HPLC法測定感冒疏風片中芍藥苷的含量

康紹建 羅 茜

1.云南省食品藥品審核查驗中心，云南 昆明 650011；2.昆明醫科大學，云南 昆明 650500

感冒疏風片是由麻黃絨、苦杏仁、桂枝、防風、白芍、紫蘇葉、甘草、桔梗、獨活、大棗、生姜、炒谷芽等12種中藥組成的復方制劑，具有辛溫解表、宣肺和中的功效,用于治療風寒感冒，發熱咳嗽，頭痛怕冷，鼻流清涕，骨節酸痛，四肢疲倦的癥狀。現行質量標準(衛生部藥品標準中藥成方制劑,第 11 冊)只有片劑項下的常規檢查項, 無含量測定項目,不能全面有效控制該藥品的內在質量和療效[1-2]。白芍為本方中的君藥，白芍的活性成分為白芍總苷，其芍藥苷是白芍總苷的重要有效成分[3]。芍藥苷paeoniflorin是白芍的主要有效成分，屬于一種天然水溶性單萜類糖苷[4]，具有抗炎鎮痛、抑菌、解熱、抗抑郁、神經保護、抗腫瘤、調節免疫、肝保護、心臟保護等藥理作用。通過對感冒疏風片中芍藥苷含量測定方法的研究，為全面評價感冒疏風片的質量提供簡便快速、準確可靠的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 The Shimadzu LC-20AT高效液相色譜儀；PM4-1300TL超聲儀；UV-2550紫外可見分光光度計；Sartorius CPA225D電子分析天平(十萬分之一)；Sartorius BS224S電子分析天平(萬分之一)。

1.2 試藥 感冒疏風片(批號490251、490005、490041、480862)由昆明中藥廠有限公司提供；(批號190116)由云南騰藥制藥有限公司提供；芍藥苷對照品(110736-201842)(含量以97.4%計)由中國藥品生物制品檢定研究院提供。實驗用的乙腈為色譜純、由美國默克公司生產；水為娃哈哈純凈水；乙醇，磷酸等其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶88)；流速為 1.0 mL·min-1,檢測波長為230 nm。理論板數按芍藥苷峰計應不低于2000。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取芍藥苷對照品10.11 mg (含量以97.4%計)，加入甲醇CH3OH定容至100 mL,制得每1 mL含0.09847 mg的芍藥苷對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取感冒疏風片20片，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再次稱定重量，用稀乙醇補足減失的失重，搖勻，濾過，取續濾液即得。

2.4 陰性樣品溶液制備 根據處方制備缺白芍的陰性樣品，按“2.3”項下方法制備陰性樣品溶液，即得。

2.5 專屬性試驗 依據2.1項下色譜條件，分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，測定。結果表明，在與對照品溶液色譜圖相應保留時間處，供試品溶液有芍藥苷特征吸收峰，而陰性對照液無相應吸收峰，表明專屬性良好。如圖 1～3所示。

圖1 芍藥苷對照品HPLC圖

圖2 感冒疏風片樣品HPLC圖

圖3 陰性樣品HPLC圖

2.6 線性關系的考察 精密吸取芍藥苷對照品溶液(0.09847 mg/mL)2 μL、5 μL、10 μL、20 μL、30 μL、40 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標(X)，以測得峰面積為縱坐標(Y)，線性回歸，即得回歸方程為：Y=142786127X-6127091，R2=1.00。線性范圍：0.19694～3.9388μg，結果表明線性關系良好。

2.7 精密度試驗 精密吸取芍藥苷對照品溶液(0.09847 mg/mL)10 μL，連續進樣6次，測定芍藥苷峰面積，結果峰面積RSD為0.3%，說明儀器精密度良好。

2.8 重復性考察 取同一批號(批號:490251)樣品6份,按上述“2.3”項下供試品溶液制備方法, 平行處理并測定, 結果6次測得芍藥苷平均含量為6.8336 mg/g，RSD為0.49% ，表明重復性良好。

2.9 穩定性考察 按上述“2.3”項下方法制備供試品溶液，室溫條件下每2 h進樣1次，以峰面積計算， RSD(n=7)為1.40%。結果表明室溫條件下，供試品溶液中芍藥苷在12 h內基本穩定。

2.10 準確度考察 精密稱取6份已知含量(6.8336 mg/g)供試品(批號490251)各約 0.5 g，置具塞錐形瓶中，分別精密加入芍藥苷對照品溶液(濃度0.6654 mg/mL)5 mL, 按上述“2.3”項下方法制備所需溶液，照含量測定方法項下操作，測定供試品溶液中芍藥苷的含量，計算芍藥苷的平均回收率(n=6)為97.64%；RSD為0.91%；結果表明方法準確度良好。見表1。

表1 準確度試驗結果

2.11 樣品測定 按上述色譜條件，依法測定5批樣品中芍藥苷的含量，結果見表2。

表2 5批樣品含量測定結果

3 討論

3.1 流動相的選擇 感冒疏風片處方中所含成分復雜，為了將芍藥苷與其他成分較好的分離，參考文獻，采用2種不同流動相：①乙腈-水和②乙腈-0.1%磷酸溶液，試驗結果表明：流動相①分離效果不好；流動相②樣品能獲得較好的分離，且得到對稱性較好的芍藥苷峰；對流動相②比例進行調整發現乙腈：0.1%磷酸溶液(12∶88)條件下，分離效果最佳。

3.2 提取條件的選擇 采用稀乙醇，甲醇，50%甲醇為提取溶劑，試驗結果表明，當提取溶劑為稀乙醇時，提取效果最好，故選用稀乙醇。實驗通過對稀乙醇超聲提取30 min、加熱回流提取 30 min、索氏提取2 h及3 h比較，其中索氏提取 2 h 含量最低，索氏提取3 h含量接近超聲提取30 min和加熱回流提取30 min；超聲提取效果較好且簡便快捷，故選用超聲提取30 min。