IL-33、IL-37在乙肝相關(guān)肝硬化患者中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

許君偉

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科，河南省洛陽市 471000

乙型肝炎病毒(HBV)是一種在全球呈現(xiàn)普遍流行的病原菌，數(shù)據(jù)預(yù)估全球約有20億人曾感染過HBV，約有4億人攜帶有HBV病毒，約有2 000萬慢性乙型肝炎(CHB)患者，流調(diào)學(xué)指出，每年死于HBV感染引發(fā)的肝功能衰竭、肝硬化后肝癌病例數(shù)可達(dá)80萬人，位居各類致死性疾病的第15位，提示HBV感染已成為全球性的公共衛(wèi)生事業(yè)問題[1-3]。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，個(gè)體感染HBV后，病原菌會(huì)對(duì)機(jī)體造成持續(xù)而慢性的損傷，晚期患者可出現(xiàn)肝功能失代償、肝硬化或肝細(xì)胞癌等多種并發(fā)癥，因而臨床上建議及早對(duì)HBV感染患者開展干預(yù)[4-5]。近些年隨著對(duì)乙型肝炎研究的深入，免疫應(yīng)答機(jī)制在肝硬化進(jìn)程中的作用逐漸被發(fā)掘出來，已有多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞因子在急性肝炎以及CHB的免疫致病進(jìn)程中起到了重要作用，其中以T淋巴細(xì)胞清除病毒過程中會(huì)造成肝細(xì)胞損傷為主[6]。白介素-33(IL-33)與白介素-37(IL-37)都是近些年新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞介素家族成員，上述細(xì)胞因子主要通過介導(dǎo)免疫應(yīng)答來影響炎癥反應(yīng)的發(fā)生、調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的平衡，已有的研究證實(shí)IL-33在慢性病毒性肝炎患者的病程進(jìn)展中起到重要作用，IL-37則是Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫機(jī)能的重要介質(zhì)[7]。本文旨在探究IL-33與IL-37在乙肝相關(guān)肝硬化患者中的表達(dá)，并就其對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值進(jìn)行探究，以期為乙肝相關(guān)肝硬化患者的臨床治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)詳述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月—2019年1月于我院接受治療的96例乙肝相關(guān)肝硬化患者為研究對(duì)象，將其按照是否出現(xiàn)肝硬化區(qū)分為慢性乙型肝炎組(CHB，50例)和HBV相關(guān)性肝硬化組(HBV-LC，46例)，另選取同期于我院接受體格檢查的50例健康個(gè)體為健康對(duì)照組(HC)。CHB組中男27例，女23例，平均年齡為(45.98±4.33)歲；HBV-LC組中男23例，女23例，平均年齡為(45.99±5.01)歲，HC組中男28例，女22例，平均年齡為(46.01±4.29)歲。三組患者的性別、年齡對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組對(duì)象均符合《慢性乙型肝炎防治指南》[8]中關(guān)于乙肝相關(guān)肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)意識(shí)清晰能夠配合進(jìn)行調(diào)研；(3)病歷資料齊全；(4)調(diào)研經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施；(5)患者及其家屬對(duì)本次調(diào)研過程、方法、原理清楚明白并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并精神疾患者；(2)近1個(gè)月內(nèi)服用抗菌藥物治療者；(3)合并惡性腫瘤患者；(4)合并其他病毒感染者；(5)合并自身免疫系統(tǒng)疾患者；(6)酒精性肝硬化者；(7)合并其他肝臟疾患者。剔除標(biāo)準(zhǔn)：(1)調(diào)研期間主動(dòng)要求退出者；(2)調(diào)研期間未按照要求服藥者；(3)調(diào)研期間失聯(lián)者。

1.3 干預(yù)方法 入組對(duì)象采血前1d需清淡飲食，清晨保持空腹?fàn)顟B(tài)，使用不抗凝管采集三組個(gè)體的外周靜脈血5ml，使用低速離心機(jī)3 000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min，收集三組個(gè)體的血清并儲(chǔ)存于-80℃條件下，待樣本收集完畢后統(tǒng)一采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)開展IL-33與IL-37水平的檢測(cè)，所應(yīng)用試劑盒均購自萊爾生物科技有限公司，每個(gè)指標(biāo)檢測(cè)3次，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，取平均值作為最終結(jié)果。

入組的CHB與HBV-LC患者按照其病情的差異選擇抗病毒藥物開展積極治療，于治療14d后再次進(jìn)行血樣采集與生物因子水平檢測(cè)工作。

1.4 觀察指標(biāo)及評(píng)測(cè)標(biāo)準(zhǔn) 主要觀察指標(biāo)為干預(yù)前CHB、HBV-LC、HC三組個(gè)體的外周血IL-33和IL-37水平，以及抗病毒治療后CHB與HBV-LC組患者外周血中的IL-33與IL-37水平；同時(shí)在治療前對(duì)CHB和HBV-LC患者使用Child-Pugh量表進(jìn)行評(píng)分，Child-Pugh量表參考如下評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：膽紅素低于34μmol/L計(jì)1分，34～51μmol/L計(jì)2分，51μmol/L以上計(jì)3分；白蛋白高于3.5g/L計(jì)1分，2.8～3.5g/L計(jì)2分，2.8g/L以下計(jì)3分；無腹水計(jì)1分，易控制腹水計(jì)2分，難控制腹水計(jì)3分；無肝性腦病計(jì)1分，輕度計(jì)2分，重度計(jì)3分；凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)1～3s計(jì)1分，4～6s計(jì)2分，6s以上計(jì)3分；將上述維度得分相加，即為Child-Pugh量表總分，得分越高代表受試者肝功能損傷越嚴(yán)重[9]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將采集的數(shù)據(jù)錄入到Excel表格中，使用統(tǒng)計(jì)學(xué)SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)采集數(shù)據(jù)開展正態(tài)分布檢驗(yàn)，如數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，對(duì)組間差異性分析選擇χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，組間的差異性分析選擇t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析使用Spearman進(jìn)行，多組間差異性比較采用單因素方差分析，取P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組外周血IL-33與IL-37水平差異比較 經(jīng)組間比較發(fā)現(xiàn)，HBV-LC組患者的IL-33與IL-37水平最高，明顯高于CHB組與HC組(P<0.05)，同時(shí)CHB組的IL-33與IL-37水平也明顯的高于HC組，組間比較差異明顯(P<0.05)，見表1。

表1 三組外周血IL-33與IL-37水平差異比較

2.2 細(xì)胞因子水平與肝功能量表評(píng)分相關(guān)性分析 經(jīng)Spearsman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，乙肝相關(guān)肝硬化患者外周血的IL-33與IL-37水平與其Child-Pugh量表評(píng)分呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)性(r=0.879 5，r=0.636 1，P<0.05)，見圖1。

圖1 細(xì)胞因子水平與肝功能量表評(píng)分相關(guān)性分析

2.3 治療前后CHB與HBV-LC組患者細(xì)胞因子水平變化分析 經(jīng)規(guī)范化抗病毒治療后， CHB與HBV-LC組患者的外周血IL-33與IL-37水平均較治療前有了明顯的降低，前后比較差異明顯(P<0.05)，見表2。

表2 治療前后CHB與HBV-LC組患者細(xì)胞因子水平變化分析

3 討論

當(dāng)前的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，中國仍然是HBV感染率最高的國家之一，HBV的感染是導(dǎo)致目前國內(nèi)終末期肝病以及肝硬化相關(guān)的肝衰竭以及肝癌致死的主要原因，一項(xiàng)2014年的流調(diào)學(xué)顯示，我國肝癌的新增病例以及死亡人數(shù)位居世界前列，其中主要的原因之一即HBV感染[10]。乙型肝炎仍然是當(dāng)前國內(nèi)較嚴(yán)重的公共衛(wèi)生事件，給社會(huì)、國家?guī)砹顺林氐呢?fù)擔(dān)，也對(duì)居民健康造成了明顯威脅，雖然當(dāng)前針對(duì)HBV感染的研究較多，但乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制尚不明確，其治療方式更新仍然較為緩慢。近幾年關(guān)于HBV感染與免疫機(jī)制應(yīng)答方面的研究有所進(jìn)展，有學(xué)者通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HBV感染機(jī)體入侵肝細(xì)胞后，會(huì)釋放出抗原引發(fā)機(jī)體對(duì)其產(chǎn)生免疫應(yīng)答，該進(jìn)程中多種免疫細(xì)胞(如Th1、Th2、Treg細(xì)胞等)均廣泛參與并分泌對(duì)應(yīng)的細(xì)胞因子參與其中[11]。已有的研究證實(shí)，Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞之間的平衡是維持機(jī)體正常免疫的重要前提，而HBV感染后，Th1細(xì)胞會(huì)處于異常激活狀態(tài)，Th2細(xì)胞則明顯功能被抑制，從而導(dǎo)致了肝臟出現(xiàn)炎癥病變[12]。

本文就HBV感染與乙型肝炎的相關(guān)性進(jìn)行了初步分析，鑒于免疫應(yīng)答在乙型肝炎進(jìn)程中發(fā)揮的重要作用，有學(xué)者提出是否可通過對(duì)細(xì)胞因子水平的監(jiān)測(cè)來評(píng)估乙型肝炎病情嚴(yán)重程度。IL-33與IL-37都是免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，其在炎癥性與自身免疫性疾病發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮的作用也引起了部分學(xué)者的關(guān)注。IL-33是一種具有多種生理功能的細(xì)胞因子，既能夠在細(xì)胞核中調(diào)節(jié)基因表達(dá)，又能夠分泌到胞質(zhì)中誘導(dǎo)Th2類細(xì)胞炎癥，IL-37是抑制性細(xì)胞因子的一種，有研究顯示，IL-33具有促進(jìn)細(xì)胞分裂和激活NF-κB細(xì)胞信號(hào)通路的作用，IL-37具有抑制Th1細(xì)胞分化及功能表達(dá)、促進(jìn)Treg細(xì)胞分化的作用，上述兩種因子廣泛參與了機(jī)體的多種感染性疾病、過敏性疾病和自身免疫性疾病[13]。

本研究通過設(shè)立不同分組的方式，就IL-33與IL-37在乙肝相關(guān)肝硬化患者中的表達(dá)以及對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，同健康個(gè)體相比較，CHB和HBV-LC組患者的IL-33、IL-37水平明顯升高，且HBV-LC組患者明顯高于CHB組患者，提示IL-33和IL-37可能與乙型肝炎相關(guān)肝硬化的病理進(jìn)程存在一定關(guān)聯(lián)。一項(xiàng)針對(duì)80例慢性乙型肝炎患者開展的調(diào)查研究結(jié)果顯示，對(duì)慢性乙型肝炎患者開展動(dòng)態(tài)病情評(píng)估后發(fā)現(xiàn)，隨著治療的進(jìn)行，慢性乙型肝炎患者的IL-33水平也呈現(xiàn)了逐漸降低趨勢(shì)，且相關(guān)性分析顯示IL-33水平同患者的HBV-DNA、ALT水平呈現(xiàn)一定的正相關(guān)性[14]。本文作者分析認(rèn)為，IL-33和IL-37都屬于IL細(xì)胞因子家族的一員，受到炎癥刺激后在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，并在細(xì)胞溶解后大量釋放，當(dāng)個(gè)體被HBV感染后，IL-33可以通過激活Th2細(xì)胞相關(guān)免疫功能來起到宿主保護(hù)作用，這提示IL-33與IL-37均與肝臟的炎癥進(jìn)程相關(guān)，HBV-LC、CHB、HC病情呈現(xiàn)減輕趨勢(shì)，因而其IL-33和IL-37的水平也在逐漸降低。文中進(jìn)一步對(duì)入組對(duì)象開展Child-Pugh量表評(píng)估，展開了IL-33、IL-37與肝功能的相關(guān)性研究，結(jié)果顯示，乙肝相關(guān)肝硬化患者外周血的IL-33與IL-37水平與其Child-Pugh量表評(píng)分呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)性，這與張曉慧等[15]的研究結(jié)果相一致。本文經(jīng)過積極的抗病毒治療后，患者的IL-33和IL-37水平明顯降低，這說明隨著慢性乙型肝炎患者臨床癥狀的改善，患者外周血中免疫細(xì)胞因子的水平也有所變化，這與前文中不同病程患者外周血IL-33和IL-37水平不同相呼應(yīng)。

綜上所述，乙肝相關(guān)肝硬化患者外周血中的IL-33與IL-37水平明顯升高，合并肝硬化患者尤為明顯，經(jīng)抗病毒治療后患者的IL-33與IL-37水平明顯降低，提示其在CHB的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中具有重要作用，可考慮將上述因子作為療效免疫評(píng)估指標(biāo)之一。