環狀RNA hsa_circ_0070421對甲型流感病毒復制的影響

張玳寧，于秀華，張 舒，段 銘*

(1.吉林大學 動物醫學學院 人獸共患病研究所 人獸共患病研究教育部重點實驗室，吉林 長春 130062；2.吉林大學 第一醫院，吉林 長春 130021)

環狀RNA(circular RNA，circRNA)是近些年才發現的一種新的內源性非編碼RNA，具有獨特的閉合環狀結構，由前體mRNA反向剪接產生[1]。大約40年前，這些環狀轉錄本被認為是mRNA剪接的副產物[2]，但隨著RNA測序技術的發展，現在已發現數以千計的circRNA。已有的研究結果表明，circRNA表達具有較高的組織特異性和發育階段特異性，且在基因表達調控中具有重要的生理功能[3]，在癌癥、心血管疾病、中樞神經系統疾病等生理病理進程中扮演了重要的角色。

甲型流感病毒(influenza A virus，IAV)，屬于正黏病毒科，單股負鏈RNA病毒，對人類及動物的生命健康具有重大危害，但是宿主編碼的circRNA在IAV與宿主細胞相互作用中的功能及其機制尚不清楚[4]。本實驗室前期基于基因芯片技術分析circRNA在IAV感染A549細胞中的表達，發現hsa_circ_0070421的表達顯著上調[5]。本研究探討了hsa_circ_0070421在IAV感染過程中的表達及其功能，研究結果有助于認知circRNA在IAV與宿主相互作用中的作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑聚肌苷酸胞苷酸(Poly I：C)和大腸桿菌O55：B5的脂多糖(LPS)購自Sigma-Aldrich公司；Cisplatin購自MedChem Express公司；超純瓊脂糖凝膠(UltraPure Agarose)購自Invitrogen公司；抗IAV-M1抗體購自Abcam公司；抗β-actin抗體購自Cell Signaling公司。

1.2 細胞培養A549和THP-1細胞在含有10%胎牛血清(FBS)(HyClone)和100 U/mL青霉素和100 mg/L鏈霉素的RPMI-1640(Corning)中培養；將MDCK、A172、Caco-2和SH-SY5Y細胞維持在含10% FBS的DMED(Corning)中培養，并置于37℃、4%CO2培養箱中生長。

1.3 病毒和病毒感染將流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)在11日齡雞胚尿囊腔中增殖。用PBS洗滌細胞，并用感染復數(MOI)=3的病毒與含有1 mg/L TPCK處理的胰蛋白酶(Sigma-Aldrich)的培養基一起孵育1 h，吸附后，吸出上清液，將細胞培養指定的時間。……