尿激酶纖溶酶原激活物、可溶性程序性死亡配體1對肝癌切除術后患者臨床預后的評估*

郭力碩 秦曾增

中國人民武裝警察部隊重慶市總隊醫院消化外科 (重慶，400000)

肝癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一，是惡性腫瘤的第二大死亡原因[1]。肝癌惡性程度較高，且病情進展快，患者早期癥狀不明顯，出現臨床癥狀時患者多處于晚期，如不及時診斷治療，患者的平均生存時間約3個月[2,3]。近幾年，隨著醫療技術的發展，肝癌的診斷和治療得到有效提高，但患者的預后仍不太樂觀。尿激酶纖溶酶原激活物(uPA)是由癌細胞分泌的一種絲氨酸蛋白酶，具有水解蛋白和信號傳導等功能，可促進腫瘤細胞發生、增殖等活動[4]。Iwata等[5]研究表明，uPA的高表達與膀胱癌的預后不良有關。程序性死亡配體1(sPD-L1)屬于B7-CD28超家族，在腫瘤細胞上表達可使T細胞衰竭、活性抑制、凋亡和細胞因子生成受損，從而促進腫瘤的生長。sPD-L1可能是由基質金屬蛋白酶裂解細胞膜表面PD-L1而成[6]。sPD-L1在腫瘤免疫、炎性介導等方面發揮著重要作用。劉燦等[7]認為，食管癌患者血清sPD-L1水平升高，sPD-L1升高與患者的死亡風險增加有關。本研究檢測肝癌患者的血清uPA、sPD-L1水平，分析血清uPA、sPD-L1水平與肝癌患者臨床預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2016年6月我科收治的肝癌患者122例(試驗組)，入組標準：①經病理學診斷為原發性肝癌者；②患者均為首次發病，術前未行介入、放化療等其他治療；③臨床資料完整者；④簽署知情同意書者；⑤經醫院倫理委員會批準。排除標準：①繼發性肝癌患者；②合并其他器官惡性腫瘤患者；③妊娠或哺乳期患者；④合并神經系統及自身免疫系統疾病者；⑤臨床資料不完整者。試驗組122例，男72例，女50例；年齡35～75歲，平均(56.41±8.66)歲；腫瘤直徑<5 cm者67例，≥5 cm者55例；腫瘤組織分化程度：高分化33例，中分化41例，低分化48例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ期72例；淋巴結轉移：有53例，無69例。同時，另選取我院體檢中心健康體檢人員(對照組)80例，男50例，女30例；年齡35～70歲，平均(52.47±7.61)歲。兩組受試者的年齡、性別相比，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 檢測方法 肝癌患者均在入院后空腹狀態下抽取外周靜脈血5 ml，對照組于體檢當日采集空腹外周靜脈血5 ml，收集血樣，3 000 r/min 離心10 min，取上清液置于-80℃冰箱保存待測。采用酶聯免疫吸附法檢測兩組受試者血清uPA、sPD-L1水平。血清uPA試劑盒購自上海晶抗生物工程有限公司，血清sPD-L1試劑盒購自上海鑫樂生物科技有限公司。所有操作過程均按照試劑盒說明書嚴格進行。

1.3 患者隨訪 采用門診和電話方式對122例肝癌術后患者隨訪36個月，第1、2年每3個月隨訪1次，第3年每6個月隨訪1次。每次患者門診復查時行腹部超聲、CT等檢查，觀察并記錄肝癌患者術后生存情況，隨訪截止時間為2019年8月。

2 結果

2.1 試驗組與對照組受試者血清uPA、sPD-L1表達水平比較 見表1。

表1 兩組受試者血清uPA、sPD-L1水平比較 (ng/ml)

2.2 肝癌患者臨床病理特征與血清uPA、sPD-L1水平的關系 肝癌患者的血清uPA、sPD-L1水平與TNM分期、組織分化程度、淋巴結轉移和門靜脈癌栓有關，差異有統計學意義(P<0.05)；肝癌患者的血清uPA、sPD-L1水平與腫瘤直徑無關(P>0.05)，見表2。

表2 肝癌患者臨床病理特征與血清uPA、sPD-L1的關系 (ng/ml)

2.3 肝癌不同預后患者血清uPA、sPD-L1水平比較 122例肝癌術后患者隨訪36個月，其中死亡54例，存活68例。肝癌死亡患者血清uPA、sPD-L1水平高于存活患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 肝癌患者不同預后血清uPA、sPD-L1比較 (ng/ml)

2.4 血清uPA、sPD-L1預測肝癌患者不良預后的ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示：血清uPA預測肝癌術后患者不良預后的曲線下面積為0.823(95%CI0.733～0.913，P<0.001)，敏感度和特異度分別為81.0%和73.7%，最佳截斷值為1.81；血清sPD-L1曲線下面積為0.892(95%CI0.825～0.958，P<0.001)，敏感度和特異度分別為83.3%和78.9%，最佳截斷值為10.53，見圖1。

圖1 血清uPA、sPD-L1預測肝癌患者不良預后的ROC曲線分析

2.5 肝癌患者血清uPA、sPD-L1表達水平與生存率的關系 根據血清uPA、sPD-L1最佳截斷值，將肝癌患者分為血清uPA高表達組(uPA≥1.81 ng/ml)71例和血清uPA低表達組(uPA<1.81 ng/ml)51例、血清sPD-L1高表達組(sPD-L1≥10.53 ng/ml)74例和血清sPD-L1低表達組(sPD-L1<10.53 ng/ml)48例。Kaplan-Meier生存曲線分析示：uPA高表達組患者的生存率(40.85%)低于uPA低表達組患者的生存率(76.47%)(χ2=12.40，P=0.001)；sPD-L1高表達組患者的生存率(43.24%)低于sPD-L1低表達組患者的生存率(75.00%)(χ2=6.756，P=0.009)，見圖2。

圖2 肝癌患者血清uPA、sPD-L1表達水平與生存率的關系

3 討論

原發性肝癌是我國常見惡性腫瘤之一，其早期發病隱匿，大部分患者確診時，病情已發展到晚期，且腫瘤容易通過淋巴、血液系統轉移，大部分患者的生存預后較差。近年來隨著人們生活方式和飲食改變，肝癌的發病也呈逐年增加的趨勢，嚴重影響人們的生命安全。目前，手術、放化療等方式治療肝癌取得一定進展，但腫瘤切除后仍易復發、轉移，肝癌患者的生存率較差，我國肝癌患者5年生存率不到20%[8]。因此，尋找鑒定肝癌患者生存預后的血清標志物，對肝癌的臨床治療和決策具有重要意義。

uPA一種多功能的絲氨酸蛋白酶，uPA可以通過降解細胞外基質和基膜(如波形蛋白和纖連蛋白)，參與上皮-間質轉化來加速腫瘤轉移并促進腫瘤血管生成[9]。同時，uPA也可通過激活蛋白酶纖溶酶來誘導腫瘤進展和轉移。研究表明：uPA可與uPAR結合產生的纖溶酶具有傳遞信號作用，且能作用于多種信號通路，使腫瘤細胞出現趨化、遷移、增殖等生物效應行為，與腫瘤預后密切相關[10]。研究發現：乳腺癌組織中uPA表達升高，與乳腺癌的侵襲轉移有關，是乳腺癌患者預后不良的檢測指標之一[11]。Tsai等[12]報道，肝癌患者血清uPA水平明顯升高，血清uPA是影響肝癌患者不良預后的獨立危險因素。sPD-L1是通過基質金屬蛋白酶對mPD-L1的蛋白水解切割而釋放的，可參與機體T細胞的免疫功能調節，且與多種疾病的發生發展有關。sPD-L1是調控機體血管再生、細胞凋亡的生物蛋白標志物，其水平值的變化能夠反映機體新生血管、細胞凋亡能力[13]。同時，sPD-L1在腫瘤微環境中的細胞表達對腫瘤控制和腫瘤發生起重要作用[14]。而sPD-L1水平升高也是腫瘤引起的系統性炎癥的一種信號。Liu等[15]研究發現，神經膠質瘤患者血清sPD-L1水平升高與腫瘤侵略性生物學活性有關，sPD-L1是診斷神經膠質瘤的生物標志物。sPD-L1在預測惡性腫瘤患者的治療反應和預后方面也起著至關重要的作用。Chang等[16]報道，sPD-L1是肝癌術后患者生存預后的獨立危險因素，可預測肝癌患者生存期。

本研究結果顯示，肝癌組患者血清uPA、sPD-L1水平高于對照組，與肝癌患者TNM分期、組織分化程度、淋巴結轉移和門靜脈癌栓有關。肝癌死亡患者血清uPA、sPD-L1水平高于存活患者，說明血清uPA、sPD-L1與肝癌患者的病情進展有關。El-Gebaly等[17]研究發現肝癌患者的血清sPD-L1水平高于對照組，與Child-Pugh評分和ALBI分級有關。Kaplan-Meier生存分析顯示：肝癌患者uPA高表達患者的生存率低于uPA低表達患者的生存率，肝癌患者sPD-L1高表達患者的生存率低于sPD-L1低表達患者的生存率，差異有統計學意義，提示血清uPA、sPD-L1水平升高與肝癌患者的不良預后有關，與既往研究報道相一致[12,17]。ROC曲線結果顯示血清uPA、sPD-L1預測肝癌患者不良預后的曲線下面積大于0.05，說明血清uPA、sPD-L1預測肝癌根治術患者不良預后具有可行性。

綜上所述，肝癌患者血清uPA、sPD-L1水平升高，與患者TNM分期、組織分化程度、淋巴結轉移和門靜脈癌栓有關，血清uPA、sPD-L1水平越高，肝癌患者死亡風險越高，說明血清uPA、sPD-L1可作為肝癌患者臨床預后的評估指標。