一種物理振蕩制備溶血標本的改進方法

武文平，劉冰，佟瑞

（秦皇島市中醫醫院檢驗科，河北 秦皇島）

0 引言

溶血是臨檢工作中最常見的干擾因素，標本溶血后會對血常規、生化、免疫等多項檢測指標結果造成干擾[1-3]。溶血對各項目的影響及相應的補救措施一直是檢驗醫學研究熱點，選用一種合理有效的制備溶血標本的方法是進行相關研究的基礎。物理振蕩法是人工制備溶血標本的常用方法，但在實際操作中，制備高濃度的溶血標本需要很長的振蕩時間，且溶血濃度不理想。本實驗在傳統方法基礎上進行改進，采取預處理措施，提高溶血效果，以期為臨檢工作中快速制備溶血標本提供一種參考方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取秦皇島市中醫醫院2020年1月14日血常規標本20例（HGB 140.25±11.74 g/L），3000 rpm，5min，血漿無溶血（血漿HGB濃度為0 g/L），然后混勻，每例標本平均分為2份，設實驗組和對照組 ；隨機選取2020年1月15日促凝血標本20例[血清血紅蛋白（hemoglobin，HGB） 139.15±11.17 g/L]，每例留取2份血樣，待凝固后，3000 rpm，5min，血清無溶血（血清HGB濃度為0 g/L），設實驗組和對照組。隨機選取2020年1月16日體檢人員20例，抗凝血（HGB 136.40±9.69 g/L）和促凝血（HGB 136.00±8.52 g/L）樣本各留取8ml，立即分為7份，每份1ml，離心后血清或血漿均無溶血。

1.2 方法

1.2.1 實驗組與對照組溶血效果比較

實驗組標本預先3000 rpm，5min離心處理，分離血漿或血清備用，底部血細胞旋渦振蕩5min，加入分離好的原血漿或血清混勻，3000 rpm，5min離心，測上層血漿或血清HGB濃度； 對照組標本旋渦振蕩儀振蕩5min，3000 rpm，5min離心，測上層血漿HGB濃度，采用配對t檢驗比較兩組HGB水平有無差異。

1.2.2 采用上述實驗組方法，研究不同時間振蕩條件下所制備的溶血HGB濃度

將2020年1月16日收集的20例抗凝血和促凝血標本分各為7份，每份1ml，按實驗組方法，分別給予2min、5min、10min、15 min、20 min、25 min、30 min 不同時間振蕩，加入分離好的原血漿或血清混勻，3000 rpm，5min離心，測上層血漿或血清HGB濃度。

1.3 統計學處理

采用SPSS17.0軟件進行統計學處理，服從正態分布的定量資料以（±s）表示，兩組間比較采用配對t檢驗，兩兩間比較采用LSD-t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 實驗組與對照組HGB濃度比較

抗凝血與促凝血的實驗組HGB濃度均明顯高于對照組；差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 實驗組與對照組血漿（血清）HGB濃度比較[（±s），g/L]

表1 實驗組與對照組血漿（血清）HGB濃度比較[（±s），g/L]

組別 n 抗凝血HGB 促凝血HGB實驗組 20 6.55±0.83 7.40±0.88對照組 20 0.85±0.37 0.95±0.39 t 38.803 48.367 P 0.000 0.000

2.2 不同振蕩時間所制備的血紅蛋白濃度

采用實驗組方法，隨著振蕩時間的延長，所制備的標本HGB濃度不斷增加，組間比較差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 不同振蕩時間所制備的血紅蛋白濃度（±s）

表2 不同振蕩時間所制備的血紅蛋白濃度（±s）

注：與2min比較，*P<0.05；與5min比較，# P<0.05；與10min比較，△P<0.05；與15min比較，αP<0.05；與20min比較，βP<0.05；與25min比較，γ P <0.05

振蕩時間（min）抗凝血HGB濃度（g/L） 促凝血HGB濃度（g/L）2 0.80±0.41 0.85±0.37 5 6.10±0.91* 7.45±0.89*10 8.40±1.31* # 9.20±1.11*#15 11.70±1.22*#△ 12.65±1.09*#△20 14.55±1.23*#△α 15.15±1.42*#△α 25 17.55±1.43*#△αβ 18.10±1.33*#△αβ 30 19.65±1.27*#△αβγ 20.15±1.39*#△αβγ

3 討論

物理振蕩法制備溶血標本是通過外部力量破壞紅細胞膜的穩定性，達到溶血目的[4]。不需要添加外來物質（生理鹽水或去離子水），不改變樣本原有成分，非常適用于生化免疫類項目的研究。傳統方法直接將樣本振蕩，制備HGB>5g/L溶血標本，即需要30min以上的振蕩時間。如果要制備>10g/L溶血標本，意味著更長的振蕩時間。采用細針（30號）反復抽吸樣本來制備溶血樣本，操作過程產生大量泡沫，需要長時間靜置才能消除，且只能應用于抗凝血樣本[5]。反復凍融法雖然能取得高濃度的溶血標本，但實驗過程需要反復洗滌、凍融，耗時長。田耘博等[6]用超聲波破壞紅細胞，實現了快速溶血，且建立了不同溶血程度的溶血梯度模型。

本研究從血液中液體成分對細胞膜穩定所起保護性作用的角度出發，預先離心分離血漿或血清，去除紅細胞保護因素，同時拉近了紅細胞之間的空間距離[7]，再對細胞進行振蕩破壞，細胞間的撞擊頻率增加，最終達到了理想的溶血效果。根據實驗結果，如果在時間上加以精確控制，可以制備出與臨檢工作中相符的溶血濃度的樣本，省去了用生理鹽水或去離子水調節溶血濃度的步驟[8-10]。此外，本實驗制備的溶血標本會產生細胞碎片，溶血濃度越高，碎片越多，一部分懸浮在血漿或血清中，可考慮使用高速離心機12000rpm，10min 去除。

改進的物理振蕩法可以快速制備溶血標本，所需設備簡單，在一般實驗室即可開展，為基層醫務工作者制備溶血標本，開展溶血對檢驗項目影響研究提供一種實驗方法[11,12]。