酶法檢測糖化白蛋白分析性能和室內質控性能評價*

胡 婷 索明環 王偉佳 陳 穎 胡耀宗 王 霞 田 原 蕭金麗

中山大學附屬中山醫院檢驗醫學中心，廣東省中山市 528403

糖化白蛋白(Glycated albumin,GA)是血中葡萄糖與血漿中白蛋白發生非酶促反應的產物。相對血漿中其他蛋白而言，白蛋白的半衰期較長并且濃度最高，所以最容易被糖化。糖化白蛋白反映患者檢測前2～3周的平均血糖水平，主要用于監測糖尿病患者短期的血糖水平并指導臨床治療方案的調整。與糖化血紅蛋白相比，GA反映的是更短期的血糖波動，且對于存在貧血、血紅蛋白變異體等影響紅細胞壽命的糖尿病患者，GA更能反映真正的血糖控制情況[1-2]。本研究對日本旭化成GA測定試劑盒主要分析性能進行了評價，同時對其室內質控性能進行了評價，現將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 研究對象 標本來源于2020年1—11月在我院住院、門診患者或健康體檢者。隨機選擇健康體檢人群中既往無糖尿病、高血壓、血脂異常、冠心病及卒中病史，BMI為18.5～24.9且肝腎功能、血常規、尿常規等結果正常的表觀健康人，男10名，女10名，年齡18～60歲。

1.2 儀器和試劑 儀器為西門子全自動生化分析儀，型號ADVIA2400。試劑為日本旭化成制藥株式會社生產的Lucica GA-L糖化白蛋白測定試劑盒,配套校準品和質控品(試劑批號：1805A；校準品批號：1805A/1807A；質控品批號：1805A)。實驗前嚴格按照廠家操作規程進行儀器的維護保養和校準，以確保儀器處于良好的狀態。

1.3 方法

1.3.1 精密度評價：參考CLSI EP15-A2文件[3]，選取2份不同濃度的新鮮血清標本，GA濃度分別約為0.627g/dl和1.689g/dl，每天分析一批，每批重復測定3次，連續測定5d。

1.3.2 正確度評價：參考CLSI EP15-A2文件[3]，使用廠商提供的另一個批號校準品(1807A)進行正確度驗證實驗，測定校準品3次，取均值，然后與配套校準品的標示值比較，計算偏倚。

1.3.3 分析測量范圍(AMR)實驗：參考CLSI EP6-A文件[4],收集GA的高值血清樣本，用生理鹽水稀釋高值血清，按體積比1L、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、1H，配成6個濃度梯度的血清，并對各濃度梯度血清測定2次，計算平均值，在1個分析批次內完成。線性范圍評價血清:高值患者血清GA濃度3.50g/dl，白蛋白濃度4.85g/dl。

1.3.4 臨床可報告范圍(CRR)實驗：參照試劑說明書，進行稀釋回收試驗。選擇3份高值標本，用生理鹽水對標本進行稀釋，檢測結果與稀釋后的預期值比較，計算稀釋回收率。

1.3.5 生物參考區間驗證：參考CLSI C28-A2文件，測定健康體檢人群GA濃度，驗證是否與廠家聲明的參考區間一致。

1.3.6 室內質控性能評價實驗：功效函數圖是一種為分析批失控概率(誤差檢出概率和假失控概率) 與該批發生隨機或系統誤差大小關系的圖，即表示統計功效與分析誤差大小(ΔSEc 和 ΔREc) 的關系，則可篩選出更適合于每個不同試驗指標的質控方法，并能夠預測質控方法可否達到預想的質量目標[5-6]。以室內質控的累積變異系數(CV)作為項目的不精密度，以全球室內質控室間比對同方法學組的均值為靶值計算偏倚(Bias)，選擇10%為總允許誤差，借助操作過程規范圖和西格瑪度量圖設計室內質控方法[7]。

1.4 統計學方法 應用Microsoft Excel 2003和伯樂質控管理系統Unity Real Time進行統計分析，線性回歸采用簡單線性回歸分析。

2 結果

2.1 精密度實驗 西門子全自動生化分析儀ADVIA2400采用液態酶法檢測不同濃度的新鮮血清標本，批內精密度和總不精密度均小于廠家聲明的批內和總不精密度，已核實批內精密度與總不精密度與廠家聲明的一致，結果可以接受，詳見表1。

表1 GA精密度評價實驗結果

2.2 正確度實驗 檢測與當前檢測系統校準的校準品不同批號的配套校準品，測定值分別為1.619、1.629、1.623，取其均值1.624g/dl，校準品標識值1.63g/dl，計算二者的相對偏倚為-0.37%，<5%(1/2允許總誤差)，正確度性能得到驗證。

2.3 分析測量范圍實驗(AMR) GA的預期值和實測值無明顯離群值，最佳擬合方程為一次多項式。回歸方程Y=0.990X+0.010，R2為0.999，見圖1。直線回歸結果得知:相關系數為0.999，在0.97～1.03之間，斜率為0.990,與1之間無顯著差異；截距為0.010,與0之間無顯著差異。說明預期值與測量值之間相關性極好,該方法在實驗所涉及的濃度范圍內(0～3.50g/dl)成線性,與廠商提供的線性范圍0.0～3.60g/dl相符。

圖1 GA分析測量范圍驗證試驗

2.4 臨床可報告范圍(CRR) 標本經過稀釋后，確定最大稀釋倍數為10，回收率均落在90%～110%的最大稀釋倍數，故其可報告的臨床范圍(CRR)是：0～36g/dl，可以滿足臨床的需求，見表2。

表2 GA稀釋回收率測定結果

2.5 生物參考區間驗證 20名健康個體GA檢測結果:0.44～0.65g/dl，ALB-GA檢測結果：4.4～5.1g/dl，均在廠家提供的參考區間內。

2.6 室內質控性能評價實驗 操作過程規范圖(見圖2)和西格瑪度量圖(見圖3)，可見GA每天測定質控品個數2，選擇1-5S單質控規則即可滿足Ped>90，Pfr<5,西格瑪為7.5。

圖2 GA操作過程規范圖

圖3 GA西格瑪度量圖

3 討論

GA作為一種新的糖尿病診斷監測新指標，它在多種病理狀態下能更可靠地反映血糖控制的真實水平，這對病情的評估、療效的評價和預后的判斷具有極其重要的臨床意義[1-2]，其聯合其他指標對臨床的診斷意義更大[8-9]。GA的檢測方法有很多，包括陽離子交換層析法、電泳法、親和層析法和免疫學方法等，這些方法雖然較靈敏，但設備要求高、代價高昂、操作煩瑣等。目前認為液態酶法檢測GA具有簡便、特異性高、微量、快速等特點，更適于實驗室推廣應用[10]。

本研究參考CLSI-EP文件和相關文獻，并結合本實驗室的實際情況，評價西門子全自動生化分析儀ADVIA2400酶法檢測GA的分析性能[3-4]。主要對酶法測定GA的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍以及參考區間驗證等分析性能指標進行了評價。結果顯示：該法的精密度良好，GA濃度為0.627g/dl和1.689g/dl時批內精密度和總的精密度，均低于基于生物學變異的精密度(CV<2.6%),也低于廠家提供的近似濃度的精密度(CV<3%)。正確度驗證采用日本旭化成公司提供的另一批號校準品，其校準物質具有可靠的溯源性，相對偏倚為-0.37%，<1/2的總允許誤差，正確度得到驗證。分析測量范圍(AMR)是收集無黃疸、脂血和溶血高值新鮮患者標本進行分析驗證，GA在0～3.5g/dl范圍內存在線性關系，該結果顯示儀器測定的線性范圍在廠家提供的范圍內，涵蓋了醫學決定水平。說明書聲明的稀釋回收率為90%～110%,三份高值樣本當稀釋度達1∶9時，回收率在可接受范圍內，確定最大稀釋度為1∶9,AMR上限乘以最大稀釋度即為臨床可報告范圍(CRR)上限，為36g/dl，結合功能靈敏度為0U/L，故本檢測系統測定GA的臨床可報告范圍為0～36g/dl。當患者標本測定結果高于AMR上限時，必須稀釋后重測，但不能超過最大稀釋倍數，稀釋后測定值必須大于測量低限，否則結果不可靠。對廠家提供的生物參考區間進行驗證，20個結果均在其范圍內，說明該范圍有效，可用于本實驗室。

功效函數圖驗證候選質控規則的性能特征Y 軸為誤差檢出率(Ped)，X 軸為臨界誤差大小，Y 軸的截距則為假失控率(Pfr)。確定 Ped和 Pfr 后，確定質控方案，即質控規則及控制測定個數[5-6]。結合操作過程規范圖和西格瑪度量圖設計符合的室內質控方法，從而提高誤差檢出概率(Ped),降低假失控概率(Pfr)。本研究借助伯樂全球室內質控軟件利用室內質控數據進行分析，以2020年1—11月的GA室內質控(L、H)的累積變異系數(CV)作為項目的不精密度，以全球室內質控室間比對同方法學組的均值為靶值計算偏倚，選擇10%為總允許誤差，得出該項目的操作過程規范圖和西格瑪度量圖。本研究發現，GA每天測定質控品個數2，選擇1-5S單質控規則即可滿足Ped>90，Pfr<5,西格瑪為7.5。

綜上所述，西門子全自動生化分析ADVIA2400酶法檢測GA的主要分析性能基本滿足臨床實驗室要求，室內質控性能佳，可為實驗室提供可靠的結果，值得應用。