復方黑芝麻丸的制備工藝研究

北京城市學院（100094）盧思潮 白楊 周云灝 劉祺 李紀飛 敖冬梅

復方黑芝麻丸一方出自清代鮑相璈所著的《驗方新編》卷一，烏須黑發方，由九制黑芝麻、紅棗肉和墨旱蓮組成。具有烏須黑發，兼有氣血陰陽并補等保健功能。目前由于生活節奏加快，壓力大，早衰白發的現象有愈發年輕的趨勢。方中黑芝麻具有補肝腎，益精血，潤腸燥。其中含有芝麻素等豐富的木脂素類物質，并含有黑芝麻色素這一抗氧化天然堿溶性色素[1]。黑芝麻采用九蒸九曬法清蒸，又稱“九制”或“九蒸九曝”。首見于南朝梁國醫藥大家陶弘景在其著作《本草經集注》。九蒸九曬后的黑芝麻氨基酸等有效成分發生改變[2]。后世皆沿用陶弘景的方法將黑芝麻進行九蒸九曝后制成大蜜丸，輔料蜂蜜作為賦形劑、甜味劑，易于服用且具有防腐的作用。此后這一劑型便規定下來并流傳至今[3]。黑芝麻丸通常采用塑制法，此法的差異性小，生產效率高，使得生產周期短、損耗小、成品率不斷提高[4]。本實驗目的九蒸九曬工藝中蒸制時間對黑芝麻中芝麻素和黑色素的影響；使用光譜法進行測定，以芝麻素含量為主要評價指標，黑芝麻色素的得率和色價為次要評價指標，采用單因素實驗優化研究；在這一基礎上以蜜丸圓整度、丸重差異為評價指標，采用正交實驗法確定復方黑芝麻丸劑型工藝。得到穩定、優化的復方黑芝麻丸制備工藝。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗藥品與試劑 經鑒定的黑芝麻、大棗、墨旱蓮，三種中藥飲片均來自北京太洋樹康飲片廠，批號分別為2002008、2009017、1912083；芝麻素標準品（上海源葉生物科技有限公司，批號：C07M7H10462）；95%乙醇（現代東方（北京）科技發展有限公司，批號：20200830）；碳酸氫鈉（北京化工廠，批號：20140103）；多花蜂蜜（北京百花蜂業科技發展股份公司，批號：20201021C2C3）。

1.1.2 實驗藥品與試劑 十萬分之一電子天平（日本島津公司，批號：AUW120D）；超聲波清洗器（深圳市深華泰有限公司，批號：PS-70AL）；電熱恒溫水浴鍋（北京長安科學儀器廠，批號：HHS1NI2）可傾式多功能制丸機（溫嶺市林大機械有限公司，批號：DZ-40）；雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司，批號：TU-1900）；臺式電磁爐（佛山市宏基電子科技有限公司，批號：H35FP3A）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海新苗醫療器械制造有限公司，批號：OHG-914385）；高速多功能粉碎機（武義意中廚具有限公司，批號：BJ-800A）；30/80/120目篩（浙江省上虞市紗篩廠，批號：G1-1997）；循環水式多用真空泵（上海滬析實業有限公司，批號：SHBIII）；蒸屜、甑均由北京城市學院生物醫藥學部定制。

1.2 實驗藥品與試劑

1.2.1 九蒸九曬黑芝麻的制備 根據相關研究，多將黑芝麻的蒸制時間設定為6h[5]。為證實其可靠性，采取單因素實驗為預實驗，以芝麻素和黑芝麻色素為評價指標，將九蒸九曬的蒸制時間設為2h、4h、6h、8h、10h五種不同水平，以測定不同的蒸制時間對黑芝麻中有效成分含量的影響。各取生品黑芝麻80g，放在紗布上攤開，平鋪厚度均為

0.5cm，分別放入蒸屜于水沸騰上氣后轉小火蒸2h、4h、6h、8h、10h后取出；于陽光下攤開曬到黑芝麻干燥，不粘連；如此共重復9次，即得九蒸九曬黑芝麻。通過紫外可見光分光光度計測出芝麻素含量最高的樣品，再采取相同單因素實驗進行細化，以30min為一個因素，確定最優蒸制時間。分別制出每份式樣做三組平行實驗，根據結果和誤差來判斷炮制工藝的合理性，確定最佳炮制方案的準確性。

1.2.2 九制黑芝麻炮制品中芝麻素的提取與含量測定

1.2.2.1 芝麻素的提取 供試品溶液的配制：取九制黑芝麻粉碎，稱取8g粉末移入錐形瓶中，加入95%的乙醇溶液，其中黑芝麻與乙醇溶液的料液比為1∶15，放入功率調整為330W的超聲波提取器中，將提取的時間設定為33min，提取芝麻素的溫度設定為60℃，提取完畢后取出過濾[6]。取1mL的的黑芝麻提取液于25mL容量瓶中,加95%乙醇定容至刻度，搖勻備用。

對照品溶液的配制：使用十萬分之一電子天平精密稱取10mg純度為98%的芝麻素標準品，與95%乙醇溶液一同溶解定容于25mL容量瓶中搖勻，配制成母液濃度為380μg/mL。

1.2.2.2 方法學考察 將芝麻素的標準品溶液和供試品溶液分別進行全波長紫外掃描，確定標準品和供試品的最大吸收波長。木脂素類化合物在200～400nm處的紫外范圍內具有明顯的吸收特征，利用其吸收的強弱來對黑芝麻炮制品中的芝麻素進行定量檢測[7]。

1.2.2.3 線性關系考察 使用移液管精密量取標準品溶液，分別在五個10mL容量瓶中加95%乙醇定容至刻度，搖勻。加入的標準品溶液的體積和濃度分別為0.1mL（3.8μg/mL）、0.2mL（7.6μg/mL）、

0.4mL（15.2μg/mL）、0.6ml（22.8μg/mL）、0.8ml（30.4μg/mL），空白對照品為95%乙醇溶液。放入紫外可見光分光光度計中檢測最大吸光度，將測出的結果換算出濃度后以芝麻素的質量濃度（μg/mL）為x軸橫坐標，以吸光度A為y軸縱坐標進行標準曲線的繪制和回歸方程式的計算。

1.2.2.4 樣品測定結果 取各個批次的樣品，按“1.2.2.1”項下方法制備待測液。放入紫外可見光分光度計中測定芝麻素含量。其余方法學考察均采用測得含量最高的樣品進行測定。

1.2.2.5 精密度考察 按“1.2.2.1”項下方法制備待測液，取其中三批6h樣品提取液，進行五次吸光度的檢測，計算其平均得率及RSD值，以測得樣品精密度。

1.2.2.6 穩定性考察 按“1.2.2.1”項下方法制備待測液，取其中三批6h樣品提取液，為證明提取液在常溫下具有很好的穩定性，分別于常溫下放置0、10、20、30、40min后測定溶液的吸光度并計算其平均含量變化以及RSD值。

1.2.2.7 重復性考察 為證明本試驗的重現性，分別稱取五份6h黑芝麻炮制品，然后“1.2.2.1”項下方法進行提取處理后，對吸光度進行檢測，并計算樣品平均含量和RSD值。

1.2.2.8 加樣回收率實驗 精密稱取已知芝麻素含量的乙醇提取液四份，分成兩組，然后測定吸光度，分別測出其芝麻素含量。然后加入已知含量的標準品溶液于容量瓶中，測定其吸光度，并計算加樣回收率及RSD值。

1.2.3 九制黑芝麻炮制品中黑色素的得率及色價的測定

1.2.3.1 黑芝麻色素的提取工藝 采用超聲波提取法提取黑芝麻色素[8]。準確稱取10g黑芝麻，水洗干凈后，濾干備用，配制8g/L碳酸氫鈉溶液作為萃取溶劑，pH值為8.8。使用料液比1∶5的溶液將芝麻浸沒后，在250kw功率的超聲波提取儀中，44℃超聲溫度提取45min，提取結束后將溶液進行抽濾，預先稱取蒸發皿的重量，將裝有黑芝麻色素的蒸發皿放入烘箱烘至完全干燥，恒溫70℃，通風。取出蒸發皿中殘留的干燥物即得黑芝麻黑色素，黑芝麻色素的得率計算公式為：D/%=m/W×100。

式中：D為得率，%；m為黑芝麻色素質量，g；W為黑芝麻炮制品質量，g。

1.2.3.2 黑芝麻色素色價的計算 精確稱取黑芝麻色素0.05g，放入100ml容量瓶中用pH值為8.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液定容至刻度線后搖勻。之后使用移液管精密量取溶液1mL，放入10ml容量瓶中，用緩沖溶液液定容至刻度線后搖勻。使用紫外分光光度計對其進行全波長掃描，檢測到其最大吸收峰約在波長。測出黑芝麻色素經過稀釋后的溶液的吸光值，計算色價。樣品色價的計算公式為：E=A×n/W。

式中：E為色價；A為吸光值；n為稀釋倍數；W為樣品質量，g。

1.2.4 復方黑芝麻丸的制劑原料加工

1.2.4.1 藥粉的制備 黑芝麻、墨旱蓮和棗肉的配伍均為6∶1∶3。將炮制后的黑芝麻搗碎成稠糊狀。預先將墨旱蓮用打粉機打碎成最細粉，過120目篩。大棗中棗皮與棗肉的抗氧化成分含量較高，而棗核部分含量較低[9]。所以在使用過程中，應去除棗核，只留棗肉部分并剪碎。粉碎大棗和墨旱蓮時，將50g藥材放入高速粉碎機中用串油法粉碎芝麻10s，如此反復三次后開蓋過篩，烘干成棗干后采用共研法與墨旱蓮粉混合粉碎，過80目篩。由于黑芝麻中含有大量油脂，故采用串油法將棗墨旱蓮藥粉與黑芝麻混合粉碎成細粉后混勻，過30目篩，制得藥粉。

1.2.4.2 煉蜜的制備 通過大蜜丸的制備要求顯示，傳統的中藥蜜丸應選用百花蜜，加熱制成煉蜜后用于制劑。煉蜜的程度分為嫩蜜、中蜜和老蜜，不同程度的蜜的使用與藥材的質地有關。方中九制黑芝麻含油量較高，大棗含糖量較高，二者都具有一定粘性，因此應使用嫩蜜進行黏合。故本實驗中選取適量百花蜜生蜜加熱煮沸，直到溫度達到105℃～115℃，過濾去除浮沫和雜質制成嫩蜜。其顏色無太大變化，兩指沾試不拉絲，稍有粘性。

1.2.5 復方黑芝麻丸的制劑工藝優化

1.2.5.1 丸劑制備因素的確定 經相關文獻的參考以及預實驗[10]，最終得出對大蜜丸的外觀質量產生影響的主要三因素為：和坨中藥粉與煉蜜的不同配比、和藥時煉蜜的溫度以及餳藥的時間，從這三個因素中再設計出三個不同水平進行細化：將和坨時煉蜜的溫度分別設定在80℃、75℃和70℃；和坨中藥粉與煉蜜的不同配比分別設置為1/0.4、1/0.45和1/0.5進行混合，藥坨分別餳藥0.5h、1h、2h后糅合至軟化不開裂后放入甑中隔水加熱30min消毒，投入清潔后的制藥機中制成同等大小的大蜜丸。

1.2.5.2 復方黑芝麻丸的劑型工藝研究 在研究復方黑芝麻丸蜜丸劑型，以丸劑圓整度、重量差異為評價指標。由10個人組成評價組，依據上述指標分別進行打分，除去一個最高分和最低分，其余算出平均分。重量差異依照中國藥典相關規定執行。每份式樣做三組平行實驗，根據結果和誤差判斷制劑工藝的合理性，確定最佳制劑方案的準確性。

1.2.5.3 蜜丸圓整度檢測 丸劑外觀應圓整，大小、色澤應均勻，無粘連現象。采用塑制法制成的大蜜丸的圓整度為指標進行10人打分制。滿分為10分，評判標準從高到低為10分（十分圓整）、7.5分（一般圓整）、5分（較圓整）、2.5分（較不圓整）和0分（不圓整）五種等級并可在相應范圍內進行靈活打分。

1.2.5.4 蜜丸重量差異檢測 采用《中國藥典》所規定的丸劑重量差異進行實驗。實驗中大蜜丸質量均超過1.5g，故以1丸為1份，共取1份供試丸劑，使用電子天平稱量其質量，每份質量比較平均重量，大于或小于藥典所規定的重量差異限度的丸數不得超過2份，超出平均重量差異限度的1倍的不能有1份。

1.2.5.5 復方黑芝麻丸的正交實驗 按“1.2.5.1”項下方法制備制得復方黑芝麻丸供試品，以圓整度、重量差異為指標，按“1.2.5.3”項下方法對成品圓整度進行打分，并按“1.2.5.4”項下方法，測出9批大蜜丸的重量差異。按設定好的因素和水平進行正交實驗。根據結果和誤差來判斷制劑工藝的合理性，確定最佳制劑方案的準確性。

2 結果與討論

2.1 九制黑芝麻炮制品中芝麻素和黑色素的提取結果

2.1.1 九制黑芝麻炮制品中芝麻素的含量測定及方法學考察通過對芝麻素的標準品和供試品進行全波長掃描（見附圖1、附圖2），二者均出現非常明顯的吸收峰，分別在235nm和287nm處，其中在287nm處較為明顯，且黑芝麻色素等成分的雜峰干擾小，因此后續方法學考察定位287nm處，對相關供試品溶液進行定量測定。芝麻素標準品五種不同濃度的標準品最大吸光度為0.113、0.206、0.378、0.571、0.758，將測出的結果換算出濃度后繪制出濃度標準曲線，回歸方程式為y=0.0246x+0.0108，回歸系數平方為0.9993（見附圖3）。

附圖1 芝麻素標準品的紫外掃描曲線

附圖2 芝麻素供試品的紫外掃描曲線

附圖3 芝麻素標準曲線

2.1.1.1 不同批次樣品中黑芝麻素的含量 經過預實驗數據（見附表1）得知，蒸制時間6h的黑芝麻炮制樣品芝麻素含量最高，8h的次之，10h的芝麻素含量較低。故其余方法學考察均采用三批6h樣品進行測定。

附表1 九制蒸2～10小時供試品的吸光度及含量

根據附表2的數據結果顯示，蒸制5.5h的黑芝麻炮制品中芝麻素的樣品含量較高，6h次之，7h得率最少。

附表2 九制蒸5～7小時供試品的吸光度及含量

2.1.1.2 精密度試驗 按“1.2.2.1”項下方法制備待測液，取其中三批6h樣品提取液，進行五次吸光度的檢測（見附表3），并計算其平均樣品含量為13.44μg/mL，RSD值為0.19%，由此可知提取液經測定具有極好的精密度。

附表3 各批次6h供試品的精密度

2.1.1.3 穩定性試驗 按“1.2.2.1”項下方法制備待測液，取其中三批6h樣品提取液，分別于常溫下放置0min、10min、20min、30min、40min后測定其吸光度（見附表4），計算其平均得率為13.44，RSD值為0.16%，芝麻素提取液在常溫下具有很好的穩定性。

附表4 各批次6h供試品的穩定性

2.1.1.4 重現性實驗 為證明本試驗的重現性，分別稱取五份6h黑芝麻炮制品，然后以“1.2.2.1”項下方法進行提取處理后，對吸光度進行檢測，并計算各供試品的含量后，測出RSD值為3.75%（見附表5），實驗具有較好的重現性。

附表5 各批次6h供試品的重現性

2.1.1.5 加樣回收率實驗 經測定（見附表6），兩組芝麻炮制樣品中芝麻素的加樣平均回收率為97.81%，RSD值為2.71%。

附表6 兩組6h供試品的加樣回收率

2.1.2 九制黑芝麻中黑芝麻色素的得率及色價

2.1.2.1 黑芝麻色素的提取和得率的計算根據附表7所示，各黑芝麻炮制品的得率中得知，6h為最高，5.5h次之，7h得率最少。

附表7 黑芝麻色素得率

2.1.2.2 黑芝麻黑色素最大吸收波長的確定和色價的計算 通過對黑芝麻色素供試品的全波長掃描，檢測到其最大吸收峰約在波長在207nm處（見附圖4），黑芝麻炮制品的色價隨著炮制時間的增多而減少（見附表8）。樣品5h黑芝麻色素色價最高，樣品7h黑芝麻色素色價最低。

附表8 不同批次黑芝麻色素的色價

附圖4 黑芝麻色素的紫外掃描曲線

2.1.3 九制黑芝麻最佳炮制工藝的選擇 結合上述實驗，以芝麻素的含量為主要評價指標，以黑芝麻色素的得率和色價為次要指標。其中樣品5.5h的芝麻素含量最高，黑芝麻色素的得率和色價較高；樣品5h黑芝麻色素色價最高，得率較低，芝麻素含量較高；樣品6h黑芝麻色素得率最高，色價較低，芝麻素含量較高。綜合考慮選取樣品5.5h為最優的炮制方案。

2.2 復方黑芝麻的圓整度與重量差異結果根據正交實驗表所列的數據進行分析（見附表9），圓整度極差R值大小顯示，各因素作用主次依次：A>B>C，最佳制備工藝為A2B3C3（藥粉：煉蜜配比為1/0.45、和坨時煉蜜溫度為80℃、餳藥時間2h）；在重量差異指標當中，各因素作用主次依次：C>B>A，最佳制備工藝為A3B3C3（藥粉：煉蜜配比為1/0.5、和坨時煉蜜溫度為80℃、餳藥時間2h）。由于九組樣品均沒有超過藥典規定的重量差異限度，結合藥效和經濟成本，故選取A2B3C3（藥粉：煉蜜配比為1/0.45、和坨時煉蜜溫度為80℃、餳藥時間2h）最優的制劑方案。

附表9 正交實驗結果

2.3 討論本實驗采用古法九蒸九曬黑芝麻后制成大蜜丸劑，運用紫外可見光分光光度計，此方法較為成熟，能夠較為精準的測出芝麻素、黑芝麻色素等重要指標。對于這一炮制方法是否對其他有效成分作用發生改變還有待進一步研究。本次實驗中黑芝麻種類來源較單一，市售的黑芝麻種類，來源極為廣泛，對于是否能夠應用于其他市售黑芝麻有待證實。檢驗丸劑在制備過程中，各因素相對較好，能夠將制劑的圓整度、重量差異等指標控制在合格范圍內。優化黑芝麻丸的制備工藝，為這一制劑提供規范的制備方法和完善的質量檢測標準。