基于非洲豬瘟病毒CD2v基因TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立

韓 玉，王 濤，潘 力，孫茂文，周萍萍，王 冰，王 翌，羅玉子，仇華吉，孫 元

(中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所 獸醫生物技術國家重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150069)

非洲豬瘟(African swine fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一種高度接觸性、廣泛出血性的豬烈性傳染病，死亡率可達100%。該病在撒哈拉以南非洲地區已經流行多年，在過去10多年中，主要在高加索地區和東歐地區流行，自2018年傳入中國以來迅速蔓延至全國各地，并存在進一步擴大的風險，給養豬業造成了無法預估的經濟損失[1-2]。

ASFV為非洲豬瘟相關病毒科(Asfarviridae)非洲豬瘟病毒屬(Asfivirus)的成員[3]，也是目前已知的唯一蟲媒DNA病毒，主要通過病豬/帶毒豬及其污染的產品與易感豬之間的直接接觸或通過鈍緣蜱屬軟蜱傳播。ASFV具有嚴格的細胞嗜性，主要感染巨噬細胞(macrophages)和外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)[4]。ASFV基因組為雙鏈閉合線性DNA分子，不同分離株的基因組大小在170～194 kb之間，可編碼160多種蛋白[3-4]。CD2v作為ASFV重要的囊膜糖蛋白，胞外域含有2個免疫球蛋白樣結構域和信號肽，與淋巴細胞CD2蛋白高度同源，可將紅細胞聚集在表達CD2v的細胞表面[5]。CD2v介導的ASFV與紅細胞結合也有助于病毒在動物體內的擴散和免疫逃逸，但具體的分子機制目前未知。另外，目前已經鑒定出CD2v上存在4個T細胞表位區域，這表明在ASFV感染時誘導產生了針對CD2v蛋白的細胞免疫應答[6]。近幾年研究表明，ASFV基因缺失減毒活疫苗是最有希望成功的一種疫苗，中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所構建的7基因缺失病毒(MGF505-1R、MGF360-2R、MGF360-3R、MGF-360-12L、MGF505-13L、MGF505-14L和CD2v)能對中國流行的ASFV強毒株提供完全免疫保護，可作為有效防控中國ASF疫情的疫苗候選株[7]，由此可見，該疫苗候選株具有較好的研發和應用前景。……