廣東省肇慶地區冠心病患者CYP2C19基因多態性差異性分布

張小樂，蔡肇栩，謝麗妍，梁龍清

(肇慶市第一人民醫院，a.CCU；b.藥學部；c.特需診療中心，廣東 肇慶 526000)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary heart disease, CHD)是由冠狀動脈粥樣硬化造成的血管腔狹窄或堵塞引起冠狀動脈循環受阻，造成心肌缺血缺氧甚至壞死的一種心臟疾病[1]。近年來隨著人們生活方式的改變，CHD在我國的發病率正逐年上升，已嚴重危害著人類的生命健康。經皮冠狀動脈介入術(percutaneous coronary intervention, PCI)已成為CHD患者重要的治療手段。PCI術后進行抗血小板治療能夠有效降低患者再梗風險及病死率。盡管新的P2Y12抑制劑(如替格瑞洛等)比氯吡格雷更有效[2]，然而氯吡格雷具有出血風險小、成本效益相對較高的優點，因此氯吡格雷大多數情況下仍被作為首選治療藥物[3-4]。然而，在使用氯吡格雷進行治療的同時，部分患者被發現對該藥物的抗血小板療效呈現低應答或無應答現象，出現氯吡格雷抵抗。氯吡格雷抵抗現象與細胞色素CYP2C19基因的多態性相關，CYP2C19等位基因功能缺失患者與正常基因型的患者相比，再發心血管不良事件風險增加[5-6]。據文獻報告，CYP2C19基因多態性的地域分布不盡相同，存在顯著差異[7]。然而，本地區CHD患者的CYP2C19基因多態性分布鮮有研究。因此，本研究擬探索廣東省肇慶地區CHD患者的CYP2C19*2、*3和*17的基因多態性分布情況，為臨床合理應用氯吡格雷進行抗血小板治療提供參考依據。

1 資料與方法

1.1病例選擇 2019年6月-2020年11月我院病案系統診斷為CHD患者共501例，男359例，女142例，年齡34～94歲，平均(67.27±12.12)歲。入選標準：所有患者均為CHD住院患者，常住肇慶地區，并接受CYP2C19*2、*3和*17基因多態性檢測，在病史詢問中都否認家族遺傳病史，并且血緣上無相互聯系。排除標準：患有重要器官疾病者，如嚴重心肝、腎病變，各種血液系統疾病；有明確消化系統疾病，如活動性消化性潰瘍等。本研究經我院醫學倫理委員會批準。

1.2方法 采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集患者外周靜脈血2 ml，混勻后取200 μl血加入1 ml稀釋后的NH4Cl溶液裂解紅細胞，靜置5 min，將其置于高速離心機(H1650，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司)在3 000 r/min下離心5 min，離心完成后棄上清，然后加入耀金保核酸純化試劑(北京華夏時代基因科技發展有限公司)與下層白細胞混勻，靜置至少20 min加入相應的耀金分測序反應通用試劑(北京華夏時代基因科技發展有限公司)，按指定標號位置放進微量熒光檢測儀(Fluotec 48E，西安天隆科技有限公司)并在電腦系統軟件記錄保存，最后采用熒光染色原位雜交法對患者DNA樣本進行CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17基因多態性檢測，并統計基因型、代謝表型、等位基因以及突變位點數。

2 結 果

2.1Hardy-Weinberg平衡檢驗 本次研究針對501例廣東省肇慶地區CHD患者的CYP2C19*2、*3、*17基因多態性進行了檢測與分析，檢測CYP2C19基因多態性結果符合Hardy-Weiberg平衡定律(P>0.05)，表明研究對象來自同一群體，群體基因遺傳平衡，代表性較好。

2.2CYP2C19基因型、等位基因及代謝型頻率分布情況 本研究收集501例檢測樣本，CYP2C19基因型分布分別為*1*17、*1*1、*1*2、*1*3、*2*2、*2*3，分別占患者總數的0.80%、44.11%、36.13%、6.39%、8.98%、3.59%，見表1。CYP2C19的代謝表型分布分別是超快代謝型(UM)(*1*17)為0.80%，快代謝型(EM)(*1*1)為44.11%，中間代謝型(IM)(*1*2、*1*3)為42.51%，慢代謝型(PM)(*2*2、*2*3)為12.58%，見表2。CYP2C19*1、*2、*3和*17等位基因頻率分別為65.77%、28.84%、4.99%、0.40%，見表3。

2.3不同性別CHD患者CYP2C19基因型、等位基因及代謝型頻率分布 本研究將CHD患者分為男、女兩個組，男、女患者CYP2C19基因型分布差異無統計學意義(χ2=2.063，P=0.840)，等位基因分布差異無統計學意義(χ2=0.999，P=0.801)，代謝型分布差異也無統計學意義(χ2=1.516，P=0.678)。見表1～3。

表1 肇慶地區CHD不同性別患者CYP2C19基因型分布[例(%)]

表2 肇慶地區CHD不同性別患者CYP2C19代謝表型分布[例(%)]

表3 肇慶地區CHD不同性別患者CYP2C19等位基因分布[例%)]

2.4肇慶地區CHD患者CYP2C19等位基因和代謝表型與廣東省其他地區人群的比較 本次研究將肇慶地區CHD患者與廣州、佛山、東莞、梅州客家、粵北地區CHD患者的CYP2C19等位基因和代謝表型進行比較。肇慶地區CHD患者與廣東省上述地區CHD患者CYP2C19等位基因和代謝表型分布差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 廣東省不同地區CHD患者CYP2C19等位基因和代謝表型比較[例(%)]

3 討 論

氯吡格雷作為第二代噻吩吡啶類抗血小板聚集藥物，是能有效預防CHD患者介入治療術后血栓形成的經典藥物之一。氯吡格雷作為前藥，需在體內經過肝藥酶P450(CYP)代謝后形成活性產物，與表面的二磷酸腺苷(ADP)受體不可逆地進行結合，進而發揮抗血小板聚集的治療作用[13]。隨著藥物基因組學研究的深入，發現氯吡格雷的抗血小板聚集作用與CYP2C19基因多態性密切相關，CYP2C19*1作為正常編碼活性的等位基因，而CYP2C19*2和*3為功能缺失型等位基因，可引起酶活性降低，從而減弱氯吡格雷抗血小板的活性，導致心血管不良事件發生率明顯提高[14]。CYP2C19*17為功能增強型等位基因，該基因會導致機體對氯吡格雷的反應性增強，降低血小板聚集率，增加出血性事件[15]。因此，我們應該根據CHD患者的CYP2C19基因多態性來調整氯吡格雷的標準維持劑量，從而給予患者個體化的醫療服務。

本研究對廣東省肇慶地區501例CHD患者的CYP2C19*2、*3和*17基因多態性采用數字分子雜交技術進行檢測并分析，本次研究人群的CYP2C19基因多態性檢測結果符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)，表明研究對象來自同一群體，群體基因遺傳平衡，代表性較好。研究發現肇慶地區CHD患者CYP2C19*1、*2、*3和*17等位基因頻率分別為65.77%、28.84%、4.99%、0.40%和CYP2C19的代謝表型分布分別是UM(*1*17)為0.80%、 EM(*1*1)為44.11%， IM(*1*2、*1*3)為42.51%、PM(*2*2、*2*3)為12.58%。 本次研究結果與先前的一些研究[8-12]結果一致，從而揭示了肇慶地區CHD患者CYP2C19*2、*3、*17等位基因和代謝表型分布與廣州、佛山、東莞、梅州客家、粵北地區CHD患者差異無統計學意義(P>0.05)。本研究只選取本地區CHD患者，入組樣本量有待提高，不能完全反映肇慶地區人群中CYP2C19基因多態性分布的客觀情況，后續還需納入其他心腦血管患者以及正常體檢人群進行研究，從而可以真實客觀地分析本地區CYP2C19基因多態性的分布特征。

Sun等[16]研究報道，至少含1個CYP2C19功能缺失等位基因的CHD患者PCI術后應用氯吡格雷進行抗血小板治療1年后的主要心血管不良事件發生率是正常代謝型基因的2.66倍。同時，有研究指出歐美人群中氯吡格雷相關CYP2C19基因的突變率約為30%，但在亞洲人群中有至少1個CYP2C19功能缺失基因的CHD患者比例超過50%，其中PM約占10%[17]，與本研究結果相近。廣東肇慶地區CHD患者CYP2C19的IM與PM所占比例達50%以上，提示患者攜帶CYP2C19*2和*3的功能缺失型等位基因概率較大，易導致CHD患者使用氯吡格雷進行抗血小板治療效果降低，從而使患者的心血管不良事件發生率增加。因此，鑒于本地區CHD患者CYP2C19的IM和PM所占比例較高，建議首次使用氯吡格雷的患者在條件允許的情況下進行CYP2C19基因檢測，以及時知曉患者的基因型，提高診療水平，從而調整抗血小板治療策略，為患者提供合理的個體化治療方案，旨在降低CHD患者心血管不良事件的發生率，減少患者住院天數，使患者真正獲益。