首發精神分裂癥病人血清微小 RNA-24-2、微小 RNA-30b 的檢測水平及意義

雷雨，劉偉，包黎

作者單位：武漢市精神衛生中心精神科，湖北 武漢 430022

精神分裂癥（episode schizophrenia，ES）是一種慢性、遺傳性精神障礙，病因目前尚未明確，主要有免疫和病毒學假說，ES 病人臨床癥狀主要有陽性癥狀、陰性癥狀及認知功能障礙、情緒異常等。首發的精神分裂癥病人一般較為年輕、病程短、社會功能缺損程度較輕，其病人長期服用抗精神藥物會引起心血管死亡，對病人病程發展和預后有著深遠影響 ，但目前缺乏ES診斷相關的生物學指標。陽性與陰性癥狀量表（positive negative syndrome ccale ，PANSS）評分是為評定不同類型精神分裂癥病人嚴重程度而設定的標準化量表評分，主要適用于成年人，由經量表使用訓練的精神科醫師對病人做檢查，再綜合有關信息進行評定，但一般ES病人臨床癥狀與其它類精神疾病相似 ，難以正確判斷。 微小 RNA（microRNA，miRNA）在中樞神經系統中含量非常豐富，可作為新的調節因子參與神經系統發育的各個階段，目前許多種 miRNA 已被證實在 ES 病人體內異常表達，可能影響 ES 發病，其中 mir-24-2、mir-30b 在中樞神經系統疾病、精神類疾病病人中表達異常，進而引發神經系統紊亂，可能影響疾病發生。但是目前仍未有關于 ES 病人體內血清 mir-24-2、mir-30b 表達水平的研究。因此，本研究分別通過檢測首發 ES（first ES，FES）病人血清中 mir-24-2、mir-30b 表達水平，探討 FES 病人血清中mir-24-2、mir-30b 水平與 PANSS 評分的關系，為血清mir-24-2、mir-30b 作為生物學指標評價 ES 發生的早期危險性提供一定的參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

前瞻性選取 2016年 11月 至 2018年 9月于武漢市精神衛生中心就診的 98例FES 病人為研究對象（FES 組），病程（16.27±3.31）月；同期選取 76例健康體檢者作為對照（對照組）。本研究中所有病人均由主治醫師明確診斷，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求，所有受試對象近親屬均由專業人員詳細告知研究內容并簽署知情同意書。

納入標準：①符合國際疾病分類第十一次修訂本（ICD-11）精神與行為障礙（草案）關于精神分裂癥和其他原發性精神障礙診斷標準；② 智力正常者；③首次發病，入組前未服用過抗精神并藥物者；④無攻擊行為和自殺傾向。排除標準：①伴有急慢性感染疾病及各種免疫疾病者；②伴有嚴重的心、腦、肝、腎等器質性疾病者；③有其它精神障礙性疾病或腦器質性疾病，如：癡呆、抑郁癥、癲癇、精神發育遲緩等；④妊娠期或哺乳期婦女；⑤精神活性藥物濫用史。

收集病人入院時一般資料，包括性別、年齡、體質量指數（BMI）、FES 病人病程、受教育年限、吸煙史、飲酒史。

1.2 主要試劑與儀器

RNA提取試劑盒（貨 號R1200-100），購自北京索萊寶科技有限公司；反轉錄試劑盒（貨號 KL266），購自上海康朗生物科技有限公司；SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（貨號 RR820A），購自北京百奧創新科技有限公司 ；Rox reference dye（貨號 XY320），購自上海信裕生物科技有限公司。ABI 7700 實時熒光定量 PCR 儀，購自美國 Applied Biosystems 公司。

1.3 研究方法

1.3.1 樣品采集及保存 采集兩組受試者清晨空腹靜脈血樣，3 000 r∕min 離心 15 min 后收集血清，置于-80 ℃保存待測。

1.3.2 血清 mir-24-2、mir-30b水平測定采用

RNA 提取試劑盒提取兩組受試者血清總 RNA，反轉錄試劑盒將 RNA 反轉錄為互補 DNA（cDNA）。采用實時熒光定量 PCR 儀對目的基因 mir-24-2、mir-30b和內參 U6 進行擴增。反應體系共 10 μL：cDNA 模板（50 mg∕L）1 μL，正反向引物（10 μmol∕L）各 0.4 μL，SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（2×）5 μL，Rox reference dye（50×）0.2 μL，雙蒸水 3.0 μL，引物由上海生工生物公司設計并合成（引物序列見表1）。反應條件：95 ℃ 10 min；94 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，40 個循環。每個樣品重復 3 次。采用 2法對兩組受試者血清中 mir-24-2、mir-30b 表達水平進行定量分析。

表1 實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（qRT-PCR）引物序列

1.3.3 PANSS 評分PANSS 由 7 項陽性癥狀、7 項陰性癥狀及 16 項一般精神病理癥狀組成。本研究采用 PANSS 中的 P1、P3、P5、G9 項目評估陽性癥狀，N1、N2、N3、N4、N6、G7 項目評估陰性癥狀，P2、N5、G11 項目評估認知功能，P4、P7、G8、G14 項目評估興奮狀態，G2、G3、G6 評估抑郁情緒。每個項目分為 7級評分：7 分極重度，6 分重度，5 分偏重，4 分中度，3分輕度，2 分很輕，1 分無癥狀。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別、年齡等一般資料比較，均差異無統計學意義（

P

＞0.05），見表2。

表2 兩組首發精神分裂癥（FES）一般資料比較

2.2 兩組 PANSS 評分比較

FES 組 PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分顯著高于對照組（

P

＜0.05），見表3。

表3 兩組首發精神分裂癥（FES）陽性與陰性癥狀量表（PANSS）評分比較∕（分）

2.3 兩組受試者血清 mir-24-2、mir-30b 水平比較

FES 組血清 mir-24-2、mir-30b 水平顯著高于對照組（

P

＜0.05），見表4。

2.4 FES病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平與PANSS 評分相關性

FES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平與 PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分均呈正相關（

P

＜0.05），見表5。

表4 兩組首發精神分裂癥（FES）受試者血清 mir-24-2、mir-30b 水平比較

表5 首發精神分裂癥（FES）病人血清中 mir-24-2、mir-30b水平與陽性與陰性癥狀量表（PANSS）評分相關性

2.5 血清中 mir-24-2、mir-30b 水平對FES的診斷價值

分別以血清中 mir-24-2、mir-30b 單個指標及兩者聯合預測值為檢驗變量繪制 ROC 曲線，結果顯示 ，血清 mir-24-2 診斷FES的曲線下面積（AUC）為0.863（95%

CI

：0.808～0.919），截斷值為 1.407，特異度為 93.4%，靈敏度為 68.4%；血清 mir-30b 診斷 FES的 AUC 為 0.856（95%

CI

：0.801～0.911），截斷值為1.913，特異度 為 84.2%，靈敏度為 76.5%；兩者聯合診斷 FES 的 AUC 為 0.936（95%

CI

：0.899～0.973），特異度為 88.2%，靈敏度為 89.8%。

3 討論

ES 是一組癥狀群組成的臨床綜合征，通常青壯年時期起病，ES 發病率、復發率、致殘率均較高且治愈率低，病人需長期服用抗精神藥物緩解，但長期服用此類藥物易造成心源性猝死、心血管死亡等嚴重后果。因此尋找特異性較高的生物學指標，快速、客觀地實現 ES 的正確診斷，是精神病學領域的一大難題。

miRNA 是一類高度保守的內源性單鏈非編碼RNA，廣泛存在于真核細胞內，長約 22 個核苷酸，可通過調控基因轉錄后過程調控細胞增殖和凋亡。miRNA 可與靶基因 mRNA3' 端非編碼區特異性結合，結合后可影響神經網絡模式，使其表達或沉默，進而干擾神經生物。miRNA 在神經細胞的增殖發育、分化、凋亡及突觸塑形等過程中有著非常重要的作用，且目前有研究表明，許多 miRNA 在 ES 病人體內異常表達，可能與 ES 發病有關。Sun 等研究顯示，miR-30 可調控大鼠神經生成影響海馬區功能。而人類海馬區與學習、記憶等高級認知功能密切聯系，此外海馬區神經功能的異常表達與精神疾病之間存在重要相關性。Sun 等研究結果中顯示 mir-24 在腦梗死病人神經元細胞凋亡中發揮重要作用，提示 mir-24 可能與神經系統疾病關系密切。本研究結果表明，FES 組血清 mir-24-2、mir-30b 水平顯著高于對照組。提示血清 mir-24-2、mir-30b 的高表達可能會影響 FES，且可能對 FES 發病機制和診斷的研究具有重要意義。PANSS 是為評價不同類型 ES 癥狀嚴重程度設計的評定量表，本研究結果顯示 FES 組 PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分顯著高于對照組。FES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平與PANSS 總評分、陽性癥狀評分、陰性癥狀評分、認知評分、興奮評分、抑郁情緒評分均呈正相關。提示血清中 mir-24-2、mir-30b 水平升高可能加重 FES 病人臨床癥狀表現，即加重病人疾病程度。血清 mir-24-2、mir-30b 診斷 FES 的 AUC 分別為 0.863、0.856，特異度分別為 93.4%、84.2%，靈敏度分別為 68.4%、76.5%。提示兩者對 FES 的診斷可能均有重要參考價值 ，且血清 mir-24-2的參考價值可能優于 mir-30b。兩者聯合診斷 FES 的 AUC 為 0.936，特異度為88.2%，靈敏度為 89.8%。提示兩者聯合檢測有助于提高FES的診斷價值，臨床中可將兩者作為參考指標。

綜上所述，ES 病人血清中 mir-24-2、mir-30b 水平高于正常人，血清中 mir-24-2、mir-30b 水平可能與ES 疾病的發生、發展密切相關。血清 mir-24-2、mir-30b 可能對評價 ES 發生的早期危險性有重要意義，對 ES 的診斷具有一定的參考價值。但本研究只通過查閱門診及住院病例來研究，樣本資料的質量、數據的準確性和完整性均會對結果造成一定的影響，此研究存在一定不足。且本研究中血清中 mir-24-2、mir-30b 水平影響 ES 的具體作用機制及兩者之間的互作機制有待深入研究。