǎng)適宜的激素組合為6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L或CPPU 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。

3.3 不同生長(zhǎng)素對(duì)生根培養(yǎng)的影響

薰衣草組培苗在生根培養(yǎng)基上，大約10d開(kāi)始形成根原基，見(jiàn)表4。

表4 不同生長(zhǎng)素對(duì)薰衣草生根的影響

由表4可知，1/2MS+IBA 0.5mg/L的培養(yǎng)基配方，薰衣草組培苗生根速度快，生根率96%，是薰衣草離體快繁的最佳生根培養(yǎng)基。

4 結(jié)語(yǔ)

研究結(jié)果表明，用薰衣草的莖段進(jìn)行組培快繁，適宜春季接種。表面滅菌采用75%酒精處理30～60s，2%次氯酸鈉滅菌15min效果好。試驗(yàn)篩選出了增殖和生根培養(yǎng)最適培養(yǎng)基配方，為薰衣草產(chǎn)業(yè)化繁殖提供參考，見(jiàn)圖1～圖3。

圖1 莖段誘導(dǎo)

圖2 叢生芽增殖

圖3 小苗生根