指壓法對單純性肥胖模型大鼠炎性細胞因子的影響研究

劉明軍，張曉林，陳邵濤，仲崇文，太宇星，張 龍

（長春中醫藥大學，長春 130117)

單純性肥胖是機體攝入營養過剩，導致脂肪異常堆積和分布且體質量增加的非病理性肥胖。目前全球肥胖人口大約6.3億[1]，中國肥胖人口接近1億。肥胖對健康的影響涉及多個器官，可誘發糖尿病、心腦血管疾病、脂肪肝、關節病變等，甚至導致睡眠障礙、記憶減退、認知障礙等。研究[2-3]表明單純性肥胖慢性低度炎癥狀態及高氧化應激狀態關系密切，研究發現脂肪組織中的IL-6、TNF-α、IL-1β等細胞因子和巨噬細胞分泌因子可能發揮旁分泌作用，激活胰島素靶細胞內的炎癥信號通路，導致胰島素內氨基末端激酶（Jun N-terminal kinase，JNK）、κB激酶抑制劑β（inhibitor of KB kinase，IKKβ）以及其他絲氨酸激酶激活。本研究分析中醫外治法指壓法對單純性肥胖模型大鼠炎性細胞因子的影響，旨在為單純性肥胖慢性病防控提供綠色無痛路徑參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

造模動物采用8周齡SPF級健康SD大鼠40只，雌雄各半，體質量（180±20）g，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司，動物許可證號：SCXK（吉）2019-003。于長春中醫藥大學SPF級動物房基礎飼料適應性喂養7 d后，將大鼠隨機分為空白組和模型組[4]。空白組8只大鼠給予普通飼料喂養，模型組32只大鼠以高脂高糖飼料喂養。造模成功后剔除體質量排序較前與較后的大鼠，將剩余24只模型組大鼠采用電子隨機法分為模型組、指壓組、藥物組（奧利司他）。

1.2 試劑與儀器

瘦素（LP）檢測試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）檢測試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司），白介素-6（IL-6）檢測試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司），Elisa試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司）。Microcen 24高性能小型離心機（西班牙ANALYSIS公司，Microcen 24型），全波長酶標儀（Thermo Fisher SCIENTIFIC公司，Multiskan Sky型）。

1.3 干預方法

指壓組在高脂高糖飼料喂養的基礎上，采用自制壓力顯示按摩棒用5 N的力度在中脘、天樞、關元、足三里進行點按，每穴依次點按30 s，操作4遍，每日治療1次，7 d為1個療程，連續治療6個療程。穴位選取參考《獸醫針灸學》[4]及《實驗針灸學》[5]中的腧穴定位。藥物組在高脂高糖飼料喂養的基礎上，給予奧利司他每天10 mg，將藥物摻雜在食物中并保證順利攝入，喂養6周。空白組和模型對照組分別繼續以普通飼料和高脂高糖飼料喂養6周。所有大鼠為保證環境相同，在相同時間段采用與指壓組相同的抓取和固定。

1.4 指標采集

干預前后體質量；細胞因子表達指標，取全血和血清檢測，白介素-6（IL-6）、瘦素（LP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）均使用酶聯免疫吸附法，由上海哈靈生物科技有限公司提供試劑盒。

1.5 統計學方法

所有實驗數據通過SPSS 26.0軟件進行分析。首先對計量資料進行正態性檢驗以及方差齊性檢驗，符合正態分布且方差齊性，則采用方差分析，再用LSD法進行2組間比較。符合正態分布，但方差不齊則采用非參數檢驗。不符合正態分布應用H檢驗。分析結果以均數±標準差（±s）表示，以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 4組大鼠6周后體質量變化情況比較

見表1。

表1 4組大鼠6周后體質量變化情況比較（±s，n=8） g

表1 4組大鼠6周后體質量變化情況比較（±s，n=8） g

注：與模型組比較，## P＜0.01

組別 干預前 干預后空白組 354.28±8.43 413.85±12.06模型組 461.51±18.36 518.60±18.23藥物組 459.93±17.15 429.92±16.31##指壓組 462.67±19.29 446.92±19.54##

2.2 4組大鼠6周后LP、TNF-α、IL-6細胞因子表達情況比較

表2 4組大鼠6周后LP、TNF-α、IL-6 細胞因子表達情況比較（±s，n=8）

表2 4組大鼠6周后LP、TNF-α、IL-6 細胞因子表達情況比較（±s，n=8）

注：與模型組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與藥物組比較，△△ P＜0.01

組別 LP/（ug·L-1）TNF-α/（pg·mL-1）IL-6/（pg·mL-1）空白組 8.58±0.45 14.21±1.45 93.20±11.32模型組 13.21±1.24 45.22±1.33 267.30±23.35藥物組 9.86±0.78## 36.23±4.56# 223.12±25.26##指壓組 9.12±0.85## 30.12±1.28#△△ 150.64±25.53##△

3 討論

指壓法主要通過持續點按刺激腧穴，有以指代針之意，因此又稱為“指針法”。劉明軍結合單純性肥胖“中滿內熱”“六郁和絡滯”[6-7]的傳統及現代中醫病機認識，基于王之虹、劉明軍等流派主要傳承人總結的“運腹通經”治療理念[8]，創造性提出“指針法”，其主要作用為健運脾胃、消脂化痰[9-10]。通過臨床研究或基礎探索證實，推拿作為中醫傳統外治方法的代表，對單純性肥胖癥等糖脂代謝疾病具有良好的改善效果。

本研究主要通過指壓持續刺激天樞、中脘、關元、足三里等腧穴。天樞作為大腸募穴，是陽明脈氣所發，主疏調腸腑、理氣行滯、消食，推拿該穴對于改善腸腑功能具有顯著的療效；中脘為胃之募，腑之會，又系手太陰、少陽、足陽明、任脈之會所，故指壓該穴以及腹部任脈、臍部有調理中焦氣機、疏理中氣之效，可促進腸胃蠕動、加速代謝，符合“臟腑-經絡相關”理論，胸腹為五臟六腑之宮城，運用上述手法在腹部干預，可起到斡旋氣機，恢復脾胃健運之功效。

本研究初步證實，指壓法可通過持續刺激相關腧穴調節相關臟腑—經絡功能，調控糖脂代謝，降低體脂率，可不同程度抑制單純性肥胖大鼠LP、TNF-α、IL-6的表達水平。機體內部經過系列關聯性的生物復雜過程，最終引發機體脂肪組織代謝性炎癥反應發生。或由于代謝組織細胞內的營養過剩，引起機體細胞內應激反應，活化內質網UPR 途徑（非折疊蛋白反應途徑），促進促炎癥因子產生[11]。體內炎性因子水平升高，引起肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病、脂肪肝等糖脂代謝相關疾病發生[12]。有研究[13-14]表明，改善單純性肥胖患者脂肪細胞內炎癥反應減少炎性細胞因子產生，能夠增加胰島素的敏感性，改善糖脂代謝紊亂，預防心血管事件發生，證明了炎癥狀態在機體肥胖發生發展過程中的重要地位。

綜上所述，單純性肥胖與細胞炎性反應存在一定的內在關系，且指壓法的干預效果可能與對炎性抑制有關。本研究結果初步證明了指壓法可有效降低單純性大鼠體質量，對其炎性細胞因子表達均具有顯著抑制作用，且LP改善效果與藥物接近，僅TNF-α、IL-6改善略低于藥物，說明指壓法可作為單純性肥胖抑制炎性細胞因子表達的減藥干預方法。后續將深入研究指壓法對單純性肥胖炎性反應的作用機制，探索推拿作為肥胖等代謝病的減藥手段可行性，為臨床開展推拿治療單純性肥胖等代謝病提供新的綠色治療路徑。