支氣管哮喘患兒外周血調節性T淋巴細胞水平IL-10 sIgE水平及其臨床意義

王汝瓊，李小明，林道炯，吳守業，周瓊花

(海南省婦女兒童醫學中心，海南 海口 570000)

支氣管哮喘作為一種常見的呼吸系統疾病，在臨床上通常表現為反復發作性喘息以及胸悶、咳嗽或呼吸困難，不過該病病因復雜，通常認為該病發作與免疫耐受的破壞有關[1,2]，由于免疫耐受在抗原刺激下，對抗原特異性應答的T細胞與B細胞不能被激活，即不能執行正常的免疫應答，而當該過程遭受到破壞后，則會對超敏性疾病和自身免疫性疾病產生排斥反應。另外根據相關研究[3]報道顯示，在哮喘的發病過程中調節性T淋巴細胞(Treg)發揮比較重要作用，可通過其水平來評估哮喘的嚴重程度。Treg包括兩種類型，一類為天然調節性T淋巴細胞，主要以細胞與細胞接觸信號性方式發揮調節性作用；另一類為適應性調節性T淋巴細胞(iTreg)，包括I型調節性T細胞(Tr1)和Th3等細胞，主要通過分泌白細胞介素(IL-10)和轉化生長因子β(TGF-β)來下調免疫反應[4]。目前，關于可分泌IL-10的iTreg和Tr1與哮喘的關系還少有報道。本研究探討戶塵螨過敏的支氣管哮喘患兒外周血調節性T淋巴細胞水平、IL-10和特異性IgE(sIgE)水平，取得的結果如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2018年2月至2020年2月我院收治的163例戶塵螨過敏的支氣管哮喘患兒作為研究組。納入標準：①符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[5]中診斷標準，即喘息反復發作且發作時肺部聞及喘鳴音者；②戶塵螨過敏原皮膚點刺試驗為陽性，且戶塵螨特異性免疫球蛋白(sIg)E≥0.7kU/L者；③臨床資料完整且積極配合檢查者；④同意簽署知情同意書者。排除標準：①肺部患有其他疾病(如呼吸衰竭、肺栓塞等)者；②心肝腎等功能出現異常者；③患有精神方面疾病者。根據患兒病情情況將其依次分為輕度、中度和重度患者，分別為52例、63例和48例。另外選取接受體檢的健康同齡兒童50例作為對照組。本研究通過本院倫理委員會審批。

1.2方法：兩組兒童均于清晨采集外周靜脈血5mL，取其中2mL用來檢測IL-10和sIgE水平，留置的3mL用來檢測調節性T淋巴細胞水平。其中具體檢測方法如下：①檢測IL-10和sIgE水平方法：先將取好的外周靜脈血于室溫放置1h，然后以2000r/min的轉速離心10min，取上清液留置于-70℃冰箱備用。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測IL-10水平，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。sIgE水平則可根據人總免疫球蛋白E定量檢測試劑盒操作指南進行測定，其中每個樣本均要求同一檢測者進行重復測量3次，之后取其平均值，同時采取正確的統計學分析方法進行分析以控制結果偏倚。②檢測測調節性T淋巴細胞水平方法：將留置的3mL外周靜脈血使用肝素鈉抗凝后，然后采用淋巴細胞分離液將外周血淋巴細胞進行分離，再將淋巴細胞濃度用含10%小牛血清的完全RPMI1640培養基調整為2×109L-1，再于24孔細胞培養板內每孔接種1mL，同時給予20g/L的戶塵螨浸出液刺激后，再將其放于37℃含有5%CO2的飽和濕度細胞培養箱中培養48h。培養結束后根據試劑盒說明書對標本進行處理，再采用型號為FACSCantoII的流式細胞分析儀檢測iTreg和Trl細胞百分比，每個樣本均重復上機檢測3次。

1.3觀察指標：①比較兩組兒童肺功能情況:其中肺功能可采用日本捷斯特HI-801便攜式肺功能儀進行測定，主要檢測指標包括：第1秒用力呼氣容積(FEV1)、第1秒用力呼氣量占用力肺活量比值(FEV1/FVC)和呼氣峰值流速(PEF)，由同一檢測者對患者采取3次重復測量之后，取其平均值。②比較兩組兒童調節性T淋巴細胞水平:其中調節性T淋巴細胞水平主要檢測iTreg(CD4+CD25+Foxp3+IL-10+)和Trl(CD4+CD25+Foxp3-IL-10+)細胞百分比。③比較兩組兒童免疫因子水平:主要包括以下指標：IL-10、sIgE和TGF-β。

2 結 果

2.1比較各組兒童一般臨床資料：各組性別、年齡、病程和戶塵螨sIgE等一般資料比較發現無差異(P>0.05)，見表1。

表1 各組一般臨床資料比較

2.2比較各組兒童肺功能情況：各組FEV1、FEV1/FVC和PEF值比較均具有統計學意義(P<0.05)，其中患病組與對照組相比，發現病情程度越嚴重，FEV1、FEV1/FVC和PEF值則越小，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組兒童肺功能情況比較

2.3比較各組兒童調節性T淋巴細胞水平:各組iTreg和Tr1細胞所占比例比較均具有統計學意義(P<0.05)，其中患病組與對照組相比，發現病情程度越嚴重，iTreg和Tr1細胞所占比例越小，且差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 各組兒童調節性T淋巴細胞水平比較

2.4比較兩組兒童免疫因子水平：各組IL-10、TGF-β和sIgE水平比較均具有統計學意義(P<0.05)，其中患病組與對照組比較，發現病情程度越嚴重，IL-10、TGF-β水平越低(P<0.05)，而sIgE水平則越高(P<0.05)，見表4。

表4 兩組兒童免疫因子水平比較

3 討 論

支氣管哮喘是以慢性氣道炎癥與氣道高反應性為主要特征的一種異質性疾病，涉及多種細胞及和細胞組分[6]。調節性T淋巴細胞作為一類具有免疫抑制作用的細胞群，其中傳統鑒別調節性T細胞的主要方法為對標記的CD4+和CD25+進行檢測，不過由于感染免疫應答后被活化的T細胞也會表達CD25+，因而難易區分調節性T細胞。目前，根據相關研究報道[7]顯示，Foxp3是調節性T細特異性的標志物，因此檢測調節性T細胞水平可通過檢測CD4+CD25+Foxp3+IL-10+水平來實現。

由于肺功能指標可直接反應患兒呼吸系統狀態，因此對此類患兒進行此方面的研究也極為重要，而PEF、FEV1及FVC則為肺功能的重要檢測指標。本研究結果顯示，各組FEV1、FEV1/FVC和PEF值比較均具有統計學意義(P<0.05)，其患病組與對照組相比，發現病情程度越嚴重，FEV1、FEV1/FVC和PEF值則越小，說明上述指標不僅對于疾病的診斷有較高的反應價值，同時對于疾病的嚴重程度的評估也具有積極的臨床意義。各組iTreg和Tr1細胞所占比例比較均具有統計學意義(P<0.05)，其中患病組與對照組相比，發現病情程度越嚴重，iTreg和Tr1細胞所占比例越小，且差異具有統計學意義(P<0.05)，在相關臨床研究[8]結果中，也證明調節性T淋巴細胞不僅對自身抗原的免疫反應具有抑制作用，另外還可調控其它免疫細胞的活動，在多種免疫性疾病中均呈紊亂狀態。在本研究中，則表明病情嚴重程度與調節性T淋巴細胞也具有一定的相關性，即水平越低，其病情越嚴重，在臨床上可作為判定支氣管哮喘嚴重程度的一項重要指標。

對各組兒童免疫因子水平進行比較，發現患病組與對照組比較，其病情程度越嚴重，IL-10、TGF-β水平越低(P<0.05)，而sIgE水平則越高(P<0.05)，因為iTreg主要通過分泌IL-10和轉TGF-β1來發揮免疫負調控作用，而通過檢測其哮喘患兒體內iTreg水平發現，iTreg與病情呈正相關，故IL-10和TGF-β1水平則與病情嚴重程度呈負相關。另外由于由戶塵螨所引起的哮喘為IgE介導的T細胞依賴的變應性炎癥，是機體對變應原的一種超敏反應，其表現為變應原和抗體結合后產生的組織反應，參與變態反應的抗體主要是IgE，而在患病組患兒中sIgE水平升高反映了過敏原暴露時機體產生的過敏反應，因此可將sIgE作為支氣管哮喘是否處于急性發作期提供理論依據[9]，而將上述指標進行聯合檢測則有助于患者在臨床治療過程中，為疾病轉歸提供參考依據。

綜上所述，對支氣管哮喘患兒肺功能指標以及分泌IL-10的調節性T淋巴細胞和免疫因子IL-10、TGF-β和sIgE水平的檢測，在臨床上不僅有助于評估該疾病的嚴重程度，同時還有利于為疾病治療過程中的轉歸提供參考依據。