耳聾基因篩查在遺傳性耳聾預(yù)防與阻斷中的應(yīng)用研究

張俊賢 方炳雄 蔡潔娜 翁文婕 劉琪 洪妙玲

現(xiàn)階段，我國二胎政策全面開放，為更好的保障生育質(zhì)量，需要對其潛在危險因素加強警惕，如先天性耳聾[1]。其是臨床上較為常見的感覺性疾病，是人類最常見的出現(xiàn)缺陷之一，會給患兒的成長發(fā)育及社會生活帶來嚴(yán)重影響，同樣也會給降低患兒家庭幸福指數(shù)。該疾病與醫(yī)療環(huán)境、創(chuàng)傷以及藥物等存在密切聯(lián)系，其中遺傳因素占據(jù)60%，嚴(yán)重影響出生人口素質(zhì)[2]。為更好的保障新生兒的健康成長，及時進行聽力篩查，便于早期發(fā)現(xiàn)新生兒是否有聽力損失現(xiàn)象，及時進行干預(yù)，有助于降低遺傳性耳聾罹患率。以往的聽力篩查只能檢測出已經(jīng)發(fā)生聽力障礙的患兒，對于存在高危風(fēng)險因素特別是遺傳因素所引起的先天性耳聾很難檢出，具有一定的局限性，易延誤患兒接受治療時機。本次研究就醫(yī)院2019年5月—2020年3月出生的新生兒2 280例為研究對象，進行耳聾基因篩查，探討其對在遺傳性耳聾預(yù)防與阻斷中的應(yīng)用研究，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年5月—2020年3月醫(yī)院出生的新生兒2 280例為研究對象。其中男性1 120例，女性1 160例；日齡2～6 d，平均日齡（3.49±0.51）d。本次研究符合醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理會標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過委員會同意；所有新生兒的病情資料完整；新生兒家屬均表示自愿參與，并簽署相關(guān)文件。

1.2 方法

（1）和新生兒家屬耐心進行溝通后，于新生兒足跟部位進行采血，采血過程中遵循無菌操作原則，收集量為2.0～3.0 mL，采集完畢后，按照血斑卡制作要求進行制作；采用血液基因組DNA提取試劑盒（離心柱型），通過破裂細胞以釋放DNA，在高濃度鹽溶液中，核酸吸附在硅類介質(zhì)表面，并在低濃度鹽通液洗脫下來，從而達到提取純化DNA的目的[3]。（2）耳聾基因突變檢測：按照耳聾基因檢測試劑盒 [多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）+導(dǎo)流雜交法] 的操作說明書，測定4個我國常見的耳聾易感基因（GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3）的13個突變熱點。（3）PCR反應(yīng)：核酸擴增反應(yīng)條件：先預(yù)變性95℃，9 min；再95℃ 30 sec，55℃ 30 sec，72℃ 1 min，共40 cycle；最后72℃ 5 min，16℃ 10 sec完成擴增，PCR產(chǎn)物熱變形，成為單鏈DNA，用于與探針雜交[4]。（4）核酸分子雜交技術(shù)：一次性可以檢測出4種耳聾易感基因（GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3）的13個突變位點，最終給出肉眼能夠識別的雜交結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料表示為（±s），計數(shù)資料采用（n，%）表示，組間比較采用χ2檢驗，不符合正態(tài)分布者轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布后行統(tǒng)計學(xué)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

基因篩查結(jié)果：2 280例新生兒中，檢出耳聾基因突變108例，檢出陽性率為4.74%。其中GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3耳聾基因的突變率依次為2.94%、0.79%、0.53%和0.09%。檢出率最高的是GJB2 235delC雜合突變和SLC26A4 IVS7-2A＞G雜合突變，單基因檢出率為2.02%和0.53%。雙基因突變檢出GJB2 176del16/SLC26A4 IVS7-2雜合5例，GJB2 176del16/SLC26A4 IVS7-2雜合4例，詳見表1。

表1 基因篩查結(jié)果（%）（n=2 280）

3 討論

先天性耳聾是一種較為常見的出生缺陷疾病，嚴(yán)重影響生育質(zhì)量，為更好的保障新生兒的健康成長，對該疾病需要做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療，便于幫助患兒遠離疾病的困擾。

以往的常規(guī)聽力篩查診斷價值有限，患兒家屬接受度不高。而本次研究所采用的的遺傳性耳聾基因診斷芯片具有操作簡單、通量高等特點，能夠彌補常規(guī)聽力篩查的不足，在對藥物敏感性耳聾、遲發(fā)型耳聾以及漸進性耳聾篩查方面具有較高的應(yīng)用價值[5-6]。遺傳性耳聾大多是因GJB2、SLC26A4、線粒體DNA、GJB3耳聾基因突變所致，不少研究[7-8]表明，前兩者基因突變是較為常見的耳聾基因，這與本次的研究結(jié)果基本一致，其中GJB2基因突變2.94%和SLC26A4基因突變0.79%，通常是常染色體隱性遺傳，后者基因與大前庭導(dǎo)水管綜合征密切相關(guān)，會導(dǎo)致遲發(fā)型耳聾疾病的發(fā)生，其所引起的聽力損失水平大多是中重度，對新生兒造成的影響較大。及時應(yīng)用耳聾基因芯片篩查方法，能夠提高診斷正確率，建議結(jié)合相應(yīng)的CT、MRI等影像學(xué)檢查結(jié)果做進一步判斷，有助于提高患兒的治療效果；SLC26A4基因和GJB2基因都是以隱性遺傳方式遺傳，通過耳聾基因篩查，能夠?qū)ο忍煨远@疾病進行快速確診，及時采取相應(yīng)的治療方法，能夠以免由聾致啞，且通過長期監(jiān)測患兒聽力，便于及早發(fā)現(xiàn)異常；及時更換治療藥物；線粒體基因同樣也是聽力障礙中較為重要的影響因素，其屬于母系遺傳，通常表現(xiàn)為藥物性致聾[9-10]。目前為止已發(fā)現(xiàn)的線粒體DNA致病變有300多種，其中，聽力障礙和12SRNA基因突變關(guān)系較為密切，可能與細菌感染有關(guān)，對該類基因突變的處理，應(yīng)當(dāng)與抗生素藥物使用史有關(guān)[11]。GJB3基因突變攜帶者，通常表現(xiàn)為后感高頻感音性耳聾癥狀，其在少年時期的聽力無異常表現(xiàn)，而在青壯年時期開始出現(xiàn)聽力下降的癥狀[12]。該檢測方法能夠明確病因，將其應(yīng)用于遺傳性耳聾的預(yù)防與阻斷中，將對聾病的診斷、治療和預(yù)防產(chǎn)生深遠影響。

綜上所述，應(yīng)用遺傳性耳聾基因篩查方法，能夠為預(yù)防與阻斷耳聾患兒的發(fā)生提供參考依據(jù)，有助于提高生育質(zhì)量。