高效液相色譜法檢測蔬菜中吡蟲啉殘留試驗分析

摘要：本文以蔬菜作為主要研究對象，對蔬菜中的吡蟲啉殘留情況進行針對性的檢測。從檢測結果中可以看出，高效液相色譜法可以在短時間內快速完成檢測，并有效保證檢測結果的準確性，對蔬菜中的吡蟲啉殘留測定非常適合。

關鍵詞：蔬菜;高效液相色譜法;吡蟲啉;殘留

吡蟲啉是國外經多年研究創造出的煙堿類殺蟲劑，已經在世界范圍內得到廣泛的應用，銷量位居同類型殺蟲劑首位。其在殺蟲過程中會對乙酰膽堿體產生一定的作用，對昆蟲神經系統產生干擾，使昆蟲受到強烈的刺激，堵塞神經通路，最終死亡。吡蟲啉具有高效、毒性小的多重特點，可以在果蔬、谷類等作物中廣泛應用，也可用來防治害蟲。

1 材料與方法

1.1 儀器設備、試劑和樣品

選擇安捷倫1260型高效液相色譜儀（配備紫外檢測器），準備乙腈、二氯甲烷和甲醇等試劑，另準備好吡蟲啉標準品。由同一農貿市場采購西紅柿、菜豆和結球甘藍3種蔬菜作為樣品。

1.2 試驗步驟

1.2.1 提取 使用食品粉碎機粉碎蔬菜樣品，用天平稱量出試驗所需的試樣25克，統一放置于250毫升燒杯中，再加入50毫升乙腈，使用高速均漿機進行120秒的勻漿，并將其過濾，放到具塞量筒中，加入4克氯化鈉，進行50秒的劇烈振蕩后，保持30分鐘的靜止，將乙腈吸取出10毫升，并放到燒杯中，使用氮氣吹干乙腈，配制好甲醇和二氯甲烷混合溶液，使提取物可以被充分溶解。

1.2.2 凈化 取supel cleaLC-NH2小柱，對甲醇和二氯甲烷按一定比例配制，先預淋洗supelcleaLC-NH2小柱，再將上述提取液加入柱中，并做兩次洗脫，收集洗脫液。將洗脫液收集在定容離心管中，再使用氮吹儀吹干此離心管，取2毫升甲醇溶液加入已吹干的定容離心管中，使用濾膜過濾，為液相色譜分析創造良好的條件。

1.2.3 液相色譜條件 色譜柱：Waters symmetry shieldTMC 18（4.6×250毫米，5微米），溫度控制在30℃左右，檢測波長275納米;流動相CH3OH∶H2O∶CH3CN=55∶25 ∶20;流速每分鐘0.8毫升;進樣量10.0微升。

1.2.4 樣品測定 在滿足色譜條件下，待儀器恢復到穩定狀態后，再次加入吡蟲啉標準溶液，進樣時需要保證相鄰兩針的響應值達到相關標準，進樣順序為標準溶液、樣品溶液，計算結果需要將兩次重復所得面積相加，取平均值。

1.2.5 結果計算 以該公式對樣品中吡蟲啉農藥殘留含量進行準確的計算，其中測定樣品含量以m2表示，加入的乙腈量以V1表示;V2代表分取體積;最后定容體積以V3表示;進樣體積和稱樣量分別以V4和?L表示;m1稱樣量。

2 結果與分析

2.1 線性范圍

以甲醇為介質稀釋吡蟲標準品，使其可以成為不同規格的吡蟲啉標準溶液，這一系列溶液的規格分別為0.1、0.2、0.5和1.0毫克/升，使用液相色譜儀依次進樣測定標準溶液。當標準物質濃度處于0.1以上，不超過1.0毫克/升時，吡蟲啉濃度會與儀器響應值面積產生線性相關，并且這種線性相關較好，擁有完整的校正曲線，其相關系數為0.992508。

2.2 最低檢出限

稀釋后的吡蟲啉標準溶液為基線噪音的10倍以上，濃度較高。如果以15克進行取樣，其最低檢出限為0.01毫克/公斤。

2.3 色譜條件的選擇

吡蟲啉具有極好的使用效果，可以充分溶解在水中，也可以保留在C18柱上，呈現的峰行非常良好。從試驗中可以明確，需要將甲醇、乙腈、水，以55∶20∶25的比例混合，并選擇分離試樣中的吡蟲啉。如圖1所示為吡蟲啉的準分子離子的色譜圖。

2.4 試樣前處理方法

2.4.1 選擇提取溶劑和洗脫液 在選擇樣品提取劑時，乙腈、丙酮等都屬于首要的選擇之一，需要由專業人員提取一定質量濃度的樣品，從中能夠發現提取效果最佳的是乙腈，其比丙酮、乙酸乙酯等試劑的回收率明顯高出很多，在提取操作時也非常便利。不同比例二氯甲烷比甲醇，會直接影響藥品洗脫效果。結果表明，當吡蟲啉回收率處于穩定狀態時，甲醇體積分數為1.0%～9%，但甲醇與二氯甲烷相結合時，只會存在較少的雜質峰。當使用10毫升的洗脫劑時，吡蟲啉可以完全回收。

2.4.2 選擇凈化方法 目前，液液萃取法和固相萃取法是分析農藥殘留最為常用的方法之一。固相萃取方法可以將提取、收縮等步驟相整合，使操作步驟更加簡化，并對溶劑用量進行合理控制，使樣品前處理效率得到顯著提升，該方法基于這些優勢，已經引起了相關人員的關注和重視。本文通過比較后發現，處理效果最好的是氨基小柱。氨基小柱在蔬菜樣品前處理時，雜質較少，只會受到較小的干擾，顏色比較淺，回收率與分析測定需求相符合。本試驗在處理時應用升C-NH2柱凈化方式，可以使試樣中的天然色素和糖類大分子得到有效地去除，試驗充分證明可以對吡蟲啉測定的干擾進行快速消除。

2.5 準確度和精密度試驗

將3份西紅柿樣品稱取好，合理利用標準加入法，將0.05、0.10、0.20毫克/公斤的吡蟲啉標準品加入到已知含量的吡蟲啉標準品中，按照上述方法完成提取，并做好凈化，在色譜條件下對吡蟲啉含量進行科學地測定，并針對回收率實驗展開分析。如表1所示，為計算平均回收率和相對標準偏差。

從表1中可以明確看出，當平均率處于95.4%～106.8%時，其處于0.05～0.20毫克/公斤的添加水平范圍內，相對標準偏差可以控制在合理地范圍內，與國家標準農藥殘留需求相符合。

2.6 樣品的檢測

選取10份來自同一農貿市場的西紅柿、菜豆和結球甘藍，運用此方法進行測定，從測定結果中可以準確確定并沒有殘留吡蟲啉。

3 結論

本文在進行蔬菜中吡蟲啉農藥殘留檢測時，對樣品進行了規范化地處理，充分發揮高效液相色譜檢測方法的優勢，順利完成了檢測工作。從檢測結果中可以明確看出，當吡蟲啉添加水平處于0.05、0.10毫克/公斤時，可以準確計算其相對偏差，與農藥殘留檢測要求相符合。該方法在檢測蔬菜樣品時花費的時間較少，操作便利性強，并且檢測結果精準，可以為測定其他產品的吡蟲啉殘留量提供借鑒和參考，大力推廣。

作者簡介：周玲（1992-），女，助理工程師。主要從事農藥殘留檢測工作。