白銀地區丙型肝炎基因分型的變化及臨床意義＊

陶桂云,李霞霞，包 穎，黃曉晶，陳金霞，查成喜

（1.白銀市中西醫結合醫院，甘肅 白銀 730050；2 靖遠縣人民醫院，甘肅 白銀 730050；3.甘肅省中醫院，甘肅 蘭州 730000）

丙型肝炎是一種通過輸血、破損皮膚、血液透析、性接觸、母嬰垂直傳播等多種途徑傳播的，危害人類健康的重要傳染病之一，丙型肝炎病毒（HCV）是其致病病原體，屬于黃病毒科，核酸是單股、線性、正鏈RNA，在不同區域的感染者中可檢測出不同的基因型分布，且與疾病的嚴重程度之間有著一定的相關性，可以根據基因型實施不同的治療方案，所以研究丙肝的基因型不僅有助于掌握HCV的流行病學特點，也有助于了解丙肝的危險因素及疾病的進展情況[1-3]。本研究通過分析2013～2019 年白銀地區HCV 基因型分布情況與2011～2012 年數據進行比較，為該地區丙肝患者臨床治療提供可靠的流行病學資料，臨床可進一步根據《丙型肝炎防治指南》（2015 年更新版）中不同亞型選擇抗病毒治療方案，以期提高丙肝的治療效果。

1 對象與方法

1.1 對象

收集白銀地區2014～2019 年各醫院檢測的ELISA 檢測抗體陽性217 例患者血清或血漿1ml，-80℃以下保存。其中13 例由于病毒載量低于檢測下限無法分型，204 例通過PCR 反向斑點法進行基因分型，男性112 例，年齡10-79 歲，平均年齡46.7歲；女性92 例，年齡16-75 歲，平均年齡42 歲。

1.2 儀器與試劑

美國ABI7500 實時熒光PCR 分析儀；DA-8000核酸雜交分析儀；核酸提取純化試劑盒（達安基因）；HCV 實時熒光定量PCR 試劑（達安基因）；基因分型檢測試劑盒（達安基因）。

1.3 方法

HCV-RNA 定量檢測嚴格按照中山大學達安基因股份有限公司《丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒》操作說明書和實驗室操作規程。HCV 基因型檢測：提取純化HCV-RNA 后，一步法反轉錄-PCR 擴增HCV 基因，98℃變性10min，立即冷卻加入雜交模條，雜交，顯色，記錄結果。

1.4 統計學方法

采用SPSS20.0 軟件進行統計學分析，計數資料用例數或百分率表示，HCV 基因型的分布差異采用卡方檢驗，以p＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 HCV 基因型結果

204 例HCV-RNA 標本中，共發現1 型、2 型、3型三種基因型，4 種基因亞型（1b、1a、2a、3a），1 型基因143 例（70.1%），其中1b 亞型122 例（66.7%），1a亞型2 例（3.4%）；2 型基因49 例（24.1%），全部為2a亞型；3 型基因12 例（5.8%），全部為3a。以1b 型為主，其次是2a 型，最后是3a 型（見表1，如圖1 所示）。

圖1 白銀地區HCV 基因型分布情況

表1 甘肅省白銀地區HCV 的不同基因型檢出率n%（例數）比較

2.2 HCV 基因型與性別、年齡相關性分析

在204 例HCV 基因分型標本中，男女之間1b、1a、2a 和3a 基因型分布不存在性別差異，差異無統計學意義（x2=5.881，p=0.116）。1 型基因型年齡中位數為41 歲，2 型基因型年齡中位數為43 歲，3 型基因型患者年齡中位數為44 歲。各組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 HCV 基因型與性別相關性比較 例數(%)

2.3 2011-2019 年HCV 各基因型變化情況

研究者2011-2012 年數據[4]與2014-2019 年數據比較，各基因型分布情況見表3。

表3 2011-2019 年HCV 基因型分布情況 例(%)

通過分析發現，2013～2019 年丙肝分型趨勢與2011 年～2012 年分型情況無差異，白銀地區丙型肝炎病毒感染以1b 型為主，其次是2a 型，沒有檢出在我國常見的1b/2a 混合感染的患者。但在白銀地區發現了中國其它地區少有發現的2c、3a 型的感染，但病例數較少，還需進一步觀察。

3 討論

丙型病毒性肝炎，簡稱為丙型肝炎、丙肝，是一種由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要經輸血、針刺、吸毒等傳播，據世界衛生組織統計，全球HCV 的感染率約為3%，估計約1.8 億人感染了HCV，每年新發丙型肝炎病例約3.5 萬例。丙型肝炎呈全球性流行，可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發展為肝硬化甚至肝細胞癌（HCC）。HCV 基因組高度異質性，根據核苷酸序列的差異程度，可將HCV 分為6 個基因型及至少67種亞型[6]，同時，HCV 基因型分布存在地理性差異。1a 基因亞型多見于美國，1b 基因亞型分布于亞洲各國，2a 和2b 基因亞型占遍布歐洲和日本，而2c 基因亞型最常見于意大利北部[5，6]。6 個HCV 基因型在我國大陸都有分布，但1b、2a 型最常見，如赤峰地區1b 型占71.11%，2a 型占16.33%[7]、北京地區1b 型占70%，2a 型占23.9%[8];山東地區1b 占64.28%，2a占30.57%)[9];在北方地區1b、2a 均高于全國平均水平，然而在南方地區并非如此，云南地區以6 型(43.48%)為主，其次為3b 型[10]，杭州地區以1b 為主（56.7%）接近于全國平均水平，其次是2a（10.2%），3b 型僅占8.42%[11]；廣州番禺地區2016 年1b 型為主要類型，占48.0%，低于全國平均水平[12]。本研究結論白銀地區丙肝患者主要以1b 型為主，其次是2a 型，符合北方HCV 基因分型的特點，另外甘肅省白銀地區發現在中國其它地區少有發現的2c、3a 型的感染，也未發現混合感染1b/2a 的情況。研究表明HCV 基因型與HCVRNA 含量有明顯的相關性，1、2型感染者血清HCV-RNA 顯著高于3 型感染者，病毒復制相對活躍，易轉為慢性[13]。因此，本研究結果以1b 型為主，2a 型次之，且樣本病毒含量都是大于103 以上的樣本，進一步顯示1、2 型病毒含量高。不同HCV 的基因型對IFN-ɑ 治療反應也有明顯差異，可能與的coreE2 和NS5a 以及病毒復制強弱有關[14]。因此，研究區域HCV 基因分型結果有助于制定個體化抗病毒治療方案，為本地區丙型肝炎的診斷、治療和預防以及患者的預后判斷提供強有力的依據。