孕早期胚胎停育和產前診斷絨毛染色體數目異常結果分析

宋居杰

（玉林市婦幼保健院 檢驗科，廣西 玉林）

0 引言

絨毛染色體分析技術是近30年來國內外使用較為廣泛的一項產前診斷技術，主要用于孕早期胎兒染色體分析和流產原因分析，是有效降低和杜絕先天出生缺陷患兒的有力手段[1]。早期流產的主要病因是染色體異常，相關研究表明55.4%的流產病因是染色體異常[2]。隨著超聲技術的提高，孕早期的產前篩查準確率越來越高。據國內郭莉等[3]報道胎兒超聲異常行絨毛染色體產前診斷的異常率可達41.8%。染色體數目異常是最常見的絨毛染色體畸變類型。染色體數目異常通常會導致胚胎早期流產，這是因為染色體數目異常的胚胎，遺傳缺陷大，遺傳物質不平衡，致死性高[4]。本研究通過分析132例孕早期胚胎停育和153例產前診斷絨毛染色體的數目異常情況，了解兩組樣本絨毛染色體數目異常的分布，為遺傳咨詢及產前診斷提供可靠的依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取因孕早期胚胎停育到我院就診且要求手術清宮婦女132例，孕周6～13周；選取在我院就診因孕早期超聲篩查異常要求產前診斷的婦女153例，孕周11～14周。

1.2 標本采集

胚胎停育組在清宮手術中無菌采集標本，置于50 mL無菌離心管并加入適量無菌生理鹽水保存，及時送至實驗室鏡下挑取絨毛組織；產前診斷組在超聲定位下經腹部穿刺無菌抽取絨毛組織，置于15 mL無菌離心管并加入適量無菌生理鹽水保存，及時送檢。

1.3 實驗方法

1.3.1 絨毛細胞培養

①將絨毛組織取出并置于無菌培養皿中，用無菌注射器抽取生理鹽水，對標本進行沖洗2～3次；②在解剖顯微鏡下選取優質絨毛組織置于另一無菌培養皿中，用無菌手術刀片將絨毛組織切成糊狀；③加入1 mL 0.25%胰酶并移至15 mL無菌離心管中，同時加入3滴阿米卡星抗生素，混勻后置37℃水浴箱10 min；④加入2 mL培養基終止消化，1000 r/min離心2 min后棄上清液；⑤加入培養基5 mL，接種于培養瓶中，放入37℃、5%CO2培養箱中培養7 d；⑥在倒置顯微鏡下觀察細胞的貼壁情況，觀察到細胞克隆后進行換液，繼續培養；⑦每天觀察，當觀察到大量圓形細胞時可收獲；⑧如形態不理想則選擇傳代培養后適時收獲。

1.3.2 細胞收獲和染色體制備

①在培養瓶中注入20 ng/mL秋水仙素3滴混勻，放入37 ℃培養箱中培養3 h后收獲，將培養瓶內的上清液棄之，加入胰蛋白酶消化5 min，加入培養液終止消化；②1500 r/min離心10 min后棄上清液，加入6 mL的0.075 mol/L KCl低滲6 min，再加入1 ml的甲醇:冰乙酸（3:1）固定液預固定5 min，離心棄上清液，再固定2次，再離心棄上清液；③用固定液將沉淀細胞制成細胞懸液，用潔凈濕玻片滴片，放入75 ℃烤箱中烤片3 h，常規G顯帶。

1.3.3 核型分析

每例標本至少計數20個分裂相，分析5個核型。

1.4 觀察指標

統計兩組染色體數目異常的染色體分布，分析孕早期胚胎停育和產前診斷絨毛染色體數目異常情況。

2 結果

2.1 132例孕早期胚胎停育絨毛染色體結果

正常61例（46.2%），異常71例（53.8%）。在71例染色體異常樣本中70例（98.6%）為數目異常，幾乎涉及所有染色體，主要有X單體14例（20.0%）、16-三體8例（11.4%），見表1。

表1 70例孕早期流產絨毛染色體數目異常情況（n, %）

2.2 153例早期產前診斷絨毛染色體結果

正常 87例（56.9%），異常 66例（43.1%）。在 66例染色體異常樣本中59例（89.4%）為數目異常，7例（10.6%）為結構異常，59例數目異常樣本中主要有21-三體23例（39.0%）、18-三體 14例（23.7%）、13-三體 11例（18.6%），X單體9例（15.3%），見表2。

表2 59例孕早期產前診斷絨毛染色體數目異常情況（n, %）

3 討論

本研究提示，在早期胚胎停育及早期產前診斷中，絨毛染色體異常均較為常見，其中流產胚胎異常率53.8%，與王珺等[5]報道的53.2%相近；產前診斷異常率43.1%，明顯高于凌穎聰等[6]報道的10%，可能與本組數據產前診斷指征均為B超異常有關。由此可見，胚胎停育絨毛染色體異常率高于產前診斷絨毛染色體異常率，可能是由于兩組病例的臨床指征本身差異較大。

在本研究中，流產胚胎及產前診斷絨毛均以染色體數目異常為主，流產胚胎數目異常占異常病例數98.6%，稍高于曾秋伊等[7]報道的96.5%。產前診斷絨毛染色體數目異常占異常病例數89.4%。可見染色體數目異常在絨毛染色體檢查中是最主要的畸變類型。染色體數目異常會導致胚胎在孕早期發生停育，由于額外增加或缺失的一條染色體嚴重破壞了胚胎正常的發育過程而導致流產[8]。因此，通過早期絨毛染色體數目的檢測，可以為胚胎停育患者盡早找到病因，降低病因查找的成本，并提供更科學的遺傳咨詢；由于染色體數目異常，阻礙了胚胎的正常發育，大多數遭遇自然淘汰而流產，然而少數染色體異常患兒可以足月分娩，且常常表現出智力障礙等缺陷[9]，孕早期絨毛染色體產前診斷技術能更早地檢測出這些先天缺陷的胎兒，讓臨床進行有效的干預，從而提高人口出生質量，減輕家庭和社會的經濟負擔。

本研究發現流產胚胎和產前診斷絨毛染色體數目異常所涉及的染色體范圍有所差異，流產胚胎絨毛染色體數目異常涉及幾乎所有染色體，主要有X單體（20.0%）、16-三體（11.4%）；產前診斷絨毛染色體數目異常則主要有21-三體（39.0%）、18-三 體（23.7%）、13-三 體（18.6%），X 單 體（15.3%）。因此，筆者認為流產絨毛和產前診斷絨毛可以采取不同的檢測策略，由于流產絨毛的數目異常涉及幾乎所有的染色體，所以并不適合選擇快速的分子檢測方法；而產前診斷絨毛的數目異常主要涉及三大染色體和性染色體，因此可以選擇快速產前檢測加上常規染色體檢查，縮短診斷周期。實際檢查中應綜合各技術的優缺點，必要時多種技術結合檢測，以提高檢測成功率與異常核型檢出率[10]。

綜上所述，絨毛染色體檢查在孕早期胚胎停育及產前診斷中具有重要的診斷價值，染色體數目異常是最常見的病因。雖然絨毛的培養難度大、周期長，但隨著臨床取材質量的提高及實驗室的不斷探索和優化培養技術，胚胎停育采集的絨毛和產前診斷采集的絨毛培養成功率都在不斷提高。因此，絨毛染色體檢查在孕早期胚胎停育及產前診斷中的優勢仍無法被取代。