栽培羊棲菜(Sargassum fusiforme)成熟藻體不同器官的組織結(jié)構(gòu)顯微觀察及其生理生態(tài)學(xué)功能剖析*

林立東 馬增嶺 陳斌斌 吳明江

栽培羊棲菜()成熟藻體不同器官的組織結(jié)構(gòu)顯微觀察及其生理生態(tài)學(xué)功能剖析*

林立東1馬增嶺2陳斌斌3吳明江3①

(1. 溫州市洞頭區(qū)海洋與漁業(yè)發(fā)展研究中心博士后工作站 溫州 325700; 2. 溫州大學(xué)浙江省水生環(huán)境與海洋生物資源保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 溫州 325035; 3. 溫州大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 溫州 325035)

為全面了解栽培羊棲菜()成熟藻體假根、莖、葉(氣囊)和生殖托(雌托和雄托)四類器官的組織形態(tài)特征, 運(yùn)用石蠟切片法, 對(duì)栽培羊棲菜成熟藻體各器官進(jìn)行了組織形態(tài)學(xué)觀察和討論分析。結(jié)果表明, 不同器官橫切組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和寬度差異顯著; 假根, 莖, 葉, 雌、雄生殖托的橫切面由外向內(nèi)分別為表皮、近表皮、皮層和髓部組織, 而氣囊無髓部組織結(jié)構(gòu), 但具有內(nèi)皮層。此外, 雌、雄生殖托還包括生殖窩、卵和精子結(jié)構(gòu)。栽培羊棲菜各器官表皮細(xì)胞均呈柵欄狀排列, 寬度順序?yàn)? 雄生殖托 > 莖 > 雌生殖托 > 氣囊 > 葉 > 假根; 表皮和近表皮細(xì)胞含淀粉粒最多, 內(nèi)含色素體; 皮層和髓部細(xì)胞的淀粉粒含量相對(duì)較少; 皮層組織的細(xì)胞腔最大, 具有典型植物細(xì)胞形態(tài)和發(fā)達(dá)的胞間隙; 髓部細(xì)胞致密, 細(xì)胞腔多數(shù)較小。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道表明, 羊棲菜不同器官響應(yīng)光照、水溫、干出與沉水及低鹽脅迫等環(huán)境信號(hào)表達(dá)的生理生態(tài)學(xué)特征差異顯著。研究結(jié)果可為深度解析栽培羊棲菜各器官之間的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)差異, 不同器官生理代謝響應(yīng)環(huán)境信號(hào)表達(dá)差異, 不同器官組織對(duì)微量元素或重金屬離子的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和儲(chǔ)藏機(jī)制分析等研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論參考。

羊棲菜(); 器官; 組織形態(tài); 生理生態(tài)學(xué); 功能

羊棲菜()屬褐藻門(Phaeophyta)、馬尾藻科(Sargassaceae)植物, 雌雄異株, 具有性生殖和無性生殖兩種生殖方式, 為太平洋西北部近岸海域特有的多年生大型海藻(曾呈奎, 2000; 林立東等, 2020)。近年來, 有關(guān)羊棲菜的研究報(bào)道主要集中于羊棲菜褐藻硫酸多糖提取、分離與藥理活性分析(Wu, 2013; Sun, 2018); 羊棲菜藻體膳食纖維、微量元素、氨基酸、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)成分分析(趙艷芳等, 2013; Li, 2018); 羊棲菜藻體響應(yīng)光照、溫度、CO2供給、干出和低滲等環(huán)境因子變化的生理學(xué)研究(Zou, 2004; Qian, 2016; Xie, 2016; Jiang, 2019; Li, 2019; Liu, 2020); 羊棲菜藻體響應(yīng)重金屬鎳、汞、銅、鋅和鎘等脅迫的生態(tài)毒理學(xué)研究(Lee, 2012; Shin, 2014; Huang, 2015); 羊棲菜幼胚響應(yīng)米氏凱倫藻()赤潮感染的光合生理研究(Ma, 2017; Shang, 2020); 重金屬砷含量研究(Ma, 2018)等六個(gè)方面, 此外, 也有少量關(guān)于溫州洞頭栽培羊棲菜樣品RAPD和ISSR分子標(biāo)記研究(徐佳麗等, 2014; 南春容等, 2015; Yao, 2019)等報(bào)道。褐藻是藻類植物中進(jìn)化較為高級(jí)的一個(gè)類群, 具表皮、皮層和髓組織分化特征(朱仲嘉等, 1992; 黃冰心等, 2015)。目前, 文獻(xiàn)《羊棲菜生物的初步研究》和《中國經(jīng)濟(jì)海藻超微結(jié)構(gòu)研究》分別描述了野生羊棲菜成熟藻體各器官顯微和超顯微結(jié)構(gòu)特征, 而文獻(xiàn)《羊棲菜的生藥學(xué)研究》僅對(duì)栽培羊棲菜藻體莖和葉器官的組織顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察與分析(王素娟, 1991; 張華芳, 2005), 上述文獻(xiàn)在羊棲菜器官組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和學(xué)術(shù)名詞等方面進(jìn)行了初步描述和定義, 為我們深度認(rèn)知羊棲菜各器官間的組織形態(tài)特征提供了借鑒基礎(chǔ), 但相距系統(tǒng)認(rèn)知栽培羊棲菜成熟藻體各器官間組織形態(tài)差異、顯微結(jié)構(gòu)差異和定量描述組織形態(tài)結(jié)構(gòu)等方面尚有差距, 還需進(jìn)一步補(bǔ)充和完善。

植物解剖學(xué)與生理學(xué)、生物化學(xué)、基因組學(xué)和代謝組學(xué)等相結(jié)合, 提供了大量的數(shù)據(jù)集, 為系統(tǒng)地揭示植物在脅迫環(huán)境下的生長、發(fā)育、防御和生產(chǎn)力鋪平了道路(Yadav, 2021)。結(jié)構(gòu)與功能是生命科學(xué)研究的主題, 結(jié)構(gòu)是物質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)部的組織形式, 功能則是物質(zhì)系統(tǒng)在與內(nèi)外環(huán)境的相互作用中, 所表現(xiàn)出來的特性、行為、效能(Zhao, 2008; Dias, 2016; 程銘恩等, 2019)。羊棲菜不同器官的組織結(jié)構(gòu)不同, 生物活性物質(zhì)的含量也不盡相同(趙艷芳等, 2013)。羊棲菜器官組織形態(tài)是光合作用、無機(jī)離子選擇吸收和逆境生理生態(tài)學(xué)等基礎(chǔ)研究的認(rèn)知基礎(chǔ), 準(zhǔn)確掌握栽培羊棲菜器官組織顯微形態(tài)特征, 利于研究者精準(zhǔn)選定目標(biāo)器官, “集成”研究栽培羊棲菜響應(yīng)環(huán)境變化的組織形態(tài)變化、生化成分與動(dòng)態(tài)分布、生理代謝活動(dòng)等重要生命活動(dòng)過程及其分子機(jī)制。

本文在觀察和記錄栽培羊棲菜成熟孢子體假根、莖、葉(氣囊)和生殖托(雌托和雄托)四類器官組織形態(tài)特征基礎(chǔ)上, 結(jié)合現(xiàn)有羊棲菜生理生態(tài)學(xué)文獻(xiàn)報(bào)道, 系統(tǒng)闡述了羊棲菜葉綠體分布, 膳食纖維、微量元素和褐藻多糖(褐藻膠、褐藻淀粉和褐藻糖膠)等含量與分布特征, 以期為建立羊棲菜器官模擬生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)力學(xué)模型, 解析栽培羊棲菜生長發(fā)育, 揭示微量元素的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和儲(chǔ)藏, 藻體響應(yīng)環(huán)境信號(hào)的分子機(jī)理等生命活動(dòng)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料選擇與處理

于溫州市洞頭區(qū)選取栽培羊棲菜()成熟孢子體雌雄植株, 去除雜質(zhì), 分別選取假根、葉片、氣囊、莖和生殖托器官, 新鮮過濾海水清洗后, 分別置事先注入固定液的棕色廣口試劑瓶中, 4 °C冷藏待用。

1.2 固定與石蠟切片制作

固定 將羊棲菜各部器官分別置FAA固定液(5 mL福爾馬林, 6 mL乙酸和89 mL 50%乙醇)中固定24 h;

脫水 取已固定器官材料置50%、60%、70%、80%、90%和100%乙醇中梯度脫水, 每梯度乙醇脫水1 h, 期間每梯度乙醇更換3次;

透明 將脫水后羊棲菜器官置1 : 1 (體積分?jǐn)?shù))的無水乙醇和二甲苯混合液中浸泡透明2 h, 再置100%二甲苯溶液中透明3 h, 期間每1 h更換二甲苯1次;

透蠟 在56 °C恒溫箱中置放50 mL燒杯6只且編號(hào), 1號(hào)燒杯置放1 : 1二甲苯和石蠟混合液30 mL, 2號(hào)燒杯置放1 : 2二甲苯和石蠟混合液30 mL, 3號(hào)和4號(hào)燒杯分別置放軟蠟30 mL, 5號(hào)和6號(hào)燒杯各置放硬蠟30 mL, 羊棲菜器官材料依次浸蠟1 h;

包埋 將事先準(zhǔn)備好的紙盒置溫度略高于石蠟熔點(diǎn)的溫臺(tái)上, 將浸蠟后的羊棲菜器官材料連同石蠟倒入紙盒內(nèi), 加熱后用解剖針擺正器官材料, 將紙盒平緩快速浸置冷水中50—60 min, 取出帶有紙盒的蠟塊, 去除紙盒, 用解剖刀規(guī)則修整蠟塊, 編號(hào)置4 °C冰箱冷藏待用。

切片 將包埋器官的蠟塊固定至kd-1508型旋轉(zhuǎn)切片機(jī)上, 切取厚度為8—10 μm的器官橫切片或縱切片;

貼片、展片與燙片 將事先準(zhǔn)備好的膠黏劑(體積分?jǐn)?shù)為1︰1的蛋白和甘油, 加入少量麝香草酚或石碳酸)均勻涂抹干凈載玻片中央; 后滴上適量蒸餾水, 將事先選好的器官石蠟切片浮于蒸餾水上, 亮而光的反面朝下; 將載玻片置酒精燈火焰上方平穩(wěn)移動(dòng), 均勻展平切片, 靜置3—5 min, 清去水液, 吸干余水, 將載片置放置37 °C溫箱中, 至蠟片干透;

脫蠟 將染色后的蠟片置25 °C二甲苯溶劑中脫蠟, 連續(xù)置換3次二甲苯溶液, 每次二甲苯溶液脫蠟5 min, 徹底清除石蠟;

復(fù)水 將脫蠟后的蠟片分別置100%、90%、80%和70%梯度乙醇液中快速復(fù)水, 每梯度乙醇液復(fù)水2 min;

染色 將蠟片分別置事先配制好的番紅(Safranin)染色劑和固綠(Fast green)染色劑中染色, 使細(xì)胞核著紅色, 纖維素細(xì)胞組織著為灰色(70%乙醇配制液染色, 4 °C冷藏);

脫水 將染色后的蠟片分別置70%、80%、90%和100%乙醇中脫水, 每梯度液脫水3 min, 100%乙醇重復(fù)脫水3次;

透明 將脫水后的蠟片置1 : 1 (體積分?jǐn)?shù))無水乙醇和二甲苯混合液中, 后置二甲苯溶液中透明3次, 每次透明5 min;

封片 去除蠟片多余二甲苯溶液, 滴一滴樹膠, 傾斜置放載玻片, 排出空氣, 置35 °C烘干箱中干燥至牢固。

1.3 組織形態(tài)記錄與測(cè)定方法

使用倒置生物顯微鏡(NIKON 90i, 日本)觀察與記錄器官組織形態(tài)照片。根據(jù)各器官蠟片實(shí)際, 選擇4(物鏡)×10(目鏡)倍、10(物鏡)×10(目鏡)倍或40(物鏡)×10(目鏡)倍(下同)觀察和記錄器官組織形態(tài)。根據(jù)標(biāo)尺長度/標(biāo)尺距離=測(cè)量長度/測(cè)量距離公式, 計(jì)算測(cè)量距離, 相同部位重復(fù)測(cè)量5次, 計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差(S.D)值。

2 結(jié)果與分析

2.1 羊棲菜假根橫切組織形態(tài)特征

羊棲菜假根呈柱狀, 橫切組織由外向內(nèi)分別為表皮層、近表皮層、皮層和髓部組織區(qū)(圖1)。羊棲菜假根的組織形態(tài)主要特征為, 表皮層由單層細(xì)胞組成, 位于假根最外層, 寬度為(26.04 ± 5.21) μm, 具表皮外皮層和表皮內(nèi)皮層結(jié)構(gòu)。表皮細(xì)胞致密, 柵欄狀排列, 著色最深, 腔內(nèi)均富含淀粉粒。表皮細(xì)胞側(cè)壁的寬度是外皮層或內(nèi)皮層寬度的6—7倍, 部分表皮細(xì)胞側(cè)壁延伸至近表皮細(xì)胞層, 表皮細(xì)胞腔內(nèi)色素體含量較多; 近表細(xì)胞層位于表皮內(nèi)皮層內(nèi)側(cè), 由1—2層薄壁細(xì)胞構(gòu)成, 寬度為(31.25±10.42) μm; 細(xì)胞壁著色較深, 與表皮外皮層、表皮內(nèi)皮層顏色差異不顯著, 但顯著深于皮層細(xì)胞壁; 近表皮細(xì)胞間的胞間隙結(jié)構(gòu)明顯。近表皮細(xì)胞與表皮細(xì)胞共壁1—2面, 細(xì)胞腔大小不均一, 腔內(nèi)均富含淀粉粒; 皮層細(xì)胞位于近表皮細(xì)胞層內(nèi)側(cè), 由8—9層薄壁細(xì)胞構(gòu)成, 寬度為(475.18±33.45) μm, 皮層組織區(qū)細(xì)胞形態(tài)呈四邊形、五邊形或六邊型等典型植物細(xì)胞形態(tài)特征, 細(xì)胞腔較大, 細(xì)胞壁較薄, 腔內(nèi)含淀粉粒, 由表皮向髓部方向, 顏色逐漸變淺。髓部組織區(qū)位于形態(tài)學(xué)中心部位, 直徑為(727.2±37.56) μm。髓部細(xì)胞致密, 多數(shù)細(xì)胞腔小于皮層細(xì)胞腔, 少數(shù)細(xì)胞與皮層細(xì)胞腔相近, 細(xì)胞淀粉粒的含量多于皮層細(xì)胞, 少于表皮和近表皮細(xì)胞。

圖1 羊棲菜假根的橫切組織形態(tài)

注: a. 4×10倍, ①表皮, ②近表皮細(xì)胞, ③皮層細(xì)胞壁, ④皮層細(xì)胞腔, ⑤髓部組織區(qū), ⑥淀粉粒; b. 40×10倍, ①表皮外皮層, ②表皮細(xì)胞腔, ③色素體, ④表皮內(nèi)皮層, ⑤皮層細(xì)胞, ⑥皮層細(xì)胞壁, ⑦胞間隙

2.2 羊棲菜莖橫切組織形態(tài)特征

羊棲菜莖橫切面呈橢圓形, 橫切組織由外向內(nèi)分別為表皮、近表皮層、皮層和髓部組織區(qū)(圖2a, 2b, 2c)。羊棲菜莖組織形態(tài)主要特征為, 表皮層位于莖組織最外層, 由單層細(xì)胞組成, 寬度為(43.96±10.99) μm, 細(xì)胞壁著色最深; 表皮細(xì)胞致密, 柵欄狀排列, 腔內(nèi)富含淀粉粒; 表皮細(xì)胞層具外皮層和內(nèi)皮層結(jié)構(gòu), 界限清晰, 腔內(nèi)含色素體。表皮細(xì)胞側(cè)壁增厚, 多數(shù)細(xì)胞側(cè)壁延伸至近表皮細(xì)胞層。近表皮細(xì)胞位于表皮內(nèi)皮層內(nèi)側(cè), 由1—2層薄壁細(xì)胞構(gòu)成, 寬度為(47.62±16.79) μm; 近表皮細(xì)胞與表皮細(xì)胞共壁1—2面, 細(xì)胞腔大小不均一, 細(xì)胞壁著色淺于表皮細(xì)胞壁, 腔內(nèi)富含淀粉粒。皮層細(xì)胞位于近表皮細(xì)胞內(nèi)側(cè), 寬度為(787.55±74.80) μm—(1 146.52±177.99) μm; 皮層細(xì)胞腔最大, 具典型多邊形植物細(xì)胞形態(tài)特征, 腔內(nèi)富含淀粉粒。髓部組織區(qū)位于形態(tài)學(xué)中心部位, 呈橢圓形, 長寬分別為(457.87±16.79) μm、(357.14±5.49) μm; 髓部多數(shù)細(xì)胞腔較小, 少數(shù)細(xì)胞腔較大, 細(xì)胞致密, 腔內(nèi)富含淀粉粒。

圖2 羊棲菜莖的橫切組織形態(tài)

注: a. 10×10倍, ①表皮外皮層, ②表皮細(xì)胞, ③表皮內(nèi)皮層, ④近表皮細(xì)胞, ⑤皮層細(xì)胞, ⑥髓部組織; b. 40×10倍, ①表皮外皮層, ②表皮細(xì)胞, ③表皮細(xì)胞壁, ④色素體, ⑤表皮內(nèi)皮層, ⑥近表皮細(xì)胞, ⑦皮層細(xì)胞壁, ⑧胞間隙, ⑨皮層細(xì)胞腔; c. 40×10倍, ①皮層細(xì)胞, ②皮層細(xì)胞壁, ③髓部組織區(qū), ④髓部細(xì)胞, ⑤髓部細(xì)胞壁, ⑥淀粉粒; d. 10×10倍, ①幼孢子體莖皮層組織圓形細(xì)胞, ②幼孢子體莖髓部組織區(qū)

羊棲菜幼孢子體莖(圖2d)與成熟孢子體莖的形態(tài)和橫切組織結(jié)構(gòu)特征相似, 但皮層和髓部組織細(xì)胞形態(tài)均呈卵圓形或圓形特征。皮層組織細(xì)胞中, 多數(shù)胞腔相對(duì)較大, 細(xì)胞直徑長度為(223.86±8.70) μm; 少數(shù)胞腔較小, 且與髓部組織細(xì)胞中少數(shù)細(xì)胞腔較大的直徑相近, 細(xì)胞直徑長度為(170.45±5.87) μm。

2.3 羊棲菜葉橫切組織形態(tài)特征

羊棲菜葉橫切面呈梭形, 長度為(2 526.04±5.21) μm, 寬度為(973.96±5.20) μm, 橫切組織由外向內(nèi)分別為表皮、近表皮、皮層和髓部組織區(qū)(圖3)。羊棲菜葉組織形態(tài)主要特征為, 表皮位于葉組織最外層, 寬度為(26.04±5.19) μm, 具表皮外皮層和表皮內(nèi)皮層結(jié)構(gòu)。表皮細(xì)胞壁著色最深, 細(xì)胞致密, 柵欄狀排列, 細(xì)胞側(cè)壁增厚, 并延伸至近表皮細(xì)胞組織區(qū)。近表皮細(xì)胞位于表皮內(nèi)側(cè), 寬度為(48.61±15.9) μm; 近表皮細(xì)胞與表皮細(xì)胞共壁1—3面(如: 圖3c, ⑦), 細(xì)胞腔較小, 腔內(nèi)富含黑色、較大顆粒淀粉粒。皮層細(xì)胞位于近表皮細(xì)胞內(nèi)側(cè), 細(xì)胞壁清晰, 具典型植物細(xì)胞形態(tài)特征, 細(xì)胞腔較大, 淀粉粒含量明顯多于假根和莖皮層細(xì)胞淀粉粒, 皮層組織區(qū)長度半徑為(1 052.08±45.41) μm, 寬度半徑為(402.78±21.68) μm左右。髓部組織區(qū)位于形態(tài)學(xué)中心部位, 呈橢圓形, 長度為(388.89±43.37) μm, 寬度為(175.35±10.84) μm。髓部細(xì)胞壁著色深藍(lán), 細(xì)胞致密, 多數(shù)細(xì)胞腔較小, 少數(shù)細(xì)胞腔較大, 具典型植物多邊形細(xì)胞形態(tài)特征, 腔內(nèi)富含淀粉粒。

2.4 羊棲菜氣囊橫切組織形態(tài)特征

羊棲菜氣囊橫切面呈圓環(huán)狀, 囊壁寬度為(359.83±10.42) μm, 橫切組織由外向內(nèi)分為表皮、近表皮、皮層和內(nèi)皮層組織區(qū)(圖4)。羊棲菜氣囊組織形態(tài)主要特征為: 表皮位于氣囊組織最外層, 由單層細(xì)胞構(gòu)成, 寬度為(26.04±5.21) μm, 具表皮外皮層和表皮內(nèi)皮層結(jié)構(gòu); 表皮細(xì)胞壁著色最深, 呈暗紅色, 細(xì)胞致密, 柵欄狀排列, 細(xì)胞側(cè)壁增厚, 并延伸至近表皮細(xì)胞組織區(qū), 腔內(nèi)色素體清晰可見; 近表皮細(xì)胞位于表皮內(nèi)皮層內(nèi)側(cè), 由1—2層細(xì)胞構(gòu)成, 寬度為(29.51 ± 10.84) μm。近表皮細(xì)胞壁著色較深, 但略淺于細(xì)胞壁, 細(xì)胞腔大小不均, 多數(shù)細(xì)胞腔較小, 呈大小不規(guī)則間隔排列, 腔內(nèi)富含淀粉粒; 皮層細(xì)胞位于近表皮細(xì)胞內(nèi)側(cè), 寬度為(298.61 ± 57.37) μm, 具典型植物多邊形細(xì)胞形態(tài)特征, 細(xì)胞腔普遍大于近表皮細(xì)胞腔, 腔內(nèi)富含淀粉粒。內(nèi)皮層細(xì)胞與皮層細(xì)胞大小和形態(tài)差異不顯著, 較大腔細(xì)胞與較小腔細(xì)胞間嵌合排列, 細(xì)胞壁相互連接構(gòu)成氣囊空腔。

圖3 羊棲菜葉的橫切組織形態(tài)

注: a. 4×10倍, ①表皮外皮層, ②表皮內(nèi)皮層, ③色素體, ④近表皮細(xì)胞, ⑤皮層細(xì)胞壁, ⑥淀粉粒, ⑦髓部組織區(qū); b. 10×10倍, ①表皮外皮層, ②表皮內(nèi)皮層, ③近表皮細(xì)胞, ④淀粉粒, ⑤皮層細(xì)胞, ⑥皮層細(xì)胞壁, ⑦淀粉粒; c. 10×10倍, ①皮層細(xì)胞, ②皮層細(xì)胞壁, ③胞間隙, ④髓部細(xì)胞, ⑤髓部組織區(qū), ⑥淀粉粒, ⑦近表皮細(xì)胞, ⑧表皮內(nèi)皮層, ⑨表皮外皮層

圖4 羊棲菜氣囊的橫切組織形態(tài)

注: a. 10×10倍, ①表皮外皮層, ②表皮細(xì)胞, ③皮層內(nèi)皮層, ④近表皮細(xì)胞, ⑤淀粉粒, ⑥皮層細(xì)胞壁, ⑦皮層細(xì)胞腔, ⑧內(nèi)皮層, ⑨氣囊囊腔; b. 40×10倍, ①表皮外皮層, ②表皮細(xì)胞, ③表皮細(xì)胞壁, ④色素體, ⑤表皮內(nèi)皮層, ⑥近皮層細(xì)胞, ⑦淀粉粒, ⑧皮層細(xì)胞壁, ⑨胞間隙

2.5 羊棲菜雌生殖托橫切組織形態(tài)特征

羊棲菜雌生殖托橫切面整體呈柱狀, 橫切組織由外向內(nèi)分為表皮、生殖窩孔、生殖窩、卵和皮層組織區(qū)(圖5)。羊棲菜雌生殖托組織形態(tài)主要特征為: 表皮位于生殖托最外層, 寬度為(64.14±11.23) μm, 具表皮外皮層和表皮內(nèi)皮層結(jié)構(gòu); 表皮細(xì)胞壁著色最深, 柵欄狀排列。生殖窩孔嵌合于表皮組織當(dāng)中, 直徑為(125.01±9.30) μm; 生殖窩位于表皮內(nèi)側(cè), 呈球狀分布與表皮內(nèi)的皮層組織中, 直徑為(635.41±120.77) μm, 窩與窩間隔排列, 中間著生皮層組織; 窩內(nèi)著生橢圓形卵, 卵的長度為(184.21±26.32) μm、寬度為(100.88±7.59) μm, 卵通過隔絲生長于生殖窩內(nèi)壁, 且卵與卵之間由隔絲間隔。近皮層細(xì)胞位于表皮內(nèi)皮層內(nèi)側(cè), 細(xì)胞壁著色淺于細(xì)胞壁, 細(xì)胞腔大小不均一, 多數(shù)細(xì)胞腔較小, 大小腔細(xì)胞間呈不規(guī)則排列, 腔內(nèi)富含淀粉粒。皮層細(xì)胞具典型植物多邊形細(xì)胞形態(tài)特征, 腔內(nèi)富含淀粉粒。髓部組織區(qū)形態(tài)特征不明顯。

圖5 羊棲菜雌生殖托的橫切組織形態(tài)

注: a. 10×10倍, ①雌生殖窩孔, ②表皮外皮層, ③表皮內(nèi)皮層, ④近表皮細(xì)胞, ⑤皮層細(xì)胞, ⑥生殖窩, ⑦卵; b. 40×10倍, ①表皮外皮層; ②表皮內(nèi)皮層; ③表皮細(xì)胞; ④生殖窩; ⑤卵; ⑥隔絲

2.6 羊棲菜雄生殖托橫切組織形態(tài)特征

羊棲菜雄生殖托橫切面整體呈柱狀, 橫切組織由外向內(nèi)分為表皮、生殖窩孔、生殖窩、精子、皮層組織和髓部組織區(qū)(圖6)。羊棲菜雄生殖托組織形態(tài)主要特征為: 表皮組織位于雄生殖托最外層, 由單層細(xì)胞構(gòu)成, 寬度為(192.71±19.95) μm, 具表皮外皮層和表皮內(nèi)皮層; 表皮細(xì)胞壁著色最深, 呈柵欄狀排列。生殖窩孔嵌合于表皮當(dāng)中; 生殖窩呈球狀分布于表皮內(nèi)的皮層當(dāng)中, 大小為(868.06±156.71) μm, 窩與窩間隔排列, 中間著生皮層組織; 精子個(gè)體較小, 蝌蚪狀, 數(shù)量較多, 全長約(200.09±33.23) μm, 尾部著生于生殖窩側(cè)壁。皮層細(xì)胞具典型植物多邊形細(xì)胞形態(tài)特征, 腔內(nèi)富含淀粉粒。髓部細(xì)胞位于形態(tài)學(xué)中心部位, 直徑為(538.46±40.70) μm, 細(xì)胞致密, 細(xì)胞腔小于皮層細(xì)胞腔, 腔內(nèi)富含淀粉粒。

圖6 羊棲菜雄生殖托的組織形態(tài)

注: a. 10×10倍, ①雄生殖窩孔, ②生殖窩, ③精子, ④表皮外皮層, ⑤表皮細(xì)胞, ⑥表皮內(nèi)皮層, ⑦皮層細(xì)胞, ⑧髓部組織區(qū); b. 40×10, ①表皮外皮層, ②表皮細(xì)胞, ③表皮細(xì)胞壁, ④表皮內(nèi)皮層, ⑤近表皮細(xì)胞, ⑥淀粉粒, ⑦生殖窩, ⑧精子

3 討論

3.1 羊棲菜各器官組織結(jié)構(gòu)的差異特征

羊棲菜各器官橫切形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)和組織寬度均有差異。羊棲菜各器官相同組織的形態(tài)相同或相近, 特征表現(xiàn)為: 表皮組織結(jié)構(gòu)相同或相近, 均由單層致密的柵欄狀細(xì)胞構(gòu)成, 細(xì)胞壁著色最深, 側(cè)壁增厚延伸至近表皮組織, 表皮厚度順序?yàn)? 雄生殖托(200—214.3 μm) > 莖(110—180 μm) > 雌生殖托(42.85—114.3 μm) > 氣囊(42.9—57.1 μm) > 葉(37.5—50.0 μm) > 假根(30.3—45.5 μm)。羊棲菜器官表皮呈單層、致密的細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征, 與王素娟(1991)、沈頌東等(2001)等觀察的結(jié)果相同。羊棲菜表皮結(jié)構(gòu)特征與羊棲菜適應(yīng)潮間帶生活、栽培浮水生活相符。自然環(huán)境下, 通過表皮脂雙層作用, 有效調(diào)控蒸騰速率或復(fù)水速率, 保護(hù)皮層細(xì)胞過度蒸騰或吸脹吸水傷害。羊棲菜莖和葉極具水生植物組織結(jié)構(gòu)特征, 其胞間隙極發(fā)達(dá), 可貯存大量空氣, 并在體內(nèi)相互溝通, 供給藻體生活所需CO2和O2等。

羊棲菜器官近表皮細(xì)胞淀粉粒含量最多, 皮層淀粉粒含量最少, 該特征與張華芳(2005)對(duì)羊棲菜莖組織觀察結(jié)果相同。皮層組織細(xì)胞腔最大, 具有四邊形、五邊形或六邊形等典型植物細(xì)胞形態(tài)特征, 但幼孢子體莖皮層和髓部細(xì)胞形態(tài)呈卵圓形或圓形, 不具有成熟孢子體莖皮層細(xì)胞的多邊形形態(tài)特征。髓部多數(shù)細(xì)胞腔較小、少數(shù)細(xì)胞腔較大, 嵌合于致密的髓部細(xì)胞組織當(dāng)中。羊棲菜各器官之間的組織形態(tài)差異特征表現(xiàn)為: 假根、莖、葉、氣囊、雌生殖托和雄生殖托器官橫切組織形狀分別為圓形、近圓形、錐形、圓環(huán)形、近橢圓形和近圓形; 假根、莖、葉、雌生殖托和雄生殖托器官橫切組織由外向內(nèi)分別為表皮、近表皮、皮層和髓部組織區(qū), 其中, 雌、雄生殖托還包括生殖窩、卵及精子結(jié)構(gòu); 氣囊的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)與其它器官不同, 由外向內(nèi)分別為表皮、近表皮、皮層和內(nèi)表皮組織區(qū)結(jié)構(gòu), 無髓部組織, 但具有內(nèi)皮層結(jié)構(gòu)。

3.2 基于羊棲菜假根組織形態(tài)特征的生理生態(tài)學(xué)功能

羊棲菜假根在起到固著作用的同時(shí), 還具有分化再生幼孢子體的生殖功能(林立東等, 2020)。有關(guān)羊棲菜組織培養(yǎng)研究表明, 羊棲菜的葉、假根和莖器官部分組織誘導(dǎo)后能夠形成塊狀愈傷組織, 可繼代培養(yǎng), 含色素的愈傷組織可再生幼孢子體, 而分化再生幼孢子體的細(xì)胞來源于表皮細(xì)胞、近表皮細(xì)胞和皮層色素含量較高的細(xì)胞(沈頌東等, 2001; 殷明焱, 2005)。羊棲菜假根表皮組織結(jié)構(gòu)與莖、葉和生殖托相同, 具表皮外皮層和表皮內(nèi)皮層結(jié)構(gòu), 表皮細(xì)胞呈柵欄狀排列結(jié)構(gòu), 這種結(jié)構(gòu)可能與羊棲菜干出狀態(tài)減緩水分過度流失及干出后復(fù)水緩慢吸水, 避免近表皮細(xì)胞、皮層細(xì)胞和髓部細(xì)胞損傷有關(guān)。髓部細(xì)胞腔普遍較小, 但細(xì)胞腔淀粉含量較多, 這種組織結(jié)構(gòu)特征可能與假根的居尖生長特征相符, 即: 通過髓細(xì)胞的伸長生長、分裂和增殖, 實(shí)現(xiàn)假根的增粗和伸長。羊棲菜假根無性生殖幼孢子體有兩種方式, 一種方式為根尖分生組織周緣區(qū)部位的表皮細(xì)胞向外增生為葉原基, 再發(fā)育成葉, 使得假根直接分化為幼孢子體, 另一種方式為根尖分生組織周緣區(qū)部位的表皮細(xì)胞、近表皮細(xì)胞或近表皮皮層細(xì)胞向外增生, 發(fā)育為幼孢子體。假根的無性生殖特征, 充分體現(xiàn)了假根細(xì)胞較強(qiáng)的植物細(xì)胞全能性(朱仲嘉等, 1992; 殷明焱, 2005)。

3.3 基于羊棲菜莖組織形態(tài)特征的生理生態(tài)學(xué)功能

羊棲菜莖亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的淀粉、微量元素與重金屬元素、植物激素及響應(yīng)低鹽脅迫代謝物質(zhì)變化的部位不同。羊棲菜僅有單一主莖, 其次為一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)和四級(jí)測(cè)生莖, 均呈現(xiàn)居尖生長特征(林立東等, 2020)。羊棲菜莖表皮、近表皮和皮層色素含量較多細(xì)胞的全能性較強(qiáng)。沈頌東等(2001)關(guān)于羊棲菜莖部愈傷組織再生苗的解剖學(xué)研究結(jié)果表明, 羊棲菜莖近表皮細(xì)胞層首先可以生成愈傷組織, 后逐漸形成愈傷組織皮層和髓部組織, 再分化生成幼孢子體。

張華芳(2005)對(duì)羊棲菜莖橫切觀察表明, 莖表皮細(xì)胞和近表皮細(xì)胞富含大小不一、形態(tài)各異, 有的多個(gè)聚集成團(tuán), 外包裹淺黃色物質(zhì)的“載色體”。目前, 尚無有關(guān)“載色體”成分的研究報(bào)道, 本文根據(jù)“載色體”的形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)分布特征初判為帶有顯色物質(zhì)的淀粉粒。趙艷芳等(2013)關(guān)于羊棲菜中微量元素的亞細(xì)胞分區(qū)分布研究表明, Cu、Fe、Mn、Zn、Mg、Ca、Al、Cd、Pb等微量元素和重金屬元素主要分布在莖和葉的細(xì)胞壁中, 其中Mg、Ca、Mn、Cu、Pb的分布特征相同, 為細(xì)胞壁 > 液泡 > 細(xì)胞器, Fe和Al的分布特征相同, 為細(xì)胞壁> 細(xì)胞器 > 液泡, Cd和Zn在細(xì)胞器和液泡中均有分布(趙艷芳等, 2013)。李艷等(2014)關(guān)于羊棲菜主分枝、側(cè)分枝、初生葉、次生葉和莖等5部位10種植物激素的研究表明, 吲哚乙酸(IAA)在羊棲菜莖中含量最高, 為4 041.431 ng/g, 脫落酸(ABA)主要分布于主分枝中, 含量達(dá)1 469.515 ng/g, 獨(dú)角金內(nèi)脂(SL)在主分枝中含量最高, 為534.833 ng/g (李艷等, 2014)。

3.4 基于羊棲菜葉組織形態(tài)特征的生理生態(tài)學(xué)功能

羊棲菜葉器官主要呈現(xiàn)于幼孢子體生長發(fā)育期, 具平緣葉、齒緣葉和棒形葉三種形態(tài)(林立東等, 2020)。羊棲菜葉中微量元素的亞細(xì)胞分區(qū)分布特征與莖相同(趙艷芳等, 2013)。羊棲菜次生葉中茉莉酸和水楊酸的含量較高, 分別為259.983 ng/g和314.855 ng/g, 赤霉素在次生葉和莖中的含量較高, 分別為24.023 ng/g和18.242 ng/g (程銘恩等, 2019)。

羊棲菜的捕光色素復(fù)合體主要分布于器官表皮細(xì)胞, 通過捕光色素復(fù)合體捕捉光能, 進(jìn)行光合作用, 為體細(xì)胞生長、發(fā)育和繁殖提供物質(zhì)基礎(chǔ)。羊棲菜對(duì)不同光強(qiáng)和光源的生理響應(yīng)不同。Zou等(2015)關(guān)于重金屬銅脅迫羊棲菜蛋白質(zhì)組的變化研究表明, 色素體大部分存在于葉表皮, 并隨表皮至皮層厚度加深, 葉綠素(chlorophyll)含量逐漸降低。Sugawara等(2006)有關(guān)褐藻巖藻黃素的研究報(bào)道表明, 褐藻巖藻黃素和葉綠素共同組成高效捕光復(fù)合物, 利于褐藻適應(yīng)水環(huán)境中弱光條件的光合作用。Xie等(2016)對(duì)低鹽和高鹽海水短期浸泡對(duì)羊棲菜光合作用和葉黃素循環(huán)的影響研究表明, 110 μE/(m2s)光照(低光)條件下, 90鹽度海水處理對(duì)羊棲菜PSII有效量子產(chǎn)率影響顯著, 淡水中處理1 h 后, PSII有效量子產(chǎn)率也不降低。在800 μE/(m2s)光照(高光)條件下, 光保護(hù)機(jī)制在淡水浸泡的葉片中有效發(fā)揮作用, PSII的量子產(chǎn)量在修復(fù)期得到恢復(fù)。相反, 90鹽度海水處理的葉片不能承受高光照, 并積累很少的花青素和玉米黃質(zhì), 正常鹽度海水修復(fù)期, 葉片的PSII量子產(chǎn)量受到嚴(yán)重抑制(Xie, 2016)。李科(2017)運(yùn)用單色LED光源(白光、紅光、綠光、藍(lán)光和傳統(tǒng)熒光)對(duì)羊棲菜比生長速率、葉綠素(chl)、類胡蘿卜素(Car)和可溶性蛋白的研究表明, 羊棲菜置于白光培養(yǎng)條件的比生長速率最高, 置于藍(lán)光培養(yǎng)條件下的chl含量最高, 置于白光、紅光、綠光和藍(lán)光培養(yǎng)條件下的Car差異不顯著, 但顯著高于傳統(tǒng)熒光, 置于藍(lán)光培養(yǎng)條件下的可溶性蛋白含量最高, 且與傳統(tǒng)熒光可溶性蛋白含量存在顯著差異。

水溫是羊棲菜光合作用、繁殖發(fā)育和生理代謝的主要影響因子。適宜羊棲菜生長的水溫為4—25 °C (曾呈奎, 2000)。15—25 °C范圍內(nèi), 羊棲菜藻體chl的含量隨溫度升高而升高, 20 °C達(dá)到峰值, 超過25 °C時(shí)chl的含量會(huì)迅速下降, 至30 °C時(shí), chl將逐漸分解(孟慶俊等, 2010)。Zou等(2005)對(duì)羊棲菜葉和生殖托的光合作用特征研究表明, 10—30 °C溫度范圍內(nèi), 低光輻射條件下, 羊棲菜葉和生殖托能夠保持相對(duì)穩(wěn)定的光合效率, 而40 °C溫度條件下, 羊棲菜葉和生殖托對(duì)高光強(qiáng)的利用越來越有效(Zou, 2005)。Liu等(2020)關(guān)于高溫脅迫對(duì)羊棲菜葉代謝組影響的研究表明, 27 °C和32 °C高溫脅迫處理7 d, 抑制了葉片的葉綠素含量, 增加了電解質(zhì)滲漏(Liu, 2020)。

3.5 基于羊棲菜氣囊組織形態(tài)特征的生理生態(tài)學(xué)功能

羊棲菜的氣囊由葉片特化生成, 由皮層細(xì)胞加厚, 中央髓部細(xì)胞逐漸分離形成囊腔, 囊腔內(nèi)貯存空氣或CO2、O2等(馮德培等, 1982)。目前, 有關(guān)氣囊的生理生態(tài)學(xué)方面的研究暫無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本文根據(jù)氣囊的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)特征推測(cè), 氣囊在參與光合作用和呼吸作用的同時(shí), 也參與增加藻體浮力, 使得藻體適應(yīng)浮水生活。羊棲菜氣囊腔內(nèi)含空氣或CO2、O2的特征, 使得羊棲菜即使處于避光、低溫及密閉隔離空氣條件, 也可以通過內(nèi)皮層細(xì)胞選擇吸收腔內(nèi)的CO2和O2, 短期內(nèi)保持藻體生命力。

3.6 基于羊棲菜生殖托組織形態(tài)特征的生理生態(tài)學(xué)功能

羊棲菜雌雄異株, 生殖器官為生殖托, 包括雌生殖托和雄生殖托, 雌生殖托產(chǎn)生卵細(xì)胞, 雄生殖托產(chǎn)生精子(林立東等, 2020)。關(guān)于羊棲菜生殖托離體培養(yǎng)的初步研究表明, 22 °C、2 300 lx光強(qiáng)、8 h︰16 h光周期條件下, 離體培養(yǎng)的雌生殖托可完成性成熟, 完成全部排卵的生殖托在培養(yǎng)至第20 d時(shí)開始腐爛。鄒定輝等(2010)關(guān)于羊棲菜離體生殖托低溫超低溫的保存研究表明, 離體生殖托超低溫和冰凍條件下保存不理想, 而干出狀態(tài)(避免失水)的生殖托在5 °C條件下可以保存30 d, 其代謝活性、細(xì)胞相對(duì)活力及配子釋放能力均較好。王龍樂等(2017)關(guān)于羊棲菜葉狀體與生殖托干出脫水及沉水條件下的熒光特性研究表明, 雌生殖托的干出脫水的耐受力高于雄生殖托, 半脫水狀態(tài)下不影響生殖托的PSII活性, 而大幅度脫水將嚴(yán)重降低生殖托的PSII活性, 且損傷不可逆。上述研究表明, 離體生殖托可通過表皮、近表皮和皮層細(xì)胞進(jìn)行光合作用及營養(yǎng)物質(zhì)選擇吸收, 維持自身生長發(fā)育所需的養(yǎng)分和養(yǎng)料。上述研究表明, 羊棲菜生殖托可離體培養(yǎng), 過度失水將導(dǎo)致表皮、近表皮和皮層組織細(xì)胞損傷, 致使主要光合作用場(chǎng)所——表皮中的PSII活性不可逆損傷。

4 結(jié)論

羊棲菜假根、莖、葉和生殖托(雌托和雄托)器官組織結(jié)構(gòu)相同, 均包括表皮、近表皮、皮層和髓部組織區(qū)。氣囊的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)與其它器官不同, 由外向內(nèi)分別為表皮、近表皮、皮層和內(nèi)表皮組織區(qū)結(jié)構(gòu), 無髓部組織, 但具有內(nèi)皮層結(jié)構(gòu)。羊棲菜各器官表皮細(xì)胞呈柵欄狀排列結(jié)構(gòu), 淀粉粒含量豐富, 近表皮、皮層和髓部細(xì)胞淀粉粒含量相對(duì)較少。羊棲菜幼孢子體莖皮層和髓部組織細(xì)胞呈卵圓形或圓形形態(tài)特征, 不具有成熟孢子體莖皮層和髓部細(xì)胞的多形植物細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)特征。

羊棲菜假根、莖和葉的表皮、近表皮和皮層色素含量較多細(xì)胞的植物細(xì)胞全能性較強(qiáng), 可分生愈傷組織, 誘導(dǎo)生成幼孢子體。羊棲菜各器官表皮為光合作用主要場(chǎng)所, 富含光合色素復(fù)合體、chl和巖藻黃素, 其次為近表皮和皮層組織, chl的含量受溫度、光照及干出與復(fù)水等環(huán)境因子的變化而變化。葉的光合活性與形態(tài)有關(guān), 其生長、光合色素含量及可溶性蛋白的含量對(duì)白光、紅光、綠光、藍(lán)光等單色光源的響應(yīng)與傳統(tǒng)熒光不同。羊棲菜不同器官的植物激素含量不同, 次生葉中茉莉酸和水楊酸的含量較高, 莖和次生葉中赤霉素的含量較高。Cu、Fe、Mn、Zn、Mg、Ca、Al、Cd、Pb等微量元素和重金屬元素主要分布于羊棲菜莖和葉細(xì)胞壁中, 其次為液泡和細(xì)胞器。

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ANALYSIS OF PHYSIOLOGICAL AND ECOLOGICAL FUNCTIONS TO MATURE SPOROPHYTE OF CULTIVATIONBASED ON ITS ORGAN MORPHOLOGICAL STRUCTURE

LIN Li-Dong1, MA Zeng-Ling2, CHEN Bin-Bin3, WU Ming-Jiang3

(1. Post-Doctor Workstation of Wenzhou Dongtou District Marine and Fishery Development Research Center, Dongtou, Wenzhou 325700, China; 2. Zhejiang Provincial Key Laboratory for Water Environment and Marine Biological Resources Protection, Wenzhou University, Wenzhou 325035, China; 3. College of Life and Environmental Science, Wenzhou University, Wenzhou 325035, China)

To understand in-depth the histomorphological characteristics of mature sporophytic rhizoids, stems, leaves (air-bladder), and reproductive receptacles (female receptacles and male receptacles) of cultivated, the histological morphology of the mature sporophytic organs was observed and analyzed using paraffin section method. The histomorphological observation of cultivationorgans showed that there were significant differences in the morphological, structure and width of the transected tissues of different organs. The transverse tissues of the rhizoids, stems, leaves, female and male reproductive organs of cultivationmature sporophytic were epidermis, near epidermis, cortex and pith, respectively from outside to the inside. However, the air-bladder is unmyelinated, but has an endothelium. Furthermore, the male and female reproductive pads include the reproductive nest, egg, and sperm structure. The epidermal cells of all organs of cultivationwere arranged in palisade, and the order of width was: male reproductive receptacle > stem > female reproductive receptacle > air-bladder > leaf > rhizoid. The most starch granules and chloroplast were found in epidermis and near epidermis cells, while the relatively low starch granules were found in cortex and pith cells. The cortical cells had the largest lumen, with typical plant cell morphology and well-developed intercellular space, while the medullary cells were dense and most of the lumen were small and a few were large. The signal expressions of physiological and biochemical characteristics of different organs of cultivatedagainst environmental stresses such as light, water temperature, dryness, submersion, and hyposalinity were significantly different. This study provided basic data and theory reference for the analyses on subcellular structural differences among the organs of cultivated, the mechanisms of absorption, transport, and storage of micronutrient or heavy metal ions, and the response of physiological metabolic pathways to environmental signals.

; organ; morphological structure; physiology and ecology; functions

* 國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“藍(lán)色糧倉科技創(chuàng)新”重點(diǎn)專項(xiàng)項(xiàng)目, 2018YFD0901500號(hào); 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目, 41876124號(hào), 41706147號(hào); 溫州市洞頭區(qū)重大漁農(nóng)業(yè)科技計(jì)劃項(xiàng)目, N2018Y03A號(hào); 溫州市農(nóng)業(yè)豐收計(jì)劃項(xiàng)目, FSJH2019013號(hào)。林立東, 博士, 高級(jí)工程師, E-mail: rsclinlidong@126.com

吳明江, E-mail: wmj@wzu.edu.cn

2021-01-10,

2021-03-30

Q946; S968.4

10.11693/hyhz20210100008