蟲螨腈及其代謝物在韭菜和姜上的殘留檢測

張俊杰，廖先駿，許樂園，胡佩杰，曹常鵬，孫豐收，*

(1.山東農業大學植物保護學院，山東 泰安 271018) (2.山東農業大學農藥環境毒理研究中心，山東 泰安 271001) (3.農業農村部農藥檢定所，北京 100125)

蟲螨腈(chlorfenapyr)分子式為C15H11BrClF3N2O，屬于新型吡咯類殺蟲劑，對鱗翅目、同翅目等多種害蟲的防治具有高效性[1-3]。韭菜和姜是人們經常食用的蔬菜，也是重要的調味品，病蟲害的發生嚴重影響韭菜和姜的產量和質量，化學農藥的使用是防治病蟲害最常用、最直接的手段。韭菜遲眼蕈蚊是韭菜常見蟲害，甜菜夜蛾是姜上重要的蟲害[4-5]，蟲螨腈對甜菜夜蛾的防治有顯著效果，且對于防治韭菜遲眼蕈蚊具有較高的應用潛力，并分別于2014年和2018年首次在韭菜和姜上登記[6-7]。

隨著蟲螨腈在韭菜和姜上廣泛使用，可能導致蟲螨腈殘留風險增加，從而可能對居民的身體健康產生不良影響。為評估蟲螨腈的安全性，根據聯合國糧農組織和世界衛生組織農藥殘留聯合專家會議(JMPR)2018年評估報告，蟲螨腈殘留物膳食風險評估為蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈10倍之和，以蟲螨腈表示[8]。在評估蟲螨腈使用對人的安全性時，需評估蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈的潛在風險。我國食品安全國家標準中規定了蟲螨腈在甘藍、大白菜、黃瓜等作物上的最大殘留限量，尚未制定蟲螨腈在韭菜和姜上的最大殘留限量，且未見蟲螨腈及溴代吡咯腈在韭菜和姜上的殘留檢測方法報道。本研究建立了蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈在復雜基質韭菜和姜上的殘留檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 98.1%蟲螨腈標準物質，99.3%溴代吡咯腈標準物質；乙腈、甲醇、甲酸，色譜純；高溫蒸餾水；氯化鈉、無水硫酸鎂，分析純；N-丙基乙二胺(PSA)、多壁碳納米管(MWCNT)。

1.2 試驗儀器 TSQ Quantis 超高效液相色譜-串聯質譜儀(UPLC-MS/MS)；EVO TSQ8000氣相色譜-串聯質譜儀(GC-MS/MS)；萬分之一電子天平；百分之一電子天平；均質機；漩渦混合儀；離心機；移液器等。

1.3 溶液配制

1.3.1 標準溶液配制 稱取蟲螨腈和溴代吡咯腈標準物質用乙腈溶解并定容，得到兩種有效成分的標準溶解母液，用乙腈釋成濃度均為0.001、0.01、0.05、0.1、0.5mg/L的標準溶液；用韭菜和姜空白基質提取液稀釋成濃度均為0.001、0.01、0.05、0.1、0.5mg/L的基質標準溶液。

1.3.2 添加回收 韭菜和姜用均質機粉碎，向韭菜和姜基質中添加蟲螨腈和溴代吡咯腈標樣，漩渦混勻后靜置2h，使得添加濃度均為0.01、1和10mg/kg，每個添加濃度重復處理5次。

1.4 樣品前處理

1.4.1 提取 韭菜和姜樣品用均質機粉碎，稱取10.00g樣品至離心管中，加入20mL乙腈，漩渦震蕩5min，再加入1.00g氯化鈉、4.00g無水硫酸鎂，旋渦震蕩3min，以4 000r/min離心2min，上清液備用。

1.4.2 凈化 取上清液1.500mL，置于2mL離心管(內含40mg PSA、10mg C18、5mg MWCNT和150mg 無水硫酸鎂)中凈化，漩渦震蕩5min，以10 000r/min離心2min，過0.22μm 有機濾膜，稀釋后進樣檢測。蟲螨腈進行GC-MS/MS檢測，溴代吡咯腈進行UPLC-MS/MS檢測。

1.5 分析條件

1.5.1 蟲螨腈分析條件 GC-MS/MS，EI源；采集方式：SRM；檢測器電壓：70ev；載氣：He，純度：99.999%；

色譜柱：毛細管柱(TG-SQC，15.0m×0.25mm，0.25μm)；

柱流量：1.2mL/min；進樣體積：1μL；進樣方式：不分流；

程序升溫：初始溫度：100℃，保持1min；以30℃/min 升溫至280℃，保持5min。

表1 蟲螨腈質譜檢測參數

圖1 蟲螨腈典型譜圖(0.01mg/L)

1.5.2 溴代吡咯腈分析條件 超高效液相色譜-串聯質譜(UPLC-MS/MS)條件：

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC?BEH C18柱，2.1×50mm，1.7μm；

柱溫：35℃；流速：0.30mL/min；進樣體積：1μL。

表2 梯度洗脫程序

離子源：電噴霧離子源(ESI)，負離子模式；監測模式：多反應離子監測(MRM)；

噴霧電壓：3 500V；脫溶劑溫度：350℃；離子傳輸管溫度：325℃；

鞘氣壓力：50Arb；輔助氣壓力：10Arb

表3 溴代吡咯腈質譜檢測參數

圖2 溴代吡咯腈典型譜圖(0.01mg/L)

2 結果與討論

2.1 線性關系測定 蟲螨腈和溴代吡咯腈在0.001～0.5mg/L濃度范圍內，經上述分析條件檢測，以濃度為橫坐標，以對應峰面積為縱坐標，獲得標準曲線(表4～5)。結果表明，在0.001～0.5mg/L范圍內，蟲螨腈和溴代吡咯腈在乙腈、韭菜基質和姜基質上的線性相關系數均>0.99，線性關系良好。

表4 蟲螨腈標準曲線和相關系數

表5 溴代吡咯腈標準曲線和相關系數

樣品經前處理方法提取凈化，是否達到較為理想的前處理效果，以基質效應評價。基質效應為基質標準曲線的斜率與溶劑標準曲線的斜率比值，斜率比值在0.8～1.2之間，表示該方法的基質效應可忽略[9]。結果表明，蟲螨腈在韭菜基質中的斜率比值為0.8，在姜基質中的斜率比值為0.93；溴代吡咯腈在韭菜基質中的斜率比值為0.98，在姜基質中的斜率比值為1.04，在此方法中基質效應可忽略。

2.2 正確度和精密度測定 蟲螨腈和溴代吡咯腈在韭菜和姜上添加濃度為0.01、1和10mg/kg時，經上述分析條件下檢測，獲得平均回收率和相對標準偏差，以評估該方法的正確度和精密度。結果表明，蟲螨腈在韭菜上的平均回收率為88.4%～104%，相對標準偏差分別為3.4%、3.9%、1.5%；在姜上的平均回收率為93.0%～99.9%，相對標準偏差分別為4.9%、2.8%、3.1%；溴代吡咯腈在韭菜上的平均回收率為87.8%～98.9%，相對標準偏差分別為4.6%、4.6%、4.0%；在姜上的平均回收率為87.2%～94.7%，相對標準偏差分別為4.6%、2.7%、3.5%(表6～7)。

表6 蟲螨腈回收率和相對標準偏差(n=5)

表7 溴代吡咯腈回收率和相對標準偏差(n=5)

3 結論

本研究建立了蟲螨腈和溴代吡咯腈在韭菜和姜上的殘留檢測方法，通過乙腈提取，40mg PSA、10mg C18、5mg MWCNT凈化，蟲螨腈使用UPLC-MS/MS檢測，溴代吡咯腈使用GC-MS/MS檢測。在0.001～0.5mg/L范圍內R2>0.99，在0.01、1和10mg/kg 3個添加水平下，方法的線性范圍、正確度和精密度均符合殘留檢測標準[10]。

該方法準確性好、靈敏度高，可用于蟲螨腈和溴代吡咯腈在韭菜和姜上的殘留檢測，為評估蟲螨腈安全性提供檢測方法參考。