新生牛睪丸未成熟支持細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定

高 振，劉 娟，孫 豪，姜 平*，趙志輝 *

(1.廣東海洋大學(xué) 濱海農(nóng)業(yè)學(xué)院，廣東 湛江 524008；2.吉林大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130062)

支持細(xì)胞(Sertoli cells,SCs)是由意大利學(xué)者Enricol Sertoli于1865年首先提出并加以概述的。SCs由早期胚胎生殖脊細(xì)胞發(fā)育而來，顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則圓錐狀，與間質(zhì)細(xì)胞等一起參與睪丸曲細(xì)精管的形成。研究表明，在雄性動(dòng)物睪丸內(nèi)，每個(gè)SCs只能支持有限數(shù)量的生殖細(xì)胞進(jìn)入精子發(fā)生過程，每日精子產(chǎn)量與SCs的數(shù)量存在正相關(guān)[1]。因此，睪丸中SCs的數(shù)量決定了睪丸的最終大小和每天的精子產(chǎn)量[2]。睪丸中的SCs在生長發(fā)育過程中，可被分為未成熟型和成熟型2種。在大多數(shù)物種中，未成熟SCs的增殖在出生后有2個(gè)高峰期，其中第1個(gè)高峰期在胎兒或新生兒時(shí)期，另一個(gè)高峰期在初情期，此時(shí)的SCs為未成熟SCs[3-4]。隨著動(dòng)物個(gè)體的性成熟，睪丸中曲細(xì)精管管腔出現(xiàn)，未成熟SCs逐漸分化為成熟SCs，同時(shí)，細(xì)胞發(fā)生一系列的形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化，包括芳香化酶逐漸減少、FSH受體逐漸增多，并且開始具有合成轉(zhuǎn)鐵蛋白的能力[5]。研究表明，未成熟SCs的數(shù)量和功能將影響動(dòng)物個(gè)體的生精效率和繁殖性能，而成熟SCs會(huì)喪失增殖分化的能力，因此，未成熟SCs的體外分離培養(yǎng)在生殖細(xì)胞的研究中是必不可少的。目前，從睪丸組織中分離SCs的方法包括機(jī)械分離法和酶消化法，但是現(xiàn)有方法普遍存在著分離步驟繁瑣、細(xì)胞純度較低、無法連續(xù)傳代等問題。為了進(jìn)一步深入研究睪丸未成熟SCs的各種功能和發(fā)生機(jī)制，建立一套穩(wěn)定的分離純化和原代培養(yǎng)體系是必要的。……