高血細胞比容患者凝血標本采集量的研究*

賴霽佳，劉 琳，高學梅，潘柏莉,陳 艷

西藏自治區人民政府駐成都辦事處醫院檢驗科，四川成都 610041

凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原(FIB)簡稱凝血四項，是術前檢查、血栓和出血性疾病診斷、抗凝治療監測和評估中必須篩查的指標，因此，其檢測結果的準確性具有重要的臨床意義[1-3]。有研究報道，拉薩和阿里地區高原紅細胞增多癥(HAPC)總患病率為2.6%，拉薩地區世居藏族HAPC患病率為1.9%[4]。由于本院是高海拔地區醫療服務的重要后方基地，目前，來本院就診的患者中HAPC發病率較高。據統計，當血細胞比容(HCT)>55%時，如果直接檢測患者的凝血四項，就會造成較大的誤差，為保證檢測結果的準確性和可靠性，需要對采血量進行校準[5-6]。因此，本文對高HCT患者的凝血標本采集量進行相關研究，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年5月至2019年11月來本院就診的130例世居西藏高原的藏族人群作為研究對象，其中男性68例、女性62例，年齡28～78歲，平均(50.53±12.02)歲。納入標準：(1)患者人群55%

1.2儀器與試劑 研究儀器為賽科希德高速全自動凝血測試儀(SF-8200，北京賽科希德科技發展有限公司)；試劑為賽科希德全自動凝血測試儀原裝配套試劑(北京賽科希德科技發展有限公司)，由廠家派遣專業的工程師每半年對儀器進行校準，每日標本檢測前進行凝血質控的分析，確保所有項目在控；凝血真空采集管(江蘇康健醫療用品有限公司)，每支采血管含有109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝劑0.2 mL。

1.3方法

1.3.1標本采集量的計算 根據《全國臨床檢驗操作規程》[7]及文獻[8]報道，在凝血功能檢測中，當HCT為20%～55%的正常范圍內時，血液與枸櫞酸鈉抗凝劑的比例要求是9∶1。凝血標本采血量為2.0 mL，即正常采血量，血漿量為0.81～1.44 mL，滿足檢測要求；當HCT>55%時，抗凝劑與血液的比例須按照公式：抗凝劑(mL)=(100-HCT)× 血量(mL)×0.001 85進行調整，按公式計算得到的采血量即校準采血量[9]。當患者HCT>55%時，滿足血漿量為0.81～1.44 mL，即可滿足血漿與抗凝劑的正常比例范圍，通過計算，采集3.2 mL的血液，此時可滿足HCT為 55%～75%的患者。

1.3.2標本采集和凝血功能檢測 首先選取的20例高HCT患者于清晨空腹情況下進行采血，對同一患者分別采集2.0、2.4、2.8、3.2、3.6、4.0 mL及校準采血量的血液標本，立即將血液與抗凝劑充分混勻，常溫下以3 000 r/min對樣品離心10 min，排除溶血、凝固、脂血、黃疸標本[10-11]，將血漿分離后，在2 h內進行PT、APTT、TT、FIB測定[12]。后續選取的110例高HCT患者于清晨空腹情況下進行采血，同一患者采集3份血液標本：2.0 mL、校準采血量(按公式計算的采血量)和3.2 mL，并以同樣的方法進行PT、APTT、TT、FIB的測定。

2 結 果

2.1不同采血量對凝血四項測定結果的影響 與校準采血量組相比，2.0 mL采血量患者的PT、APTT、TT測定值明顯延長，FIB測定值降低，差異有統計學意義(P<0.05)；2.4 mL采血量患者的PT測定值明顯延長，FIB測定值降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；2.8 mL采血量患者的TT測定值延長，差異有統計學意義(P<0.05)；4.0 mL采血量患者的PT、TT測定值明顯縮短，差異有統計學意義(P<0.05)；而3.2 mL、3.6 mL采血量患者凝血四項檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同采血量對凝血四項測定結果的影響

2.22.0 mL和3.2 mL采血量與校準采血量患者的凝血四項結果比較 與校準采血量患者相比，2.0 mL采血量患者的PT、APTT、TT測定值明顯延長，FIB測定值降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；與校準采血量患者相比，3.2 mL采血量患者凝血四項PT、APTT、TT、FIB測定值比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 2.0 mL和3.2 mL采血量與校準采血量患者的凝血四項結果比較

2.3患者HCT與2.0 mL、3.2 mL和校準采血量的PT、APTT相關性分析 以患者HCT為因變量，2.0 mL、3.2 mL和校準采血量檢測的PT、APTT為自變量，Pearson相關性分析顯示，患者HCT與2.0 mL采血量患者PT、APTT呈正相關(P<0.05)，而與3.2 mL采血量和校準采血量患者的PT、APTT無明顯相關性(P>0.05)。見表3。

表3 患者HCT與2.0 mL、3.2 mL和校準采血量的PT、APTT相關性分析

3 討 論

凝血四項是臨床上用于評價機體凝血功能最常用的篩查指標[11]，其中，PT主要用于篩查外源性凝血途徑中凝血因子的缺乏[13-14]，APTT主要用于篩查內源性凝血途徑凝血因子的缺乏[15]，TT主要反映纖維蛋白原轉化為纖維蛋白的情況，FIB主要反映纖維蛋白原的含量[14,16]。研究表明，影響凝血四項結果的眾多因素中，有70%以上為血液標本采集量、運輸等分析前造成[17]。因此，確保血液標本采集量的準確性對凝血檢測結果至關重要。有研究報道，高海拔人群、新生兒、嚴重嘔吐腹瀉、大面積燒傷患者等均可出現HCT過高的現象[8,18]。當患者HCT>55%時，抗凝劑的使用量或采血量必須進行校準，但使用的凝血采集管已加入固定劑量的抗凝劑，即增加采血量就可達到校準的目的。而HCT需要通過血常規的檢測結果確定，然后計算出校準采血量，進行二次采血，這樣既增加了患者的痛苦，也延遲了凝血功能檢測的時間，更增加了醫療糾紛的風險。為此，研究者進行了高HCT患者凝血標本采集量的研究，以消除二次采血帶來的不便和風險。

先收集20例患者血液進行凝血功能的檢測，以初步探究適用于高HCT患者的替代采血量。本研究結果顯示，與校準采血量相比，2.0 mL、2.4 mL、2.8 mL和4.0 mL采血量患者凝血功能異常，不能替代校準采血量進行凝血功能的檢測，而3.2 mL、3.6 mL采血量患者凝血四項結果與校準采血量相比差異無統計學意義(P>0.05)。而計算結果顯示，采集3.2 mL血液可滿足高HCT患者凝血四項檢測所需血漿量。

本研究結果顯示，與校準采血量患者相比，3.2 mL采血量患者凝血四項PT、APTT、TT、FIB測定值比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，分析其原因，3.2 mL采血量是通過梯度篩選和血漿與抗凝劑的正常比例范圍計算出來的，故3.2 mL采血量與校準采血量的凝血四項測定值基本一致。而與校準采血量患者相比，2.0 mL采血量患者的PT、APTT、TT測定值明顯延長，FIB測定值明顯降低。凝血采集管含有0.2 mL 109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝劑，它能有效地螯合血液中的鈣離子，使鈣離子失去凝血功能，凝血過程被阻斷[18-19]。當標本HCT>55%，若采血量仍為2.0 mL，血液中的血漿量減少，枸櫞酸鈉則會相對過量，使凝血過程中鈣離子不足，導致PT、APTT、TT檢測結果延長，而FIB檢測結果降低，這與文獻[20]研究報道結果一致。本研究Pearson相關性分析顯示，患者HCT與2.0 mL采血量患者PT、APTT呈正相關(P<0.05)，而與3.2 mL采血量和校準采血量患者的PT、APTT無明顯相關性(P>0.05)。這也進一步驗證了3.2 mL可作為適用于高HCT患者的替代采血量。

綜上所述，對絕大多數高HCT患者，臨床上可直接采集3.2 mL血液進行凝血四項的檢測，這樣可極大地降低凝血標本不合格的比例，避免二次采血給患者帶來痛苦，也降低了醫療糾紛的風險，同時也為高HCT患者專用凝血采血管的設計提供了依據。