東風(fēng)菜表型對(duì)揮發(fā)油化學(xué)成分及抗氧化活性的影響研究

梁偉坤，羅世東，蘇偉敏，謝小理，余永志，余培南

（1.梧州市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 梧州 543000；2.梧州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣西 梧州 543002；3.梧州市皮膚病防治醫(yī)院，廣西 梧州 543000）

0 引言

東風(fēng)菜（學(xué)名：Aster scaber Thunb.）又名盤龍草、草三七、鉆山狗等，是一種多年生菊科植物，我國(guó)東風(fēng)菜的分布較為廣泛，東北部、中部、東部，南部等地區(qū)均有分布，東風(fēng)菜一般于灌叢、草地、坡地上生長(zhǎng)，根莖、全草均可入藥，于春秋兩季，味辛、甘，性寒[1-2]。東風(fēng)菜中含有維生素C、胡蘿卜素及纖維素等營(yíng)養(yǎng)元素，作為一種營(yíng)養(yǎng)豐富的食用植物，也具有較為突出的藥用價(jià)值，《浙江民間常用草藥》中記載有民間將東風(fēng)菜應(yīng)用于毒蛇咬傷的治療[3]。東風(fēng)菜還具有較為突出的清熱解毒、活血止痛、祛風(fēng)行氣等功效，《中國(guó)藥用植物志》中記載有東風(fēng)菜可用于風(fēng)毒壅熱、肝熱眼赤、頭痛目眩等病癥的治療[4]。現(xiàn)階段臨床診療中，東風(fēng)菜常用于腸炎、風(fēng)熱感冒、跌打損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、咽喉腫痛、毒蛇咬傷等疾病的治療。

東風(fēng)菜的藥用研究主要圍繞東風(fēng)菜根，有研究就東風(fēng)菜根的主要化學(xué)成分進(jìn)行了分析與鑒別，同分離出五種甾醇類化合物，近年來伴隨對(duì)東風(fēng)菜研究的逐步深入，部分研究發(fā)現(xiàn)東風(fēng)菜中富含多種具有抗病毒、抗腫瘤、抗氧化的活性成分，如咖啡酰基奎尼酸衍生物、次囊酸三萜皂苷/（－）3，5-dicaffeoyl-muco-quinic acid等，我國(guó)民間也將本藥應(yīng)用于抗癌治療及慢性支氣管炎干預(yù)[5-7]。現(xiàn)階段關(guān)于東風(fēng)菜揮發(fā)油化學(xué)成分的研究較少，本文主要就產(chǎn)于廣西區(qū)內(nèi)的不同表型東風(fēng)菜的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析與鑒別，并就抗氧化活性進(jìn)行研究，從而明確東風(fēng)菜表型對(duì)揮發(fā)油化學(xué)成分及抗氧化活性的影響，為后期東風(fēng)菜的開發(fā)、種植工作的開展提供部分思路。

1 研究材料與儀器

選擇產(chǎn)于廣西區(qū)內(nèi)的兩種表型東風(fēng)菜，鑒定均為菊科植物東風(fēng)菜 Doellingeria scaber，分別記為東風(fēng)菜a、東風(fēng)菜b，陰干后粉碎備用。主要試劑及儀器：C7～C30正構(gòu)烷烴對(duì)照品，二氯甲烷，1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），分析純，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（型號(hào)：7890A/5975C 型），氣相色譜儀（型號(hào)：7890A型），蒸餾萃取儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號(hào)：Rotavapor R-210型），電子天平，高速粉碎機(jī)（型號(hào)：LFP-2500A型），超凈工作臺(tái)等。

2 方法

2.1 兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油的提取。稱定兩種表型東風(fēng)菜各200 g，分別置入清潔干燥的5 L圓底燒瓶?jī)?nèi)，同時(shí)倒入2.5 L蒸餾水進(jìn)行浸泡，時(shí)間控制在8 h左右。再取兩個(gè)清潔干燥的500 mL圓底燒瓶，分別加入150 mL二氯甲烷，利用蒸餾萃取儀進(jìn)行萃取，時(shí)間為8 h。將兩圓底燒瓶?jī)?nèi)的二氯甲烷層分出，并加入適量無水硫酸鈉，置于-20℃的冰箱內(nèi)冷凍干燥，8 h后取出過濾，通過旋蒸法去二氯甲烷，剩余物即為揮發(fā)油，置入無菌干燥的密封容器內(nèi)，并做好表型標(biāo)記，置于-20℃的冰箱內(nèi)冷凍保存?zhèn)溆肹8]。

2.2 兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油成分分析。初始60℃的Agilent HP-5MS石英毛細(xì)管柱，保持3 min后，以每分鐘4℃進(jìn)行升溫，至230℃后保持3 min，分流比設(shè)置為30:1，進(jìn)樣量1μL。色譜條件為接口、離子源溫度分別為150℃、30℃。溶劑延遲180 s，掃描范圍30～500 m/z，相對(duì)含量依據(jù)峰面積歸一化法進(jìn)行明確，通過數(shù)據(jù)檢索及保留指數(shù)（RI）明確成分。RI測(cè)定時(shí)采用C7～C30正構(gòu)烷烴對(duì)照品于相同色譜條件下，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析，測(cè)定保留時(shí)間，并通過線性公式進(jìn)行揮發(fā)油各組分RI值得測(cè)定。

2.3 抗氧化活性評(píng)估。采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法進(jìn)行兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油抗氧化活性的評(píng)定[8]，將DPPH與甲醇溶液混合，分別配置成0.1 mmol/L濃度的溶液，母液采用5 g/L揮發(fā)油、5 g/L維生素C的甲醇溶液，于96孔板進(jìn)樣，空白對(duì)照采用甲醇。避光在37℃的環(huán)境下孵化30 min，于517 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行吸光度的測(cè)定，并通過公示計(jì)算出DPPH自由基清除率，自由基清除率＝[1－（不同濃度揮發(fā)油加DPPH的吸光度－不同濃度揮發(fā)油不加DPPH的吸光度）/無揮發(fā)油的DPPH吸光度]×100%。

3 結(jié)果

3.1 兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油化學(xué)成分分析與對(duì)比。通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析出兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油種類數(shù)十種，相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為東風(fēng)菜a87.45%，東風(fēng)菜b86.12%，其中以β-萜品烯、棕櫚酸、反式-β-金合歡烯、吉馬烯D、對(duì)傘花烴-8-醇、石竹烯等為主要揮發(fā)油化學(xué)成分，a、b兩種表型東風(fēng)菜各類揮發(fā)油化學(xué)成分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)、RI等存在一定差異，具體見表1。

表1 兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油化學(xué)成分分析

3.2 兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油的抗氧化活性分析。東風(fēng)菜a、b兩種表型揮發(fā)油對(duì)DPPH均有一定的自由基清除能力，清除率與揮發(fā)油濃度相關(guān)，伴隨揮發(fā)油濃度的增加，自由基清除率呈現(xiàn)逐漸升高趨勢(shì)，但不同濃度的揮發(fā)油自由基清除率均低于維生素C，東風(fēng)菜a、b兩種表型揮發(fā)油的DPPH自由基清除率存在一定差異，詳見表2。

4 討論

《中藥大辭典》中關(guān)于東風(fēng)菜的記載，其全草、根均可入藥，可清熱解毒、祛風(fēng)止痛，近年來伴隨東風(fēng)菜藥理作用研究的深入，證實(shí)東風(fēng)菜具有免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)保護(hù)、調(diào)脂降糖、抗腫瘤、抗病毒等多種功效[9-10]。揮發(fā)油是東風(fēng)菜的主要化學(xué)成分，本文主要就兩種不同表型東風(fēng)菜的揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行了鑒定分析，結(jié)果顯示揮發(fā)油種類達(dá)數(shù)十種，以β-萜品烯、棕櫚酸、反式-β-金合歡烯、吉馬烯D、對(duì)傘花烴-8-醇、石竹烯等為主，其中石竹烯具有較好的抗菌消炎、鎮(zhèn)咳止痛的效果，棕櫚酸屬于飽和脂肪酸之一，在人體中含量豐富，具有較好的平衡調(diào)節(jié)功能[9]。相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果示東風(fēng)菜a87.45%，東風(fēng)菜b86.12%，東風(fēng)菜表型對(duì)揮發(fā)油化學(xué)成分會(huì)有一定的影響。同時(shí)兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油的抗氧化活性分析中顯示，東風(fēng)菜a、b兩種表型揮發(fā)油對(duì)DPPH均有一定的自由基清除能力，伴隨揮發(fā)油濃度升高，自由基清除率逐漸增加，但均低于維生素C，東風(fēng)菜a、b兩種表型揮發(fā)油的DPPH自由基清除率存在一定差異[10]。

表2 兩種表型東風(fēng)菜揮發(fā)油的DPPH自由基清除率分析

綜上所述，東風(fēng)菜中揮發(fā)油化學(xué)成分豐富，具有一定的抗氧化活性，且會(huì)在一定程度受到東風(fēng)菜表型的影響。