基于網絡藥理學與分子對接技術探討益肝草涼茶解酒保肝的作用機制

王雅芝，張建永，段燦燦

（1.遵義醫科大學藥學院，貴州遵義 563000；2.遵義醫科大學基礎藥理教育部重點實驗室暨特色民族藥教育部國際合作聯合實驗室，貴州遵義 563000）

肝臟是人體內最大的腺體，在人的代謝、膽汁生成、解毒、免疫等過程中均起著非常重要的作用，是人體內的一個巨大“化工廠”。隨著我國人民飲食結構和生活環境的改變，飲酒逐漸增多，酒精性肝病（Alcoholic liver disease，ALD）等肝病的患病率正在迅速增加[1]。目前，西藥在治療ALD 等肝病具有一定作用，但仍存在一定的毒副反應[2]，中藥方劑在治療肝病上有悠久的歷史，具有多成分、多靶點、多環節綜合作用的特點，且安全性較高。因此，從復方中藥，特別是藥食兩用中藥中挖掘治療ALD 等肝病的藥物稱為當下的熱點。

益肝草涼茶是貴州省貴定縣非物質文化遺產飲品，其主要成分由梔子、甘草、枸杞子、大棗、葛根、苦丁茶、魚腥草、覆盆子、蒲公英組成，具有解酒保肝的作用，尤其可以明顯緩解酒后常見的胃腸不適、口干、惡心、頭痛等癥狀。現代藥理學研究發現益肝草涼茶能夠提高小鼠乙醇脫氫酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶的活性，清除自由基、降低小鼠血清中乙醇、乙醛的含量，達到解酒保肝的效果[3]。然而益肝草涼茶中化學成分復雜，其解酒保肝的有效成分及相應的作用機制尚不清楚。

網絡藥理學（Network pharmacology）是以系統生物學和生物信息學為基礎，其可通過藥物改善或恢復生物網絡平衡的角度來認識藥物與機體間的作用關系。現代網絡藥理學的研究策略與復方中藥從整體和系統方面治療疾病的的特點具有相通性，為傳統復方，如半夏瀉心湯、清熱利膽湯等中藥藥效物質基礎及作用機制研究提供了新的手段[4-7]。因此本研究擬采用網絡藥理學的方法，從靶點預測、網絡分析及分子對接深入揭示了益肝草涼茶解酒保肝作用的藥理機制，如圖1 所示。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

中藥系統藥理學數據庫和分析平臺（TCMSP）；中醫藥綜合數據庫（TCMID）；中藥分子機制生物信息學分析工具（BATMAN-TCM）；PubChem 數據庫；SwissTargetPrediction 數據庫；TargetNet 數據庫；UniProt 數據庫；比較毒理基因組學數據庫(CTD)；功能關聯蛋白網絡數據庫（STRING）；生物學信息注釋數據庫（DAVID）；RCSBPDB 數據庫；Cytoscape 3.7.1 軟件；AutoDock 軟件。

1.2 實驗方法

1.2.1 化學成分收集與篩選 本研究運用中藥系統藥理學數據庫和分析平臺（TCMSP，http://ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php），以甘草、枸杞子、大棗、梔子、苦丁茶、魚腥草、覆盆子、葛根為關鍵詞，檢索8 味中藥的全部化學成分；運用中醫藥綜合數據庫（TCMID，http://www.megabionet.org/tcmid/）、中藥分子機制生物信息學分析工具（BATMAN-TCM，http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/）結合文獻報道[8-9]查找蒲公英中的化學成分。以化合物口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性（DL）≥0.18 作為活性成分的篩選條件，篩選出9 味中藥的活性成分。

1.2.2 靶點的預測與構建 通過PubChem 數據庫下載活性成分的化學結構，其中PubChem 數據庫未收錄的成分，運用ChemDraw 軟件進行畫圖，將所有活性成分保存為SDF 格式文件，并上傳SwissTarget Prediction（http://www.swisstargetprediction.ch/）數據庫獲取每個成分對應的SMILES 號，然后上傳TargetNet（http://targetnet.scbdd.com/calcnet/index/）數據庫進行靶點預測，以AUC≥0.7、預測概率（Prob）＞0.9 作為篩選條件，預測得到益肝草活性成分的相關靶點。采用Cytoscape3.7.1 軟件構建“中藥-成分-靶點”網絡，進一步采用Networkanalysis 插件對網絡特征指標度（degree）和介數（Betweenness）進行分析，篩選出益肝草涼茶的關鍵活性成分。

1.2.3 疾病靶點的篩選與構建 通過UniProt（https://www.uniprot.org/）數據庫，限定物種為“Homo sapiens”，校正靶點為標準基因名，得到益肝草涼茶作用于人源的有效靶點。將有效靶點導入CTD 數據庫（https：//ctdbase.org/tools/batchQuery.go）中進行相關疾病的深入分析，篩選出與肝病相關的疾病靶點。

1.2.4 蛋白質-蛋白質相互作用（PPI）網絡的構建與分析 基于STRING 平臺將所獲取的疾病靶點導入數據庫，獲取蛋白間的相互作用關系，將結果保存成TSV 格式并導入Cytoscape 3.7.1 軟件繪制相互作用網路，刪除重復和孤立邊，以節點（node）大小和顏色設置用于反映網絡連接度（degree）的大小，邊（edge）的粗細設置用于反映結合分數的大小，獲得益肝草涼茶作用靶點蛋白-蛋白相互作用網絡圖。

1.2.5 靶點蛋白的基因功能與通路分析 為進一步分析靶點蛋白的基因功能及其參與的主要信號通路，利用DAVID（https：//david.ncifcrf.gov）在線數據庫對PPI 網絡中的作用靶點進行基因功能及信號通路富集分析，Select Identifier 設置為OFFICIALGENESYMBOL，List Type 設置為Gene List，限定物種為Homo Sapiens，獲取作用靶點參與的主要信號通路，并使用ImageGP 在線平臺對富集分析結果進行可視化分析，從而進一步了解益肝草涼茶的保肝作用機制。

1.2.6 整合核心網絡分析 將上述的活性成分、作用靶點和靶點所富集的主要信號通路等信息整合到Excel 表格中，分別導入Cytoscape3.7.1 軟件中，運用Merge 功能，將其合并得到中藥-活性成分-作用靶點-主要通路的分析網絡，從而進一步探討益肝草涼茶解酒保肝作用的整體藥理機制。

1.2.7 分子對接 采用AutoDock 軟件對“中藥-活性成分-作用靶點-主要通路”網絡中度值前4 的靶點蛋白與關鍵成分進行分子對接驗證，并用已上市的抗炎保肝藥物[10]熊去氧膽酸膠囊（Ursodeoxycholic Acid Capules）、雙環醇片(Bicyclol Tablets)進行對照分析。首先通過RCSBPDB（http://www.rcsb.org/）數據庫獲取靶點蛋白晶體結構，篩選條件如下：a.通過X-晶體衍射獲得蛋白質結構；b.蛋白質的晶體分辨率小于3.5 μ；c.優先選擇文獻中報道與靶點蛋白相關的結構；d.該生物體為Homo sapiens。再利用AutoDock 對接軟件將篩選出來的蛋白晶體結構去水加氫、對分子結構進行能量優化，分別保存為PDBQT 文件；運用OpenBabel 軟件將關鍵成分及熊去氧膽酸膠囊、雙環醇片的化學結構SDF 格式轉化為PDB 格式。使用其插件AutoGrid 得到對接活性位點并計算格點能量，最后運用Pymol 軟件對對接結果進行可視化分析。

2 結果與分析

2.1 化學成分篩選與靶點預測

本研究共收集到益肝草涼茶中化合物共1043 個。以OB≥30%和DL≥0.18 為篩選條件，化合物分子中有214 個符合條件，其中包括來自甘草93 個，來自枸杞子45 個，來自大棗15 個，來自梔子15 個，來自苦丁茶9 個，來自魚腥草7 個，來自覆盆子7 個，來自蒲公英5 個，來自葛根4 個。經去除重復值得到186 個化合物，以C1-C186 命名，將其作為活性化合物。運用TargetNet 數據庫進行靶點預測，選取得分在0.9 以上的靶點，共得到298 個靶基因。利用Cytoscape3.7.1 軟件，將益肝草涼茶的9 味中藥、186 個活性成分和298 個相關靶點建立可視網絡拓撲圖，如圖2 所示。通過網絡圖中可以看出甘草和枸杞子中的活性成分較多，可能是益甘草涼茶中關鍵藥味。度（degree）是網絡節點中心性指標，節點度值越大表明節點的中心性越高。運用Network analysis 插件對網絡特征指標進行分析，根據degree 值將排名前30 的活性化合物進行分析，如表1所示。其中degree 排名前10 的活性成分鞣花酸、沒食子酸、槲皮素、油酸乙酯、二十碳五烯酸、香豆素、番紅花酸、山柰酚、5-羥基-7-甲氧基-2-（3,4,5-三甲氧基苯基）色原酮和熊竹素作為益肝草涼茶中可能發揮作用的關鍵成分。根據degree 值對靶點的大小進行設置，靶點越大表明degree 值越大，其中degree 排名前10 的靶點主要是前列腺素G/H 合酶1（PTGS1）、多酚氧化酶2（PPO2）、花生四烯酸15 脂氧合酶（ALOX15）、誘導型一氧化氮合酶（NOS2）、碳酸酐酶6（CA6）、巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、Toll 樣受體9（TLR9）、雌激素受體α（ESR1）、雌激素受體β（ESR2）和芳香化酶（CYP19A1）。上述靶點具有較多的作用配體，且Betweenness Centrality 相對較高，進一步說明這些靶點在益肝草涼茶保肝解酒網絡環節中的重要性。

表1 中藥-活性成分-靶點網絡中度值排名前30 的化合物信息Table 1 Information of the top 30 compounds in the traditional Chinese medicine-active ingredient-target network

圖2 中藥-活性成分-靶點網絡圖Fig.2 Network diagram of traditional Chinese medicine-active ingredient-target

2.2 靶點-疾病網絡的構建與分析

通過UniProt 數據庫，校正靶點為標準基因名，得到益肝草涼茶中作用于人源的有效靶點有238 個。將篩選出來的有效靶點運用CTD 進行疾病相關分析，篩選條件P-Vaule≤0.01，篩選出與肝病相關的疾病有15 種，涉及78 個疾病靶點，如表2 所示。然后將上述靶點和益肝草涼茶中所含的每味中藥進行歸屬，獲得每味中藥對應的靶點信息，采用TBtools 軟件繪制Upset Plot[11-12]，如圖3 所示。從圖中左側的條形圖可以看出甘草的疾病靶點個數最高（Set size=65），再次證實甘草可能是益肝草涼茶中的關鍵藥味。通過分析右側點陣部分和上部分條形圖發現，益肝草涼茶中9 味中藥共有的疾病靶點有23 個，甘草特有的疾病靶點有6 個，苦丁茶和覆盆子特有的疾病靶點各1 個，并且各味中藥之間均具不同數量的共同靶點，表明藥味之間存在相互協同。

圖3 疾病靶點在益肝草涼茶中9 味中藥的分布圖Fig.3 Distribution map of 9 traditional Chinese medicines in Yigancao herbal tea

表2 有效靶點作用于肝病的信息Table 2 Information of effective targets acting on liver disease

2.3 PPI 網絡的構建與分析

將上述78 個疾病靶點導入STRING 蛋白互作數據庫，限定來源為Homo sapiens，選擇high confidence(0.9)，獲取靶點之間相互作用關系，保存其TSV 格式文件并導入Cytoscape3.7.1 軟件進行互作網絡的拓撲學分析，共涉及48 個節點，84 條邊，如圖4 所示。其中節點表示蛋白，每條邊表示蛋白與蛋白之間的相互作用關系。以節點顏色深淺表示度值的大小，顏色越深代表該節點度值越大，表明該節點越關鍵。其中度值最高的兩個靶點分別是淀粉樣β 前體蛋白（APP，degree=11）和α-2B 腎上腺素能受體（ADRA2B，degree=8），說明這兩個靶點是益肝草涼茶保護肝臟的關鍵靶點。

圖4 靶蛋白PPI 網絡Fig.4 Target protein PPI network

2.4 GO 生物進程分析和KEGG 通路富集分析

利用DAVID 在線數據庫對益肝草涼茶的PPI網絡中涉及的48 個作用靶點進行GO 功能和KEGG 通路富集分析，以GeneRatio、P 值以及調控通路上的基因個數來衡量GO 和KEGG 富集程度，其中GeneRatio 代表基因的富集程度，P 值代表基因富集在每個條目的顯著性差異。結果顯示生物過程（BP）共得到175 個Go-terms，主要涉及氧化還原過程、血壓負調節、磷脂酶C 活性的正調控、外源性藥物分解代謝過程、對脂多糖的反應、胞漿鈣離子濃度的正調節等相關生物進程；分子功能（MF）共捕獲59 個Go-terms，主要涉及與酶結合、血紅素結合、氧化還原酶活性、鐵離子結合、蛋白激酶結合等方面；細胞成分（CC）共富集得到24 個Go-terms，主要涉及質膜、質膜的組成部分、胞漿、細胞內膜結合細胞器等方面。分別將BP、MF 和CC 根據P≤0.01 進行排序，各篩選出前10 個Go-terms 繪制氣泡圖，如圖5A、5B、5C 所示。KEGG 分析共得到51 條信號通路，以P≤0.01 進行篩選，得到22 條富集程度較高的信號通路。包括癌癥的途徑（Pathways in cancer）、鈣信號通路（Calcium signaling pathway）、神經活性配體-受體相互作用（Neuroactive ligandreceptor interaction）、5-羥色胺能突觸（Serotonergic synapse）、cGMP-PKG 信號通路（cGMP-PKG signaling pathway）、鞘脂信號通路（Sphingolipid signaling pathway）等，如圖5D 所示。

圖5 活性成分相關靶點功能及通路注釋分析Fig.5 Analysis of target function and pathway annotation of active components

2.5 成分-靶點-通路整合網絡分析

將益肝草涼茶的活性成分、作用靶點和靶點所富集的主要信號通路等信息導入Cytoscape3.7.1 軟件中，整合構建“中藥-活性成分-靶點-通路”網絡，直觀地呈現出9 味藥材、186 個活性成分、48 個作用靶點及8 條主要信號通路之間的關系，具體見如圖6所示。該網絡由247 個節點，1630 條邊組成，從中可以看出甘草中的活性成分最多（degree=92），枸杞子次之（degree=45），可能是益肝草涼茶中的關鍵藥味。進一步通過網絡分析得知：有73 個活性成分可作用于10 個以上的靶點（degree≥10），說明它們在益肝草涼茶解酒保肝療效中具有重要作用；在靶點中，誘導型一氧化氮合酶（NOS2）、前列腺素G/H 合酶1（PTGS1）、雌激素受體α（ESR1）、芳香酶（CYP19A1）的度值最高，分別是115、109、103、102；在信號通路中，Pathways in cancer、Calcium signaling pathway、Neuroactive ligand-receptor interaction、Serotonergic synapse 這 4 條通路 的degree 排名靠前，可能是益肝草涼茶發揮解酒保肝作用的重要通路。所以說，益肝草涼茶的活性成分可作用于多個靶點，同時參與到多條信號通路中，構成了一個具有多成分、多靶點、多通路的整合網絡。

圖6 中藥-活性成分-作用靶點-主要通路網絡圖Fig.6 Network diagram of traditional Chinese medicine-active ingredient-action target-main pathway

2.6 關鍵成分與4 種靶點蛋白的分子對接

為了進一步驗證上述得到的關鍵成分和重要靶點的準確性，運用AutoDock 軟件將“中藥-活性成分-作用靶點-主要通路”網絡中度值前4 的NOS2、PTGS1、ESR1、CYP19A1 分別與“活性成分-靶點”網絡中篩選出來的10 個關鍵成分進行分子對接，選取熊去氧膽酸膠囊、雙環醇片作為對照藥，以自由結合能（binding energy）作為篩選條件，結合能越小表示對接結果越好，比較關鍵成分與對照藥自由結合能的高低，判斷其療效。對于多構象的對接結果，篩選出結合能最低的對接構象，如表3 所示。通過表3分析得知，在PTGS1、ESR1、CYP19A1 中與關鍵成分的對接結果均強于兩種陽性對照藥，其中關鍵成分香豆素、番紅花酸的對接結果最好。運用Pymol 軟件，根據結合能的大小選出每個靶點蛋白對接最好的前2 位化合物進行可視化分析，結果如圖7 所示。其中香豆素與NOS2、PTGS1、CYP19A1 均可以形成氫鍵，氫鍵鍵長分別是1.9、2.1/3.4、2.3/2.2/2.3，與靶點ESR1 未形成氫鍵；CYP19A1 與鞣花酸對接可以形成三個氨基酸殘基，分別是SER-90、GLY-117、LYS-376，并且其結合能力高于對照藥，表明它們是潛在的作用靶點。因此，根據分子對接技術對益肝草涼茶的關鍵成分與靶點蛋白結合能力分析，表明益肝草涼茶對肝臟具有保護作用，而且為其進一步研究提供理論依據。

圖7 NOS2、PTGS1、ESR1、CYP19A1 與結合能排序最低的前2 位化合物的最佳對接構象Fig.7 The best docking conformation of NOS2,PTGS1,ESR1,CYP19A1 and the first two compounds with the lowest binding energy

表3 關鍵成分及對照藥與NOS2、PTGS1、ESR1、CYP19A1 的結合能Table 3 Binding energy of key components and control drugs with NOS2,PTGS1,ESR1 and CYP19A1

3 討論

天然藥物作為我國的傳統醫藥，歷史悠久、資源豐富。中醫古籍以及中醫藥現代研究發現許多單味藥材和復方具有肝臟保護作用，如清熱解毒利濕類的茵梔黃注射液、復方夏枯草、龍膽瀉肝湯等；疏肝理氣類的柴胡疏肝散、芍藥甘草湯、逍遙散等；補腎健脾益氣養血類的復方五仁醇膠囊、養陰軟肝顆粒等；活血化瘀類的血府逐瘀湯、活絡舒肝膠囊、赤芍、丹參、地龍等[13]。現代藥理研究表明很多天然藥物也能有效治療或改善肝損傷疾病，如枸杞多糖[14]；蒲公英甾醇[15]；熊果酸[16]。益肝草涼茶共由9 味中藥組成，具有清熱解毒，補脾益氣，護肝利膽，利尿，緩瀉，退黃疸等功效，已在市場銷售和使用。目前國內外學者對其單味藥材的研究甚多，但9 味藥材聯合發揮作用的活性成分及作用機制尚不清楚，為了使益肝草涼茶能夠合理應用及推廣，讓更多的消費者從中受益，對其深入研究具有重要意義。

本研究共發現了益肝草涼茶186 種活性成分，篩選出10 種可能發揮作用的關鍵活性成分，包括鞣花酸、沒食子酸、槲皮素、油酸乙酯、二十碳五烯酸、香豆素等。鞣花酸具有明顯的抗炎作用和抑制氧化應激的作用，可以用于治療丙烯酰胺（ACR）引起的肝毒性，還可以通過降低了肝組織中NF-κB，TNF-α，IL-6 和COX-2 的表達對絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT）基因起到治療作用[17-18]。同時鞣花酸和槲皮素可改善肝組織氧化還原狀態，抑制肝臟纖維化相關基因的表達水平[19]；沒食子酸能夠有效地恢復細胞活力，減少乙醇刺激肝細胞釋放天冬氨酸轉氨酶、丙氨酸轉氨酶和乳酸脫氫酶，尤其沒食子酸還可以限制乙醇刺激下的肝細胞壞死，減少不同壞死信號受體相互作用蛋白1（RIP1）和RIP3 的表達，高遷移率族盒蛋白1 的釋放[20]。槲皮素可以通過下調RNA 依賴性蛋白激酶樣ER 激酶（PERK）起到保護肝細胞免受乙醇中毒的作用，降低飲酒后ALT、AST 的升高[21]。香豆素可通過激活Nrf2 信號通路從而保護ALD，并降低酒精性脂肪肝向肝癌的轉化風險[22]，進一步驗證了上述成分是益肝草涼茶發揮作用的主要藥效物質基礎。為了確證益肝草涼茶解酒保肝作用的藥效物質基礎，本研究采用分子對接技術對益肝草涼茶的關鍵成分與“中藥-活性成分-作用靶點-主要通路”網絡圖的度值排名前四的靶點進行對接驗證，以已上市的熊去氧膽酸膠囊、雙環醇片作為對照藥。結果顯示，益肝草涼茶中的關鍵活性成分香豆素、番紅花酸、鞣花酸等6 種對接后結合能優于對照藥，再一次證實了益肝草涼茶對肝臟的保護作用，為治療ALD 提供了科學依據。

通過進一步研究發現，上述活性成分可通過作用于前列腺素G/H 合酶1（PTGS1）、多酚氧化酶2（PPO2）、花生四烯酸15 脂氧合酶（ALOX15）、誘導型一氧化氮合酶（NOS2）、碳酸酐酶6（CA6）、巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、Toll 樣受體9（TLR9）、雌激素受體α（ESR1）、雌激素受體β（ESR2）和芳香化酶（CYP19A1）等靶點發揮解酒保肝的作用。Zhang 等[23]發現ALOX15 基因敲除可通過減少氧化應激、內質網應激、脂質代謝紊亂和細胞死亡信號來預防ALD。MIF 是一種多功能細胞因子，參與機體對損傷后的炎癥反應。研究表明發現抑制MIF 產生有助于治療過度飲酒引起的肝損傷[24]。結合分子對接驗證發現，PTGS1、NOS2、ESR1 和CYP19A1是潛在的作用靶點。NOS2 合成的NO 可以通過熱休克蛋白70 家族（HSP70 家族）和血紅素加氧酶1（Hmox1）的誘導提高肝細胞活力[25]。Khristi 等[26-27]發現ESR1 是肝臟的主要受體，ESR1 的丟失增加了雌性大鼠的體重增加和肥胖，并且ESR1 基因敲除（ESR1-/-）雄性大鼠的代謝紊亂與ESR1 在肝臟中轉錄調控的喪失有關。綜上可知，益肝草涼茶正是通過“多成分-多靶點-協同作用”，實現其解酒保肝的功效。

基于STRING 交互作用網絡數據庫構建益肝草涼茶保肝作用靶點網絡分析，結果顯示其活性成分靶點蛋白間存在相互關系，是一個復雜交互的網絡而并非單獨起作用。GO 分析結果表明，益肝草涼茶活性成分作用的靶點主要富集在氧化還原過程、血壓負調節、磷脂酶C 活性的正調控、外源性藥物分解代謝過程、脂多糖介導的信號通路和胞漿鈣離子濃度的正調節等生物學過程，涉及蛋白激酶、氧化還原酶、血紅素、質膜、細胞內膜結合細胞器等多種物質的參與，是一個復雜的生物學過程。細胞膜受損是肝細胞受損的最基本表現，影響細胞正常生理功能；當細胞膜結構斷裂時，大量的Ca2+內流，造成細胞腫脹，最終導致肝細胞死亡[11]。通路富集分析顯示癌癥的途徑、鈣信號通路、神經活性配體-受體相互作用、5-羥色胺能突觸以及cGMP-PKG 信號通路等是益肝草涼茶作用的主要途徑。在癌癥途徑中，共涉及靶點14 個，劉素彤等人[28]研究發現肝臟內有大量的免疫細胞，巨噬細胞可以通過介導內質網應激（ERS）分泌TNFα 促進NASH 惡性轉化，主要原因是巨噬細胞的免疫M2 表型，M2 極化巨噬細胞常常存在于腫瘤微環境中，這與腫瘤進展密切相關。在鈣信號通路中，共涉及11 個相關靶點，其靶點主要來自甘草中的活性成分，有文獻報道鈣信號轉導失調可導致ROS 形成增加，線粒體去極化，最終導致肝細胞凋亡[29-30]；進一步研究發現肥胖小鼠或脂肪變性肝細胞中受損的鈣信號顯著加重肝臟脂肪變性[31]。中樞和外周神經系統是影響肝細胞色素P450（CYP）功能的重要因素，與重要靶點CYP19A1 密切相關，研究發現去甲腎上腺素能和5-羥色胺能系統也參與了肝臟CYP 的調節，同時多種神經遞質（乙酰膽堿、腎上腺素、多巴胺、5-羥色胺）對肝功能的影響及肝細胞色素氧化酶活性的生理調節也尤為重要[32]。以上研究表明，益肝草涼茶可通過上述成分、靶點、通路發揮解酒保肝的作用。

綜上所述，本研究基于多成分、多靶點、多通路的研究思路，應用網絡藥理學技術，分析益肝草涼茶保肝作用靶點，構建益肝草涼茶保肝作用靶點的交互作用網絡，通過分子對接技術驗證網絡關鍵節點，富集保肝作用相關的生物過程和通路，闡述并驗證益肝草涼茶解酒保肝作用機制，為益肝草涼茶應用于臨床應用提供科學可靠依據，同時也為研究其他復方中藥提供了思路和方法。