微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應用價值

朱 莉，田 靜，武慧慧，楊 澤，晉紅梅

（山東第一醫科大學第二附屬醫院輸血科，山東泰安 271001）

新生兒溶血病指的是母親和嬰兒的血型無法吻合，導致新生兒出現免疫性溶血疾病。ABO新生兒溶血病患兒的主要臨床表現為黃疸、貧血等，通常在出生后24～48 h內出現疾病癥狀，且病情發展迅速，嚴重者可能對新生兒的智力與身心發育產生不良影響[1]。目前臨床主要對ABO新生兒溶血病患兒實施輸血治療，但是常規同型輸血治療極易加重溶血反應，甚至可能對患兒的生命安全構成威脅[2]。微柱凝膠技術為目前臨床中交叉配血檢驗的常用技術之一，亦為實驗室常用的紅細胞血型血清學檢驗技術，具有易判讀、結果準確清晰等優勢，其可以排除傳統檢驗方法當中人為因素所致的干擾[3]。因此本研究重點探討了微柱凝膠技術在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的應用價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取山東第一醫科大學第二附屬醫院2019年9月至2020年12月收治的124例ABO新生兒溶血病患兒，開展前瞻性研究。其中男患兒65例，女患兒 59例；日齡 1～25 d，平均（15.06±0.49）d；體質量 2.1～4.5 kg，平均（3.49±0.12）kg。診斷標準：參照《臨床診療指南：小兒內科分冊》[4]中的關于ABO新生兒溶血病的診斷標準。納入標準：符合上述診斷標準者；母親血型為O型者；母親與患兒RhD血型均呈陽性；抗人球蛋白實驗、游離血清實驗及抗體放散實驗資料完整者。排除標準：合并先天性疾病或缺陷者；有家族遺傳病史者。患兒法定監護人簽署知情同意書，且本研究經山東第一醫科大學第二附屬醫院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 標本準備 取新生兒全血標本進行離心處理，離心條件（3 500 r/min，10 min），離心結束分離血清，以備用，使用生理鹽水對新生兒全血標本進行洗滌，以3次為宜，同時選取少許紅細胞，采用生理鹽水制作3%的細胞懸液，將其作為樣本進行檢測。

1.2.2 檢驗方法 微柱凝膠技術檢驗：①取抗人球蛋白卡1張，于孔內滴入濃度為0.8%的紅細胞懸液（50 μL），隨后將其置入離心機中進行離心處理，分析離心結果。②標記抗人球蛋白卡，分別于A孔、B孔及O孔中加入濃度為0.8%的紅細胞懸液（50 μL），隨后取25 μL新生兒血清加入，于孵育器中放置抗人球蛋白卡，孵育15 min后以3 000 r/min的轉速離心10 min操作，對離心結果展開觀察。試管法檢驗：①取1滴濃度為2%～5%的紅細胞懸液滴入至標記好的試管當中，隨后滴入1滴特異性抗人球蛋白血清，充分混勻以后，進行離心處理并觀察離心結果。②取3支試管分別標記為A管、B管和O管，分別向各試管當中滴入2滴新生兒血清及1滴濃度為3%～5%的紅細胞懸液，隨后將試管放置于溫度為37 ℃的水浴箱中1 h；若試劑凝集，則代表液體當中有抗體存在，若肉眼觀察未發現凝集反應，則以生理鹽水洗滌，并且取1滴廣普抗免疫球蛋白G（IgG）抗人球蛋白血清滴入試管，離心處理以后觀察離心結果，凝集即為抗體陽性。釋放實驗方法：取大試管備用，將1 mL新生兒壓積紅細胞和等量生理鹽水加入試管中，將試管放置于溫度為56 ℃的水浴箱中，不斷振搖試管（7 min），隨后將試管取出，離心處理5 min，取上清液備用。

1.2.3 血型鑒定方法 試管法血型鑒定方法：取血液標本開展離心操作，對反定結果進行觀察，以陰性對照管將冷凝集排除。微柱凝膠技術血型鑒定方法：取血液標本實施離心處理，取凝膠微管分別標記為A管、B管、C管、E管、F管，取0.5%紅細胞懸液滴入至A管、B管、C管及D管當中，取已知A型、B型紅細胞懸液（0.5%）和血清分別滴入至E管和F管中，隨后實施離心處理并分析離心結果。

1.2.4 交叉配血 凝聚胺法交叉配血：對血液樣本進行離心操作，取凝膠微管2支并標記好主、次側，配置好紅細胞懸液，于主側加入輸血標本2滴和供血標本紅細胞懸液1滴，次側加入供血標本2滴和輸血標本紅細胞懸液1滴，隨后分別加入低離子介質溶液（0.6 mL），充分混勻，靜置1 min后取2滴凝聚胺溶液分別加入，靜置15 s以后實施離心處理，于管底取0.1 mL凝集液體，取2滴重懸液滴入，判斷配血結果。微柱凝膠技術交叉配血法：對血液樣本實施離心操作，取標記好主側和次側的凝膠微管兩支備用，制作紅細胞懸液，于主側加入供血者標本50 μL和輸血者標本紅細胞懸液50 μL，次側加入供血者標本紅細胞懸液50 μL和輸血者標本紅細胞懸液50 μL，將微管放入溫度為37 ℃的環境中孵育，15 min后實施離心處理。

1.3 觀察指標 ①比較兩種檢驗技術的校驗指標檢驗陽性率（直接抗人球蛋白陽性率、血清游離抗體陽性率和抗體放散陽性率）。②比較兩種檢驗技術的血型鑒定結果（正反定型符合率和正反定型不符率）。③記錄并分析凝聚胺法和微柱凝膠技術的交叉配血（交叉配血成功率和交叉配血不合率）情況。

1.4 統計學分析 應用SPSS 22.0統計軟件分析處理文中數據，計數資料用[例(%)]表示，行χ2檢驗。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 校驗指標檢驗陽性率 微柱凝膠技術檢驗的直接抗人球蛋白、血清游離抗體及抗體放散陽性率均顯著高于試管法檢驗，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表1。

表1 兩種不同檢驗技術校驗指標檢驗陽性率比較[例(%)]

2.2 血型鑒定結果 微柱凝膠技術檢驗的正反定型符合率、不符合率與試管法檢驗比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表 2。

表2 兩種不同檢驗技術血型鑒定結果比較[例(%)]

2.3 交叉配血情況 微柱凝膠技術的交叉配血成功率顯著高于凝聚胺法，交叉配血不合率顯著低于凝聚胺法，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表3。

表3 兩種不同檢驗技術交叉配血情況比較[例(%)]

3 討論

新生兒溶血病指的是母親和新生兒的血型不合，母體中產生同胎兒血型抗原不匹配的血型抗體，且經過胎盤進入至胎兒的機體當中，導致同族免疫性溶血現象發生。ABO新生兒溶血病是臨床中較為常見的一種類型，若未獲得有效控制，隨著病情進一步發展，可誘發膽紅素腦病，對患兒健康甚至生命安全均存在嚴重威脅。為此盡早診治是改善患兒病情與預后的關鍵。目前臨床上主要采用輸血治療ABO新生兒溶血病患兒，為保證輸血安全性，在輸血之前必須加強臨床檢驗工作[5]。但是目前臨床檢驗方法多，且常有檢驗不合理的情況存在，降低校驗準確率的同時，也增加了誤診的風險，不利于疾病的早期診斷與治療。

微柱凝膠技術是血型血清學技術，具有特異性和靈敏度高的優勢，該項檢驗技術是輸血前血清學篩查中的常用技術，通過實施微管柱灌注法，將紅細胞經過微柱當中的凝膠顆粒分子過濾，使每個紅細胞過濾時將發生凝集的紅細胞保留，以供醫務人員分析及確定凝集反應結果。微柱凝膠技術的結果更為直觀，且無需開展顯微鏡觀察[6-7]。本次研究結果顯示，微柱凝膠技術的直接抗人球蛋白陽性率、血清游離抗體陽性率及抗體放散陽性率均顯著高于試管法檢驗，其正反定型不符率較低，但同試管法檢驗比較，差異無統計學意義，表明微柱凝膠技術應用于ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中可以幫助醫務人員明確患兒的病情，且可準確鑒定供血者和輸血者的血型，為疾病治療提供有力依據。患兒自身狀況存在的差異使患兒體內紅細胞血型抗原表達強度有一定的差異，同時患兒體內被動輸入的溶血性抗體數量與性質也存在差異，因此，對患兒進行交叉配血檢測時，檢測結果的準確度會受到配血檢測方法靈敏度的影響[8]。本研究結果顯示，微柱凝膠技術的交叉配血成功率顯著高于凝聚胺法，其原因在于微柱凝膠技術的結果更為直觀，減小了人為影響因素產生的干擾，具有較高的特異性和準確度。

綜上，在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中應用微柱凝膠技術的準確率較高，可有效降低漏檢率與誤檢率，值得進一步推廣應用。