細胞DNA倍體分析系統結合HR-HPV在宮頸癌篩查中的應用

王建 黃種心

宮頸癌已成為發展中國家，僅次于乳腺癌的女性常見惡性腫瘤之一[1]，其發生率為10.4%～18.2%，死亡率為4.1%～12%[2]。近幾年，隨著工作壓力的增加，環境污染日益加重等綜合性因素，宮頸癌及癌前病變的患者與日俱增，且日趨年輕化[3]。人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是常見生殖道感染病毒，16和18型則屬于高危型。高危型HPV持續性感染與多重感染是促使宮頸癌發生的最主要病因。隨著社會性觀念的轉變，性生活過早、性伴侶多的現象普遍，年輕女性感染HPV概率高達80%左右[4]。本研究通過細胞DNA倍體分析系統結合HR-HPV檢測，討論兩者結合的篩查方案在宮頸癌及癌前病變篩查及診斷的臨床意義與應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1—12月醫院1 000例宮頸細胞學標本，年齡20～60歲，均有性生活史，所有患者均做HR-HPV檢測和DNA倍體分析系統檢測，將DNA倍體分析系統的結果結合HR-HPV檢測進行對比分析。

1.2 方法

1.2.1 宮頸標本采集 檢查前3～5 d不做陰道沖洗與用藥，經婦科醫師采樣、送檢。采用常規液基細胞學制片方法：制成細胞涂片，行Feulgen染色，用全自動細胞DNA倍體分析系統做DNA TBS細胞定量測定[5]。

1.2.2 細胞DNA倍體分析系統 染色片用MoticEasyScan數字切片掃描與應用系統和MotiCytometer全自動細胞DNA倍體分析系統掃描處理。該系統由全自動數碼顯微鏡對玻片中細胞核（約12 000個）進行掃描測定，以標本中正常細胞作為內參照，并根據132個參數特征值對被測細胞核進行自動分類和計數。細胞DNA倍體分析結果如下：（1）陰性：以正常二倍體細胞為主，未見非整倍體細胞或增生細胞占檢測細胞總數＜5%。（2）可疑：DNA倍體異常細胞1～2個或可見少量增生（占檢測細胞總數的5%～10%）。（3）陽性：出現DNA倍體異常細胞≥3個或可見細胞異常增生（占檢測細胞總數＞10%）或非整倍體細胞峰者即異倍體峰[6]。對于部分系統圖像難以確定的細胞核，需人工復核辨別，確保準確性。

1.2.3 采用羅氏Cobas 4 800高危型HPV分型 提取樣本DNA，在Cobas 4 800分析儀中，進行PCR擴增和熒光檢測。在陰、陽性對照有效的前提下，可檢測14種分型，分為16、18及12種其他型別（31、33、35等）3類，其中1類或以上陽性結果即為HR-HPV陽性，不報告病毒載量[7]。

1.3 統計學分析

采用SPSS 20.0統計軟件對數據進行統計學分析，計數資料如各個組別陽性率結果表示為（n，%），比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸組織病理結果、HR-HPV感染情況及DNA倍體分析結果

宮頸組織病理結果炎癥及輕度糜爛476例，CIN I 225例，CIN II 152例，CIN III 92例，SCC 55例。其中HR-HPV陽性547例，陰性453例。DNA定量分析結果：陰性668例、可疑193例、陽性139例。

2.2 宮頸組織病理結果與HR-HPV感染情況

組織學診斷分別：炎癥及輕度糜爛、CIN Ⅰ、CINⅡ、CIN Ⅲ、SCC各組中，HR-HPV陽性數131例、152例、121例、80例、50例，陽性率27.5%、67.6%、79.6%、87.0%、90.9%，各組間陽性率的差異具有統計學意義（P＜0.01，χ2=2 597）。HR-HPV陽性率隨著組織惡性度增加而增加。

2.3 不同級別的細胞DNA倍體分析結果與陽性率感染的關系

細胞DNA倍體分析結果：陰性668例，可疑193例，陽性139例，相對應HR-HPV陽性數為247例、146例、124例，HR-HPV陽性率37.0%、75.6%、89.2%。各組間陽性率的差異具有統計學意義，DNA倍體分析結果陽性的HR-HPV陽性率高于結果陰性的HRHPV陽性率（P＜0.01，χ2=180.7）。

2.4 宮頸組織病理與細胞DNA倍體分析結果的關系

細胞DNA倍體分析結果：陰性668例、可疑193例、陽性139例。宮頸組織病理正常或糜爛、CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、SCC對應陽性數及陽性率為8/1.68%、12/5.33%、19/12.50%、58/63.04%、42/76.36%。各組間陽性率的差異具有統計學意義，惡性度高的陽性率高于惡性度低的陽性率（P＜0.05，χ2=3 198）。

2.5 細胞DNA倍體分析結果、HR-HPV檢測結果與組織病理結果的相關性

組織病理結果異常（惡性度由低到高）225例、152例、92例、55例，單獨進行二者檢測，其陽性率5.3%～90.9%不等。如果二者結合，陽性率70.7%～100%（二者聯合檢測的陽性評價標準：兩種檢測方法的結果，其中一種方法結果為陽性則為二者結合陽性例數）。如表1。

表1 DNA倍體分析結果、HPV檢測結果與宮頸活檢病理結果的相關性

3 討論

宮頸細胞學檢查是宮頸癌及癌前病變篩查常規且有效的方法，特別是液基薄層制片技術和宮頸細胞學TBS報告系統的引進，很大程度的提升了細胞學的診斷水平與檢出率。在篩查中有特殊且重要的作用，無創，便捷，準確率高，但篩檢敏感度偏低，受人為主觀因素、技術人員操作等綜合因素影響，假陰性偏高、存在一定假陽性率。目前，全自動細胞DNA倍體分析技術是通過高精密的顯微鏡自動掃描宮頸液基薄層玻片，利用正常人體體細胞DNA倍體含量恒定（二倍體），在細胞發生癌變或癌前病變的過程中，DNA含量不規律增多，DNA倍體發生一定的改變。通過分析細胞核內DNA含量與結構變化，判斷細胞是否產生病變，DNA倍體特殊變化是判斷細胞良、惡性的重要參考指標[8-9]，其敏感度與特異度都很高。大量研究實驗與數據證實，HPV感染與宮頸癌及癌前病變有著千絲萬縷的關系，隨著組織病理癌變級別越高，感染HPV或多重感染機率越高，陽性率27.5%～90.9%。細胞DNA倍體分析技術的運用，取材便捷，對患者身體損傷較小，患者的配合度高，由計算機自動識別、篩檢出可疑的異型細胞，極大的解放人工的成本與工作量，且對比常規細胞學的準確率及吻合度很高，細胞DNA倍體分析系統檢出宮頸病理組織陽性率為5.3%～76.4%不等。如果采用細胞學DNA倍體分析系統與HR-HPV檢測相結合，則同等條件下，較大的提高了陽性檢出率70.7%～100%與準確率。二者檢測結合準確率與陽性率明顯優于單種方法學檢查。宮頸癌及癌前病變的初篩檢查，一次取樣兩種檢測，極大提高篩查率，降低假陰性和假陽性機率，減少漏診。該技術在基層一線工作中就早癌篩查得到一定的肯定與常規運用，對基層的防癌抗癌工作落實有很大促進與幫助[10-11]。

綜上所述，宮頸癌及癌前病變的預防措施要做到早診斷、早發現、早治療，可以極大的降低宮頸癌的發生率與死亡率[12-14]。細胞DNA倍體分析系統與HR-HPV檢測結合，明顯優于單獨檢測，有效彌補雙方方法學局限性與不足，很大程度提高宮頸癌敏感性與特異性，做到早發現、早診斷，可以大力推廣到基層防癌抗癌普查工作中。