捻轉(zhuǎn)血矛線蟲疫苗候選抗原H11亞型基因的序列結(jié)構(gòu)及啟動(dòng)子活性分析

楊 怡，段麗君，張紅麗，周前進(jìn)，陳學(xué)秋，杜愛芳*

(1.浙江大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 浙江省動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310058；2.寧波市海曙區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)管理服務(wù)站，浙江 寧波 315000；3.浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江 杭州 310058；4.寧波大學(xué) 海洋學(xué)院，浙江 寧波 315211)

捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchuscontortus)寄生于牛、羊等反芻動(dòng)物真胃，引起宿主貧血、營養(yǎng)不良甚至死亡[1]。目前該病的防治主要依賴抗蟲藥物的使用，但耐藥性問題日益突出[2]，迫切需要研發(fā)新型綠色環(huán)保的防控措施[3]。疫苗研發(fā)是當(dāng)前捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病防控方法中熱門的研究方向之一。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲微粒體氨肽酶H11是現(xiàn)階段最有效的疫苗候選抗原之一。H11天然提取物具有出色的抗蟲效果[4-5]，但體外重組蛋白卻不能誘導(dǎo)有效的免疫保護(hù)[6]，這可能與H11蛋白特殊的空間構(gòu)象及存在多個(gè)亞型密切相關(guān)。

研究證實(shí)H11存在多種蛋白亞型，包括H11-1、H11-2、H11-3和H11-4等[7]。本實(shí)驗(yàn)室最先分離獲得的H11(H11-3)亞型基因完整ORF為2 919 bp，編碼972個(gè)氨基酸，基因組大小為14 959 bp，擁有25個(gè)外顯子和24個(gè)內(nèi)含子[8]；后續(xù)也獲得了H11-4的ORF，大小為 2 916 bp，編碼971個(gè)氨基酸[9]。研究發(fā)現(xiàn)，利用昆蟲細(xì)胞與大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)獲得的H11(H11-3)重組蛋白免疫山羊后，產(chǎn)生的抗體能與天然H11發(fā)生交叉反應(yīng)，但免疫保護(hù)力低，不能提供針對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染的有效保護(hù)，沒有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值[10]。利用RNAi技術(shù)對感染性L3幼蟲進(jìn)行H11干擾處理，再感染捻轉(zhuǎn)四矛線蟲山羊糞便蟲卵量減少57%、蟲荷減少40%，這表明單一的H11亞型可能不能提供完全的免疫保護(hù)[11]，但是仍有作為疫苗候選抗原的潛力。……