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食用菌多糖及其生物活性的研究進(jìn)展

2021-06-18 02:31:06馬傳貴張志秀鮑文輝
食藥用菌 2021年3期
關(guān)鍵詞:生物

馬傳貴 張志秀 鮑文輝

食用菌多糖及其生物活性的研究進(jìn)展

馬傳貴1張志秀1鮑文輝2*

(1. 北京京誠生物科技有限公司,北京 102600;2. 麗水市農(nóng)林科學(xué)研究院,浙江 麗水 323000)

在當(dāng)前代謝綜合征病例不斷增加的情況下,營養(yǎng)膳食補(bǔ)充劑和無副作用的療法開始發(fā)揮重要作用。而食用菌多糖顯示出巨大的功效和前景,已有許多研究從抗氧化、抗炎、抗癌、降糖、抗菌、降脂到免疫調(diào)節(jié)等方面,評估了其與食用菌多糖的生物學(xué)相關(guān)性。將這些研究的關(guān)鍵成果應(yīng)用于功能性食品和免疫調(diào)節(jié)劑的開發(fā)是體現(xiàn)食用菌多糖功效的重要途徑。全面綜述食用菌多糖的結(jié)構(gòu)、提取、純化,以及生物活性的研究進(jìn)展。

食用菌多糖;結(jié)構(gòu);生物活性;提取;研究進(jìn)展

相傳在春秋戰(zhàn)國時期,木耳等食用菌經(jīng)常出現(xiàn)在帝王的宴席上。由孔子門人記述的《禮記》一書中記載:“芝栭,皆人君燕食所加庶羞也。”[1]《呂氏春秋》中也有“和之美者,越駱之菌”的描述。遠(yuǎn)在2 000多年前的《淮南子》一書中,首先出現(xiàn)“千年之松,下有茯苓”的記述。成書于東漢末年的我國最早的藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》記述的365種藥物中就有十幾種大型真菌,書中詳細(xì)記載了它們的形態(tài)、顏色和功用等。隨著健康飲食意識的廣泛傳播,食用菌因富含多糖、多酚、蛋白質(zhì)、煙酸、鉀、核黃素、硒、維生素D和膳食纖維等重要營養(yǎng)成分的優(yōu)點(diǎn)脫穎而出,成為備受喜愛的日常膳食之一[2]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已觀察到食用菌多糖的藥用價值,近30年來從食用菌中分離出大量的多糖和多糖-蛋白復(fù)合物,其中一些成為治療疾病的藥物。

1 食用菌多糖的結(jié)構(gòu)

多糖是由中性糖和(或)糖醛酸單體通過糖苷鍵連接在一起組成的碳水化合物長鏈,參與生物的生命過程,如胚胎發(fā)育及病毒和細(xì)菌感染的細(xì)胞免疫[3]。食用菌中含有許多類型的多糖,包括巖藻糖、半乳糖、甘露糖和木糖的雜多糖,其中最常見的是作為儲存成分的糖原類葡聚糖[4]。食用菌細(xì)胞壁由兩種主要多糖組成,一種是由纖維素或甲殼素構(gòu)成的剛性纖維結(jié)構(gòu),另一種是由α-葡聚糖、β-葡聚糖和糖蛋白組成的類似基質(zhì)的結(jié)構(gòu)[5]。

β-葡聚糖是研究最廣泛的食用菌多糖,其結(jié)構(gòu)與細(xì)菌和植物有所不同,主要由(1→3)-β-D-葡萄糖主鏈組成,通常在O-6位置分支,帶有β-D-吡喃糖單元或其他低聚糖[6]。食用菌β-葡聚糖的結(jié)構(gòu)特征(圖1)和生物活性因來源不同而異,其中一些如香菇多糖、裂裥多糖等,在中國、日本和韓國等國已被公認(rèn)為免疫制劑[7]。

圖1 香菇多糖(a)和裂裥多糖(b)的結(jié)構(gòu)圖

天然存在的多糖結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,學(xué)術(shù)界對其沒有統(tǒng)一的界定。復(fù)合多糖的結(jié)構(gòu)單元(來源于糖殘基)非常相似,但它們的分化(多樣化的連鎖方式)比氨基酸更具有包容性。多糖的一級結(jié)構(gòu)是由糖苷鍵的構(gòu)型與位置、單糖的組成與序列,以及附加的非糖基的性質(zhì)、數(shù)量和位置來定義的。單糖分析提供了精確的單糖摩爾比,并可能暗示存在特定的低聚糖類別,如N-或O-聚糖。單糖成分分析包括所有糖苷鍵的斷裂、所得單糖的分餾,以及每個單糖的檢測和定量。20世紀(jì)90年代初,高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測(HPAEC-PAD)被開發(fā)出來,以補(bǔ)充傳統(tǒng)方法,結(jié)合電子轟擊質(zhì)譜(EI-MS)裂解方法,以及核磁共振波譜分析等被廣泛應(yīng)用到食用菌多糖分析中。

2 食用菌多糖的提取

為了有效地提取多糖,食用菌的子實(shí)體或培養(yǎng)菌絲體通常要經(jīng)過一系列的分離純化步驟,從提取前的預(yù)處理開始,如用有機(jī)溶劑脫脂和酒精預(yù)處理去除低分子量雜質(zhì);隨后,提取的粗多糖可通過乙醇沉淀、脫蛋白(Sevag法、蛋白酶酶解法或三氟乙酸法)、脫色(活性炭、過氧化氫或樹脂法)、透析和分餾(親和、纖維素柱、凝膠過濾或離子交換色譜法)[8, 9]。食用菌多糖的提取階段很關(guān)鍵,其決定了食用菌多糖的回收率、單糖組成、分子量、結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型,同時對分離出的多糖生物活性有著很大的影響[10, 11]。

由于食用菌中的大多數(shù)功能性多糖都是水溶性的,因此可使用水提取法并輔以加熱、超聲波、微波等物理技術(shù)提取[12]。盡管大多數(shù)多糖是極性分子,在水或堿性溶液中高度可溶,但高分子量的多糖往往溶解度差、粘度高,而包括某些β-葡聚糖在內(nèi)的一些不溶性多糖需要更長的提取周期或更高的溫度或壓力才能有效提取[13, 14]。而食用菌多糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性,也阻礙了多糖從細(xì)胞內(nèi)和復(fù)雜基質(zhì)中的釋放。采用熱水提取(HWE)和酸堿提取(AE)等傳統(tǒng)食用菌多糖提取技術(shù),需要較長的處理時間(最多24 h)和較高的操作溫度(50~100 ℃)[15, 16]。但高操作溫度會導(dǎo)致蛋白質(zhì)的凝固、多糖結(jié)構(gòu)的改變和溫度敏感型生物活性化合物的降解;而延長處理時間則會導(dǎo)致大量不良細(xì)胞壁成分(如果膠)、組織碎片和細(xì)胞碎片的釋放,從而需要更高的凈化成本。

因此,以食用菌多糖提取為核心的先進(jìn)技術(shù)得到迅速發(fā)展,如超聲輔助提取(UAE)、微波輔助提取(MAE)、酶輔助提取(EAE)、超聲-微波協(xié)同提取(UMSE)、亞臨界水萃取(SWE)、脈沖電場輔助萃取(PEFAE)、雙水相萃取(ATPE)、集成萃取技術(shù),以及其他新型萃取技術(shù),包括納米粒子技術(shù)、勻漿萃取、真空萃取、氧化電位水萃取等。然而,其中一些技術(shù)因提取成本高及對食用菌品種的限制,尚不能廣泛應(yīng)用于食用菌多糖的提取,如UMSE、PEFAE、ATPE等所集成的新技術(shù)[17, 18]。

3 食用菌多糖的活性

食用菌多糖具有生物活性,可起到生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的作用。最新研究證明其具有許多潛在藥理和治療作用,如抗氧化、抗突變、抗HIV、抗炎、抗凝、抗輻射、抗疲勞、抗腫瘤增殖、降血糖、保肝降壓、調(diào)節(jié)免疫、減少膽固醇和體脂等[19, 20]。

3.1 抗腫瘤作用

研究顯示,食用菌多糖可與腫瘤細(xì)胞表面受體結(jié)合及相互作用,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,對腫瘤具有顯著的抑制作用,包括肉瘤180實(shí)體癌、埃利希實(shí)體癌、37肉瘤、吉田肉瘤和Lewis肺癌[21, 22]。食用菌多糖可發(fā)揮以下抗腫瘤作用:一是口服藥用食用菌多糖預(yù)防腫瘤的發(fā)生(防癌活性);二是通過激活宿主機(jī)體的免疫反應(yīng)增強(qiáng)對腫瘤的免疫力(免疫增強(qiáng)活性);三是直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡(直接抑瘤活性)。其中免疫增強(qiáng)活性是其發(fā)揮抗腫瘤作用的主要機(jī)制。食用菌多糖一般不直接殺死腫瘤細(xì)胞,而是幫助宿主適應(yīng)各種生物脅迫,并對宿主產(chǎn)生非特異性作用,其對人體無傷害,無副作用,因此被認(rèn)為是生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(BRMs)。食/藥用菌多糖的防癌活性已在眾多菇農(nóng)群體中被證實(shí),如種植日本金針菇和巴西姬松茸的菇農(nóng)群體,其癌癥死亡率明顯低于一般人口的40%[23]。

3.2 免疫調(diào)節(jié)作用

影響多糖生物活性的因素有很多,如分子量(MW)、單糖組成、糖醛酸含量、一級結(jié)構(gòu)、水溶性、支鏈數(shù)、分支類型和程度(DOB)、聚合物電荷、空間構(gòu)型、糖苷鍵類型等。其中支鏈β-(1→3)/(1→6)-葡聚糖是食用菌中最具生物活性的多糖,能夠刺激免疫系統(tǒng),尤其是DOB在0.2~0.33之間的食用菌[24, 25]。已有很多研究報道食用菌多糖具有極好的免疫調(diào)節(jié)潛力。Zhou等發(fā)現(xiàn)分子量為2.6 ?kDa的灰樹花多糖可顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO和分泌細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-δ)[26]。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)灰樹花子實(shí)體中有一種26.2 ?kDa的水溶性均相多糖,是小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6的有效誘導(dǎo)劑;它與樹突狀細(xì)胞相關(guān)的Dectin-1結(jié)合,而致Syk(蛋白酪氨酸激酶)的激活、NF-κB信號傳導(dǎo)[27]。

3.3 降血脂功效

膽固醇與患冠心病風(fēng)險之間的相關(guān)性引起了廣大消費(fèi)者對其的警覺。而食用菌多糖在降低膽固醇方面的功效也引起人們的重視。如經(jīng)純化的30~38 kDa杏鮑菇多糖對脂質(zhì)積累有較強(qiáng)的抑制作用,這種由甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成的多糖能夠干擾巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的發(fā)育。泡沫細(xì)胞被認(rèn)為是早期動脈粥樣硬化的標(biāo)志。研究還發(fā)現(xiàn),對鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病小鼠給予卡介菌多糖30天,可導(dǎo)致TC、TGs、LDL-C濃度降低,HDL-C濃度升高[28]。食用菌中的β-葡聚糖的可發(fā)酵性和在人體腸道中形成黏性溶液的特性使其在降血脂方面起著至關(guān)重要的作用[29]。

3.4 抗菌和抗病毒活性

黑木耳粗多糖對食源性致病菌大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有體外抗菌活性[30]。杏鮑菇多糖硫酸酯也能抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌[31]。Wan等還觀察到靈芝硫酸多糖對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、腸炎沙門氏菌、沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、宋內(nèi)志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌ATCC 292123具有劑量依賴性的抗菌作用[32]。香菇多糖對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和黃體八疊球菌有抗菌作用[33]。添加黑米糠的香菇多糖對沙門氏菌脂多糖誘導(dǎo)的小鼠內(nèi)毒素血癥具有保護(hù)作用;在另一個平行研究中,同樣的香菇多糖組分可通過激活巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)來預(yù)防沙門氏菌病[34]。從黑木耳中提取多糖,用氯磺酸-吡啶法對其進(jìn)行化學(xué)修飾,發(fā)現(xiàn)天然多糖和硫酸多糖對新城疫病毒的體外培養(yǎng)均表現(xiàn)出抑制作用,而硫酸多糖具有更高的療效[35]。

3.5 抗糖尿病功效

糖尿病占流行病的比例,在世界范圍內(nèi)呈驚人的上升趨勢。當(dāng)前已有大量關(guān)于抗糖尿病的研究。如Kanagasabapathy等研究了富含β-葡聚糖的平菇多糖對C57BL/6?J小鼠的體內(nèi)抗糖尿病和抗炎作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)富含β-葡聚糖的平菇多糖通過上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT-4)和脂聯(lián)素基因的表達(dá),同時下調(diào)炎癥標(biāo)志物IL-6、TNF-α、SAA2的表達(dá),改善了葡萄糖耐量,減輕了高血糖和胰島素抵抗[36]。來自梭柄松苞菇(CVP-1S)子實(shí)體的多糖顯示出具有抗氧化、降血脂和降血糖活性,并對STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠的肝、腎和胰腺有保護(hù)作用[37]。

3.6 抗炎活性

炎癥是機(jī)體對于刺激的一種防御反應(yīng),表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。如果不加以控制,會導(dǎo)致慢性疾病,如結(jié)腸炎、糖尿病、癌癥、神經(jīng)損傷等。多磺酸粘多糖在一些體外和體內(nèi)研究中顯示出抗炎作用,但針對人類的臨床研究非常有限。食用菌多糖在抗炎方面的作用被廣泛綜述,也逐漸被大眾了解和認(rèn)知[38]。食用菌中的β-葡聚糖可影響促炎(IL-1β、IL-6和TNF-α)和抗炎(IL-10)細(xì)胞因子的產(chǎn)生[39]。香菇多糖是最著名的治療炎癥的β-葡聚糖。其中,Yosuke等通過監(jiān)測體重、疾病活動指數(shù)(DAI)、炎癥癥狀、髓過氧化物酶(MPO)、NO、MDA和促炎因子的表達(dá),用以評估食用菌β-葡聚糖的抗炎作用及其分子機(jī)制[40]。Schwartz等研究指出,食用菌葡聚糖可以作為炎癥抑制劑用于預(yù)防或輔助治療炎癥性腸病(IBD)[41]。

4 總結(jié)與展望

綜上,已有大量研究揭示食用菌多糖具有多種生物活性。通過基因工程、發(fā)酵、提取和結(jié)構(gòu)修飾等技術(shù),可以提高食用菌多糖的產(chǎn)量和生物功效,并將其應(yīng)用于保健品和藥品領(lǐng)域。以β-葡聚糖為基礎(chǔ)的真菌療法有可能作為輔助治療方案來緩解許多疾病。盡管食用菌具有很大的治療潛力,但其產(chǎn)業(yè)仍處于初級階段。目前被開發(fā)的具有潛在生物活性的食用菌β-葡聚糖種類非常少。食用菌β-葡聚糖提取和純化技術(shù)的局限性及復(fù)雜的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系阻礙了其市場的開發(fā)前景。通過對β-葡聚糖的復(fù)雜結(jié)構(gòu)及其生物活性的深入研究,并輔以體內(nèi)外試驗(yàn)和臨床試驗(yàn),有望克服這些瓶頸。將民間醫(yī)學(xué)和實(shí)驗(yàn)室的研究成果轉(zhuǎn)化為主流醫(yī)療方法的時機(jī)已日臻成熟。隨著對有效治療藥物需求的激增,上述建議應(yīng)得到重視。未來在較為成熟的技術(shù)和知識儲備背景下,具有廣譜、無毒的新型食用菌多糖生物活性藥物必將實(shí)現(xiàn)量產(chǎn)。

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Research progress on extraction and bioactivity of polysaccharides from edible mushrooms

Ma Chuangui1Zhang Zhixiu1Bao Wenhui2*

(1. Beijing Jingcheng Biotechnology Company Limited, Beijing 102600, China; 2. Lishui Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Lishui, Zhejiang 323000, China)

With the current increasing cases of metabolic syndrome, nutritional dietary supplements and therapies without side effects have begun to play an important role. And edible mushroom polysaccharides show great efficacy and prospects. Many studies have evaluated their biological relevance to edible mushroom polysaccharides from the aspects of anti-oxidation, anti-inflammatory, anti-cancer, hypoglycemic, antibacterial, lipid-lowering to immune regulation, etc. Sex. Applying the key results of these studies to the development of functional foods and immunomodulators is an important way to reflect the efficacy of edible mushoom polysaccharides. A comprehensive review of the research progress on the structure, extraction, purification, and biological activity of polysaccharides from edible mushrooms.

edible mushroom polysaccharide; structure; biological activity; extraction; research progress

S646

A

2095-0934(2021)03-196-06

馬傳貴,男,中藥師,中醫(yī)預(yù)防保健調(diào)理師。主要從事食藥用菌栽培、生理及功能產(chǎn)品開發(fā)相關(guān)研究和科普工作。E-mail:lingzhichina@126.com。

鮑文輝(1962—),男,本科學(xué)士,推廣研究員,長期從事食藥用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究和推廣工作。E-mail:syjbwh@126.com。

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