miR-124與HLA-G在宮頸癌中的表達及變化研究

陶國華，謝 瑋，李 荔

南通市第一人民醫院檢驗科，江蘇南通 226001

宮頸癌為女性高發的婦科疾病，根據我國婦科腫瘤流行病學調查結果顯示，2017年以來宮頸癌的發病率呈逐年升高趨勢[1]。人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌發生的關鍵誘因，屬于基因病毒，能夠快速增殖和復制[2]。微小RNAs(microRNAs)是一種小分子的非編碼RNA，能夠通過對DNA片段進行調節，提高細胞的生物活性。miR-124屬于microRNAs中的一種，有研究證實其在肺癌中活性降低，在不同惡性腫瘤中表達也有所差異，miR-124在乳腺癌中通過低表達介導SP1信號改變癌細胞活性[3]。人類白細胞抗原G(HLA-G)是機體重要的免疫耐受分子，隨著對HLA-G研究深入，人們推測HLA-G與惡性腫瘤免疫逃竄具有相關性[4]。本研究旨在探討miR-124與HLA-G在宮頸癌中的表達及變化，為臨床宮頸癌的診斷提供相關依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年1月本院住院治療的65例宮頸癌患者作為研究組，年齡28～75歲，中位年齡47歲。納入標準：(1)根據術后病理結果確診為宮頸癌；(2)接受術后切除或淋巴掃除治療；(3)未接受化學治療；(4)信息齊全。排除標準：(1)合并其他腫瘤；(2)全身感染；(3)接受化學治療；(4)合并重要器官病變。另選取同期在本院進行子宮肌瘤切除的40例患者作為對照組，年齡25～70歲，中位年齡46歲。兩組年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。兩組患者和家屬均了解本研究內容，且簽署知情同意書，本研究經過本院倫理委員會審核批準。

1.2實時熒光定量PCR檢測宮頸組織中miR-124相對表達水平 將兩組患者宮頸組織常規石蠟包埋、脫蠟、水化處理后加入購自中國深圳子科生物的Trizol試劑進行RNA提取，氯仿溶解。采用購自中國上海昂拉儀器的超微量分光光度計計算RNA純度，吸光度A280參考范圍為0.0～2.0，在上述范圍為符合實驗標準。采用武漢純度生物科技有限公司生產的RNA逆轉錄試劑盒將RNA轉錄為cDNA。PCR反應條件：98 ℃ 6 min，98 ℃ 28 s，72 ℃ 30 s，80 ℃ 4 min，總計40個循環，以U6為內參，采用2-ΔΔCT計算宮頸組織中miR-124相對表達水平。見表1。

表1 引物序列

1.3化學發光免疫檢測血清HLA-G水平 分別抽取兩組患者空腹8 h靜脈血4 mL，4 000 r/min離心5 min后，利用美國雅培公司生產的化學發光免疫分析儀檢測血清HLA-G水平，研究步驟如下：按照儀器說明書制備單抗復合物，采用辣根過氧化物結合到固定的載體上，將兩組血清及上述復合物加入鏈霉親和素孔板中，37.7 ℃培養1 h，磷酸鹽緩沖溶液反復沖洗，加入底物，采用全自動化學發光免疫分析儀檢測HLA-G表達水平(波長為425 nm)，檢測范圍：0.5～300.0 ng/mL。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0軟件進行統計分析，非正態分布的計量資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用非參數Kruskai-Wallis秩和檢驗，進一步兩兩比較用Mann-WhitneyU檢驗。計數資料組間比較采用χ2檢驗。繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)，計算ROC曲線下面積(AUC)、靈敏度、特異度等指標。檢驗水準α=0.05。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1對照組與研究組miR-124相對表達水平和HLA-G水平比較 研究組宮頸組織中miR-124相對表達水平低于對照組，研究組血清HLA-G水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組miR-124相對表達水平和HLA-G水平比較[M(P25,P75)]

2.2研究組不同臨床病理指標的miR-124相對表達水平、HLA-G水平比較 研究組宮頸組織中miR-124相對表達水平在國際婦產科聯盟(FIGO)分期、淋巴結轉移、腺體浸潤及脈管浸潤間比較，差異有統計學意義(P<0.05)；而血清HLA-G水平在FIGO分期、淋巴結轉移、脈管浸潤間比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 研究組不同臨床病理指標的miR-124相對表達水平、HLA-G水平比較[M(P25,P75)]

續表3 研究組不同臨床病理指標的miR-124相對表達水平、HLA-G水平比較[M(P25,P75)]

2.3miR-124、HLA-G診斷宮頸癌的ROC曲線分析 miR-124+HLA-G聯合檢測診斷宮頸癌的靈敏度、特異度、AUC均高于miR-124及HLA-G單項檢測結果。見表4、圖1。

表4 miR-124、HLA-G及兩者聯合檢測對宮頸癌的診斷價值分析

圖1 miR-124、HLA-G診斷宮頸癌的ROC曲線分析

3 討 論

宮頸癌產生及發展是一個多環境、多因素的過程。近些年，隨著分子領域研究不斷深入，大量miRNA對多種惡性疾病例如乳腺癌、卵巢癌等具有重要作用[5]。HLA-G分子為機體重要的免疫因子，最初被發現具有參與母-胎界面免疫耐受作用，減少排斥反應。

有研究報道，宮頸癌發展過程中存在大量microRNAs異常表達，其中miR-21能夠加快宮頸癌生物活性，與miR-466表達相似，而miR-320能夠保護宮頸組織，減少癌細胞惡性侵襲，通過調節FOXM1基因發揮作用[6]。熊興東等[7]研究報道，宮頸癌組織中microRNA-124呈低表達趨勢且與癌細胞過度增殖、凋亡不足、侵襲性生長密切相關。王夢潔等[8]研究報道，宮頸癌組織中miR-124水平低于健康宮頸組織，提示miR-124低表達能夠加快癌癥病變。HLA-G是一種生物活性廣泛的免疫指標，其水平升高與Fas受體活化相關，有研究報道，Fas大量活化能夠加快T淋巴細胞凋亡，改變多種細胞抗原提呈能力，加快惡性腫瘤細胞發生免疫逃竄[9]。張欣等[10]研究報道，宮頸癌患者血清HLA-G水平高于健康人群。本研究顯示，研究組宮頸組織中miR-124相對表達水平低于對照組，研究組血清中HLA-G水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。這與LI等[10]研究報道結果相似。

miR-124通過介導宮頸癌細胞發生淋巴結轉移與上皮-間充質轉化(EMT)活性相關，能夠加快癌細胞深層浸潤[11]。有研究報道，miR-124能夠通過升高PDCD6水平，激活有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信號通路,從而促進宮頸癌轉移及遷移[12]。本研究顯示，研究組宮頸組織中miR-124相對表達水平在FIGO分期、淋巴結轉移、腺體浸潤及脈管浸潤間比較，差異有統計學意義(P<0.05)，而血清HLA-G水平在FIGO分期、淋巴結轉移、脈管浸潤間比較，差異有統計學意義(P<0.05)。這提示HLA-G水平越高，宮頸癌淋巴結轉移越快，疾病FIGO分期越高，加快疾病發展。高水平HLA-G能夠減弱自然殺傷細胞功能，減少對宮頸癌細胞的免疫監視作用[13]。冷雪嬌等[14]研究報道，出現淋巴結轉移的宮頸癌患者血清HLA-G升高，說明高水平HLA-G能夠加快宮頸癌癌變。本研究miR-124和HLA-G靈敏度較高，ROC曲線評估miR-124聯合HLA-G對宮頸癌的診斷價值，提示miR-124、HLA-G能夠對宮頸癌診斷提供較高的準確率。王夢潔等[15]研究指出，通過ROC曲線了解到miR-124能夠增加診斷宮頸癌的準確性。

綜上所述，miR-124與HLA-G水平變化與宮頸癌FIGO分期、淋巴結轉移及脈管浸潤有關，二者聯合檢測有望成為宮頸癌診斷的新靶點。