不同劑量消痔靈注射于大鼠肌肉組織中的實驗研究*

柯敏輝，吳華嵩，程佑民，許振國

（1.福建中醫藥大學附屬第二人民醫院，福建 福州 350003；2.福建省中醫藥科學院，福建 福州 350003）

臨床常用消痔靈注射液注射治療肛門直腸脫垂性疾病（如內痔［1］、直腸脫垂［2］等），但存在發生術后大出血、直腸陰道瘺等并發癥風險［3］。究其原因，或與消痔靈注射過淺發生直腸黏膜糜爛有關，或與消痔靈注射入肌層引起肌肉組織壞死有關，或與消痔靈注射液同一點位注射劑量大有關。硬化劑注射入肌肉組織中，劑量的大小與組織病變程度的相關性，未見文獻報道。為研究該問題，本文設計運用不同劑量消痔靈注射液注射入大鼠后肢肌肉組織，觀察注射后反應，研究結果將為規范硬化劑注射療法方案的制定提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

選擇健康清潔級SD 大鼠（8 w），體質量230～250 g，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司，實驗動物生產許可證號［SCXK（滬2017-0005）］。室溫（20～22℃），自由飲食。選擇SD大鼠96 只，雌雄各半，根據隨機數字表隨機均分為4 組，分別為正常組、1 mL 注射組、2.5 mL 注射組與5 mL 注射組，每組大鼠24 只。

1.2 主要試劑

消痔靈注射液（吉林省集安益盛藥業股份有限公司生產，批準文號：國藥準字27Z0625）。

1.3 方法

1.3.1 消痔靈注射液注射干預 將大鼠固定，碘伏消毒大鼠左后肢內收肌表面及其周圍組織，抽取相應量的消痔靈注射液原液于左后肢內收肌處進針注射，注射前需回抽，避免將藥液注入血液。1 mL 注射組、2.5 mL 注射組與5 mL 注射組，注射消痔靈的量分別為1 mL、2.5 mL 與5 mL。正常組大鼠正常飼養，不予注射。

1.3.2 觀察內容 四組大鼠，均分別于注射后第3、7、14 與21 天，隨機選取6 只，進行如下觀測：①觀察大鼠的神志、呼吸、飲食、體重與活動情況；觀察大鼠的左后肢情況。②觀察后用戊巴比妥鈉按50 mg/kg 麻醉后，解剖取左后肢內收肌組織，大小約0.2 cm×0.2 cm，固定于4% 多聚甲醛緩沖液中。常規石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅（HE）染色行病理學檢查。

2 結果

2.1 大體觀察（后肢與足背腫脹程度）

2.1.1 實驗前 96 只大鼠均反應敏捷，呼吸、飲食、體重、活動正常，雙后肢均未見腫脹（圖1A）。兩組具有可比性。

2.1.2 消痔靈注射3 d 組 5 mL 組大鼠左后肢內收肌處出現輕度腫脹，左足背輕度腫脹（圖1B），左后肢活動不受限，注射處皮膚未見破潰；1 mL組、2.5 mL 組與正常組大鼠同實驗前，各組大鼠均未見死亡。

2.1.3 消痔靈注射7 d 組 5 mL 組大鼠左后肢內收肌處出現中輕度腫脹，左足背中輕度腫脹，左后肢活動稍受限，注射處皮膚未見破潰；2.5 mL組大鼠左后肢內收肌處出現輕度腫脹，左足背輕度腫脹，左后肢活動不受限，注射處皮膚未見破潰；1 mL 組與正常組同實驗前，各組大鼠均未見死亡。

2.1.4 消痔靈注射14 d 組 5 mL 組大鼠左后肢內收肌處出現中度腫脹，左足背中度腫脹（圖1C），左后肢活動受限，注射處皮膚未見破潰；2.5 mL組大鼠左后肢內收肌處出現輕度腫脹，左足背輕度腫脹，左后肢活動不受限，注射處皮膚未見破潰；1 mL 組與正常組同實驗前，各組大鼠均未見死亡。

2.1.5 消痔靈注射21 d 組 5 mL 組大鼠左后肢內收肌處出現重度腫脹，左足背重度腫脹（圖1D），左后肢活動受限，注射處皮膚未見破潰；2.5 mL組大鼠左后肢內收肌處出現中度腫脹，左足背中度腫脹，左后肢活動不受限，注射處皮膚未見破潰；1 mL 組與正常組同實驗前，各組大鼠均未見死亡。

圖1 消痔靈注射后大鼠左后肢與足背腫脹程度

2.2 HE 染色觀察大體印象

2.2.1 消痔靈注射3 d 組 正常組未見異常（圖2A）；1 mL 組肌組織基本正常（圖2B）；2.5 mL組基本正常（圖2C）；5 mL 組見肌組織腫脹，周邊見炎癥細胞（圖2D）。

圖2 消痔靈注射3 d 后大鼠肌組織病理改變

2.2.2 消痔靈注射7 d 組 1 mL 組肌組織基本正常（圖3A）；2.5 mL 組見肌間隙增寬，周圍筋膜見炎癥浸潤（圖3B）；5 mL 組見肌組織間隙、周圍筋膜見大量炎癥細胞（圖3C）。

圖3 消痔靈注射7 d 后大鼠肌組織病理改變

2.2.3 消痔靈注射14 d 組 1 mL 組肌組織基本正常（圖4A）；2.5 mL 組肌間隙增寬，周圍筋膜見炎癥浸潤較前增多（圖4B）；5 mL 組見部分肌組織變性，周邊炎癥明顯（圖4C）。

圖4 消痔靈注射14 d 后大鼠肌組織病理改變

2.2.4 消痔靈注射21 d 組 1 mL 組筋膜見炎癥組織浸潤（圖5A）；2.5 mL 組肌組織間見炎細胞浸潤（圖5B）；5 mL 組見肌組織固縮，肌間隙增寬，周邊組織壞死（圖5C）。

圖5 消痔靈注射21 d 后大鼠肌組織病理改變

3 討論

消痔靈注射液屬于硬化劑范疇，主要成分為明礬、鞣酸、三氯叔丁醇與低分子右旋糖酐注射液等。臨床主要用于內痔、直腸脫垂等肛門直腸疾病的治療［4］，其作用機理是消痔靈注射液作用于局部產生無菌性炎癥、纖維組織增生、血管內栓塞粘連等，使組織硬化、萎縮、粘連達到治療目的［5］。彭林［6］對23 例痔瘡患者在結腸鏡下實施消痔靈注射術，結果有20 例患者治愈，其余3 例患者癥狀也明顯好轉，其臨床有效率為100%。李海亮［7］等使用消痔靈治療直腸脫垂發現，不僅具有手術操作簡便，疼痛輕微甚至全程無痛，無需麻醉或僅需局部麻醉，并且臨床有效率較高，其研究結果顯示30 例患者中25 例痊愈，5 例患者癥狀減輕。同時，根據藥物的特性，消痔靈注射液還應用于臨床其它疾病和基礎研究中［8-9］。如黃艷勇［10］等采用消痔靈注射液治療膝關節頑固性滑膜炎，其原理類同治療痔病的原理。趙軍超［11］等運用消痔靈注射液動物腹腔內注射能導致腹腔內臟器粘連，隨著用藥劑量的增加，其粘連程度愈重，證明消痔靈注射液動物腹腔內注射能夠制作動物腹腔內臟器粘連模型。王秀梅［12］等通過消痔靈所致大鼠慢性前列腺炎模型。

通過本實驗筆者發現：消痔靈注射液小劑量注射于肌肉，對組織的影響不大；大劑量則容易引起肌組織壞死，炎癥逐漸沿周邊筋膜擴散。通過分析病理結果，筆者認為消痔靈注射到肌肉組織后，病變的過程是增生-變性-壞死-吸收，不同時間段壞死程度不同，也與個體對藥物吸收的差異等有一定關系。前期筆者曾觀察運用10 mL 消痔靈液注射于兔左側第3～5 頸椎橫突側面的組織中，制作兔椎動脈型頸椎病動物模型［13］，8 周后處死發現注射部位肌肉組織發生變性壞死，炎癥沿著筋膜浸潤至前肢筋膜附近浸潤。將注射部位的組織送病理檢查，鏡下見橫紋肌細胞增生硬化、固化（圖6），肉芽腫性炎（圖7），炎癥局部巨噬細胞及其衍生細胞增生，形成境界清楚的結節狀病灶。為明確該結節狀病灶的性質，筆者作了免疫組化檢查，結果顯示肌肉組織中CKp、ki67、平滑肌肌動蛋白（SMA）、波形蛋白（Vim）（圖8）等指標均為陰性。因研究時間的限制，目前僅行一次消痔靈注射，如果消痔靈兩次以上注射后，尚不能排除組織惡變的可能。針對兩次實驗過程中肌肉組織的壞死，考慮以下的原因：如果消痔靈注射到血管中，會硬化堵塞血管，導致血管供應的組織無血供，產生組織壞死；如果消痔靈未注射到血管中，但大劑量的消痔靈引起肌肉組織過度增生，進而該變化向周邊蔓延，如果組織增生到一定程度，壓迫血管，其供應的組織同樣有發生壞死可能。

圖6 橫紋肌細胞增生硬化、固化

圖7 注射部位肌肉組織的炎癥改變

圖8 注射部位肌肉組織的免疫組化結果

本實驗結果對運用消痔靈注射液進行臨床治療，具有一定的指導意義。李國棟［2］等運用消痔靈注射治療直腸脫垂或內痔時，在直腸周圍間隙或痔核中注射消痔靈量大，才能達到組織粘連固定的治療效果。揭海英［14］治療內痔時采用四步注射法，需要將消痔靈充分注射于痔核的直腸上動脈區、黏膜下層、黏膜固有層和竇狀靜脈區。然而對于經驗不夠豐富的術者，注射過程中可能將消痔靈注射液注入肌肉。通過本研究有助于術者初步判斷可能發生的不良反應，如果消痔靈注射于肌肉中量大，則引起術后大出血、瘺等的發生可能性大。因此，在注射消痔靈過程中，特別在直腸前壁（尤其是女性）注射時，不能為了盲目達到藥物硬化固定的效果，而注射大量的消痔靈注射液，應充分認識其術后并發癥發生的風險。