晶芯呼吸道病原菌核酸檢測在臨床中的應用價值探究

陶文學，陳來秀，李正國，席彩霞，曾多，劉雪梅，李博，魏婷

（甘肅省武威腫瘤醫院呼吸內科，甘肅 武威 733000）

呼吸道病原菌主要包括金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、肺炎克累伯菌等，目前，其導致的感染已成為全世界主要致死性因素之一。世界衛生組織統計數據顯示，呼吸道病原菌感染（5.9%）在世界十大病死原因中位列第三，僅次于冠心病與腦卒中，增加家庭和社會的負擔[1-3]。呼吸道病原菌感染表現癥狀基本相似，單純依據癥狀難于有效準確診斷。目前，臨床鑒定病原菌的方法主要依靠細菌培養法，但獲得結果需3～5 d，易錯過控制感染的最佳時期[4-5]。晶芯呼吸道病原菌酸檢測可一步完成對靶基因的擴增和檢測。基于此，本研究選取2019年4月至2020年1月本院收治的84例疑似下呼吸道感染患者作為研究對象，探討晶芯呼吸道病原菌核酸檢測在臨床中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年4月至2020年1月本院收治的84 例疑似下呼吸道感染的患者。納入標準：研究經本院倫理委員會批準；患者均對本研知情并自愿簽署知情同意書。排除標準：咳出、吐出的痰液不合格者；依從性差者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 巧克力瓊漿平板、血瓊脂平板、革蘭染液（青島海博生物科技有限公司）、晶芯呼吸道病原菌核酸檢測試劑盒（上海紀寧實業有限公司）、全自動細菌鑒定儀（蘇州安創儀器有限公司，型號：Phoenix100）、恒溫擴增微流控芯片核酸分析儀（成都博奧晶芯生物科技有限公司，型號：Dhelix 1610）。

1.2.2 檢測方式 使用魚躍吸痰器（北京眾思康科技發展有限公司），由專業護士指導患者配合吸取呼吸道深部痰液，采集后送至檢驗科微生物室。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測：利用熒光染料摻入法進行實時熒光檢測，在具有鏈置換功能的聚合酶（在65 ℃恒溫條件下可發生反應）作用下，擴增靶核酸會呈S形曲線擴增，進而對靶基因進行檢測與擴增。常規痰培養檢：將痰液標本接種于巧克力瓊漿平板或血瓊脂平板，于37 ℃環境下孵育24 h，選出優勝菌群，革蘭染色鏡下形態鑒定，上機鑒定。

1.3 觀察指標 比較兩種檢測方式的樣本檢出陽性率，并分析兩種檢測方式對8 種傳統可培養細菌的檢出一致性。根據陽性判斷值結合Tp值判讀結果，Tp值為晶芯呼吸道病原菌核酸檢測完成后軟件將輸出S 形擴增曲線快速增長的首個拐點時刻減去原點時刻。

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析，計量資料以“”表示，比較采用t檢驗，計數資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法結果比較 兩種檢查方法陽性率比較差異無統計學意義，以痰培養鑒定為金標準，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測的靈敏度為96.01%（65/67），特異性為76.47%（13/17），見表1。

表1 兩種檢測方法結果比較Table 1 Comparison of results of the two detection methods

2.2 兩種檢測方法檢測結果一致性分析 8 種傳統可培養細菌在84例樣本檢測中有64（76.19%）例2種檢測方法結果一致，分別為肺球鏈球菌20例（23.81%），金黃色葡萄球菌19例（22.62%），大腸埃希菌8 例（9.52%），肺炎克雷伯菌7 例（8.33%），銅綠假單胞菌5 例（5.95%），鮑曼不動桿菌2 例（2.38%），嗜麥芽窄食單胞菌0 例（0.00%），流感嗜血桿菌3例（3.57%）。

3 討論

據統計，全球33%的病死是由感染性疾病引發，其中呼吸道感染居各種感染性疾病首位，是威脅人類生命安全的重要疾病之一[6-7]。呼吸道感染的主要病原體為細菌，其種類繁多，若僅采取經驗性抗菌治療，極易造成耐藥菌群增加，而需及時確定感染細菌種類，并予針對性治療，因此，確定病原體對呼吸道感染臨床治療具有重要意義[8--13]。

常規痰培養檢查是臨床確診病原體常見操作，但傳統培養檢測周期較長，操作繁瑣，在培養中可能被污染，導致結果準確性較低[14]。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測技術是一種新的痰標本病原體種類檢測技術，操作簡單、檢測成本低、敏感度高，在63 ℃恒溫裝置中，將試劑與待測標本DNA 共同放置1 h左右便可判斷擴增情況，從痰液標本處理到報告結果全過程僅需2 h，顯著縮短了檢驗周期[15-16]。本研究結果表明，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測陽性率略高于痰培養鑒定，但差異無統計學意義，表明兩者檢測結果差異不顯著，但傳統的痰培養則需將痰標本在保溫箱中孵育＞24 h，因此，在相同檢出率的前提下應選擇更簡單、快捷的晶芯呼吸道病原菌核酸檢測[17]。同時，以痰培養鑒定為金標準，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測的靈敏度為96.01%，特異性為76.47%，表明晶芯呼吸道病原菌核酸檢測具有較高的靈敏度與特異性。本研究結果顯示，兩種檢測方法一致性較高，其中肺球鏈球菌與金黃色葡萄球菌的陽性率最高，均＞22%，Yousaf S等[18]研究顯示，恒溫擴增芯片法檢出病原體56株，培養法檢出僅11例，即恒溫擴增芯片法的靈敏度顯著更高，可有效反映呼吸道感染的真實情況，可能原因是痰培養技術中痰標本的保存與擴增過程受各種條件的限制，從而導致未檢測到真正的病原體[19-20]。

綜上所述，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測方法較常規痰培養檢測法，操作簡單，可快速一次性檢出全部下呼吸道病源菌，且具有較高的特異性、敏感度與檢出率。