腫瘤壞死因子α刺激基因-6和CXC趨化因子配體8在瘢痕疙瘩不同部位中的表達及意義

胡銀娥

人體皮膚進行創傷修復時，成纖維細胞異常增殖，膠原過度沉積可形成瘢痕疙瘩，呈浸潤性生長，與正常皮膚無明顯邊界，單純手術切除復發率高，嚴重影響病人身心健康。近年來，越來越多的研究表明，成纖維細胞的增殖和凋亡對瘢痕疙瘩的形成有關鍵作用，但具體機制尚不完全明確。腫瘤壞死因子α刺激基因-6（TSG-6）是由腫瘤壞死因子α誘導的炎癥相關基因，已有報道表明，TSG-6可能通過抑制核因子-KB信號通路活性，促進瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡，但關于TSG-6在瘢痕疙瘩不同部位中表達差異的研究尚未見報道。CXC趨化因子配體8（CXCL8）在瘢痕疙瘩組織中異常表達，是病情持續發展的重要原因。本研究通過分析瘢痕疙瘩不同部位中TSG-6、CXCL8的表達，探討TSG-6、CXCL8對瘢痕疙瘩的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

資料概況：瘢痕疙瘩組織均來自2016年3月至2018年10月在河南大學淮河醫院進行手術切除聯合放射療法治療的瘢痕疙瘩病人25例，其中男11例，女14例，年齡范圍12～39歲，年齡（34.24±6.25）歲，發病部位有耳部、前胸、后背，依次為10例、9例、6例。標本經病理學檢查證實，在直視及鏡下區分各標本為浸潤部（與正常皮膚交界處，表面潮紅）、增生部（隆起明顯，暗紅色）、老化部（中央凹陷，色淡）。25例中，浸潤部、增生部、老化部例數分別為12例、11例、2例。

診斷標準：（1）瘢痕超過原損傷邊緣，向周圍正常皮膚組織浸潤生長；（2）瘢痕界限不明確，1年內無自發消退征象；（3）手術切除后復發，且瘢痕范圍超過原范圍。以上符合任意一條即可確診為瘢痕疙瘩。

納入標準：（1）標本來源的瘢痕疙瘩病人在術前6個月未進行任何藥物治療；（2）標本來源病人6個月內未進行任何局部放射治療；（3）病程超過1年；（4）瘢痕疙瘩最大直徑應符合以下標準：2 cm≤耳部≤4 cm；7 cm≤前胸、后背≤10 cm。

排除標準：（1）伴有腫瘤等其他嚴重疾病者。（2）臨床資料不完整者。正常皮膚組織取自本院四肢外傷手術病人，共17例，其中男9例，女8例，年齡范圍21～45歲，年齡（36.81±5.31）歲。所有標本取材均經病人或其近親屬知情并簽署同意書，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 研究方法

浸潤部、增生部、老化部、正常皮膚組織經裂解、離心，保留上清液，用酶聯免疫吸附法檢測TSG-6蛋白、CXCL8蛋白、凋亡相關蛋白B淋巴細胞瘤-2（Bcl-2）、第二個線粒體衍生的半胱天冬酶激活蛋白（Smac）、半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）、黑色素瘤凋亡抑制蛋白（Livin）、p53，以及膠原代謝相關蛋白轉化生長因子-β1（TGF-β1）、I型膠原（COL-I）、基質金屬蛋白酶2（MMP-2）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）。試劑盒均購于上海生工生物公司。

2 結果

2.1 一般資料比較

兩組研究對象性別、年齡、BMI比較，差異無統計學意義（

P＞

0.05），見表1。

表1 瘢痕疙瘩25例與外傷手術17例一般資料比較

2.2 四組皮膚組織TGS-6蛋白、CXCL8蛋白表達量比較

對照組、老化部組、增生部組、浸潤部組相比，TSG-6蛋白表達量依次降低，差異有統計學意義（

P

＜0.05），CXCL8蛋白表達量依次升高，差異有統計學意義（

P

＜0.05），見表2。

表2 瘢痕疙瘩25例與外傷手術17例皮膚組織TGS-6蛋白、CXCL8蛋白表達量比較/±s

2.3 四組皮膚組織凋亡相關蛋白表達量比較

對照組、老化部組、增生部組、浸潤部組相比，Smac、Caspase-3、P53表達量依次降低，差異有統計學意義（

P

＜0.05），Bcl-2、Livin表達量依次升高，差異有統計學意義（

P

＜0.05），見表3。

表3 瘢痕疙瘩25例與外傷手術17例皮膚組織凋亡相關蛋白表達量比較/（ng/mL，±s）

2.4 四組皮膚組織膠原代謝相關蛋白表達量比較

對照組、老化部組、增生部組、浸潤部組相比，TGF-β1、COL-1、MMP-2表達量依次升高，差異有統計學意義（

P

＜0.05），IGF-1表達量依次降低，差異有統計學意義（

P

＜0.05），見表4。

表4 瘢痕疙瘩25例與外傷手術17例皮膚組織膠原代謝相關蛋白表達量比較/（ng/mL，±s）

2.5 瘢痕疙瘩病人TGS-6蛋白、CXCL8蛋白與凋亡相關蛋白表達量的相關性分析

Pearson相關分析顯示，瘢痕疙瘩病人TGS-6蛋白表達量與Bcl-2、Livin均呈負相關，與Smac、Caspase-3、P53均呈正相關（均

P

＜0.05）；CXCL8蛋白表達量與Bcl-2、Livin均呈正相關，與Smac、Caspase-3、P53均呈負相關（均

P

＜0.05），見表5。

表5 TGS-6蛋白、CXCL8蛋白與凋亡相關蛋白表達量的相關性分析

2.6 瘢痕疙瘩病人TGS-6蛋白、CXCL8蛋白與膠原代謝相關蛋白表達量的相關性分析

根據表6的Pearson相關分析顯示，瘢痕疙瘩病人TGS-6蛋白表達量與TGF-β1、COL-1、MMP-2均呈負相關（

P

＜0.05），與IGF-1呈正相關（

P

＜0.05）；CXCL8蛋白表達量與TGF-β1、COL-1、MMP-2均呈正相關（

P

＜0.05），與IGF-1呈負相關（

P

＜0.05）。

表6 TGS-6蛋白、CXCL8蛋白與膠原代謝相關蛋白表達量的相關性分析

3 討論

瘢痕的形成是傷口愈合的自然結果，然而成纖維細胞過度分泌細胞外基質時，可導致瘢痕疙瘩的發生。組織學研究已經表明，膠原等細胞外基質主要由成纖維細胞合成和分泌，成纖維細胞在參與受損組織修復，形成瘢痕過程中發揮重要作用。因此，抑制成纖維細胞增殖或誘導成纖維細胞凋亡是瘢痕疙瘩治療的關鍵。

TSG-6可以抑制膠原Ⅰ、Ⅱ合成，誘導成纖維細胞凋亡，減輕瘢痕病情，已被證實與瘢痕形成密切相關。有研究發現，病理性瘢痕組織中TSG-6呈低表達，發揮著減少細胞凋亡，促進膠原合成代謝的作用。CXCL8能夠調節細胞外基質的合成以及細胞的增殖與凋亡，在瘢痕疙瘩發生中起到促進作用。林苗苗等通過體外實驗發現，抑制瘢痕疙瘩成纖維細胞的增殖，CXCL8表達降低，CXCL8與瘢痕疙瘩的形成關系密切。本研究發現對照組、老化部組、增生部組、浸潤部組相比，TSG-6蛋白表達量依次降低，CXCL8蛋白表達量依次升高，差異有統計學意義。提示TSG-6、CXCL8可能參與瘢痕疙瘩的形成與發展，對應了瘢痕疙瘩呈浸潤式的生長方式。

Bcl-2、Smac、caspase-3、Livin、p53等具有調控細胞凋亡的重要作用。瘢痕疙瘩病人經過治療，成纖維細胞增殖受到抑制，抗凋亡蛋白Bcl-2表達降低，細胞增殖抑制因子P53表達升高，發揮抑制細胞增殖作用。張遠貴等研究了瘢痕疙瘩組織中Smac、caspase-3、Livin的表達，發現與正常組織相比，瘢痕疙瘩組織Smac、caspase-3表達較低，Livin表達較高，筆者分析凋亡抑制因子Livin基因的高表達可能對促凋亡因子Smac、caspase-3基因的表達產生了抑制作用，使得細胞凋亡作用弱于增殖作用，導致了瘢痕疙瘩的形成。本研究發現對照組、老化部組、增生部組、浸潤部組相比，細胞凋亡相關蛋白Smac、Caspase-3、P53表達量均依次降低，Bcl-2、Livin均依次升高，提示細胞凋亡蛋白在瘢痕形成與發展中發揮重要作用。

細胞外基質膠原蛋白的合成和降解失衡是瘢痕疙瘩的重要形成原因。TGF-β1、COL-I、MMP-2、IGF-1表達可以反映膠原代謝變化，瘢痕疙瘩病人瘢痕組織中，COL-1過度沉積，是瘢痕組織的物質基礎。TGF-β1在瘢痕疙瘩組織中表達上調，促進真皮成纖維細胞增殖、膠原形成及分化，也對MMP-2表達有促進作用。IGF-1對膠原蛋白的合成具有一定抑制作用，在病理性瘢痕中呈現低表達。本研究發現對照組、老化部組、增生部組、浸潤部組相比，膠原代謝相關蛋白IGF-1表達量依次降低，TGF-β1、COL-1、MMP-2表達量均依次升高，提示膠原蛋白可能參與瘢痕疙瘩的形成與發展。Pearson相關分析顯示，瘢痕疙瘩病人TGS-6蛋白表達量與Bcl-2、Livin、TGF-β1、COL-1、MMP-2均呈負相關，與Smac、Caspase-3、P53、IGF-1均呈正相關，提示TGS-6可能通過影響瘢痕疙瘩組織中凋亡抑制因子、膠原合成因子及促進促凋亡因子、膠原代謝因子表達，參與瘢痕疙瘩病理進程，或可為瘢痕治療提供參考依據。CXCL8蛋白表達量與Bcl-2、Livin、TGF-β1、COL-1、MMP-2均呈正相關，與Smac、Caspase-3、P53、IGF-1均呈負相關，推測CXCL8可能通過調控纖維細胞凋亡、膠原合成與代謝，參與瘢痕疙瘩的發生發展。

綜上所述，對照組、老化部、增生部、浸潤部皮膚組織中TSG-6蛋白表達量依次降低，CXCL8蛋白表達量依次升高，可能通過調節細胞增殖、凋亡及膠原蛋白合成、代謝，影響瘢痕疙瘩浸潤式生長，參與瘢痕疙瘩的發生發展。但本文也存在不足之處，對瘢痕疙瘩病人進行手術切除聯合放射性療法治療的預后情況并未進行后續分析，另外TSG-6、CXCL8對瘢痕疙瘩影響的具體機制也尚需進一步深入研究，這將是以后的研究重點。