半夏瀉心湯治療胃黏膜異型增生療效及對患者胃癌相關基因甲基化的影響

馮 璇，寇 玉，薛 峰，紀安來，倪 慶1,

(1.揚州大學醫學院，江蘇 揚州 225009；2.揚州大學醫學院 江蘇省中西醫結合老年病防治重點實驗室，江蘇 揚州 225001;3.揚州大學附屬醫院，江蘇 揚州 225009)

胃黏膜異型增生(Gastric epithelial dysplasia,GED)為病理形態由單純性增生向腫瘤性增生演進的一種胃黏膜上皮、腺體異常分化的增生性疾病，是癌前病變的常見病理類型[1-2]。及時、有效的規范化治療是預防GED向癌變進展，并改善其預后的重要措施。該病發病機制復雜，幽門螺旋桿菌感染可能為其促發因素。中醫認為GED的主要病因為氣機升降失常、脾胃陰陽失調[3-4]。半夏瀉心湯用于治療消化道疾病已歷千年，是調理脾胃的傳統中藥方劑，主要由半夏、黃芩和干姜等組成，有調和脾胃、寒熱平調和消痞散結等功效[5-6]。我院應用半夏瀉心湯治療GED方面具有多年臨床經驗，且在實踐過程中經半夏瀉心湯化裁了健脾益氣化瘀解毒方應用于臨床，對GED具有同樣的療效。多發性腫瘤抑制因子1(p16)和磷酸酶和張力蛋白同源物基因(PTEN)均屬重要抑癌基因，與多種腫瘤的發生、發展密切相關[7-8]。本研究探討半夏瀉心湯治療GED的療效，并分析其對抑癌基因p16和PTEN甲基化的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以隨機數字表法將2019年2月至2020年7月于揚州大學附屬醫院診治的92例GED患者均分為對照組和觀察組，各46例。對照組男24例，女22例；年齡37～50歲，平均(43.26±3.67)歲；病程0.15～9年，平均(4.75±2.31)年。觀察組男25例，女21例；年齡37～50歲，平均(42.89±3.75)歲；病程0.28～8年，平均(4.68±2.28)年。兩組上述基線資料對比，差異均無統計學意義(P>0.05)，有可比性。診斷標準：以《中國慢性胃炎共識意見》[9]及《慢性胃炎中醫診療專家共識意見》[10]為準。病例納入標準：滿足西、中醫GED診斷標準；經病理組織學檢查、胃鏡證實為GED；知情理解，簽署同意書。排除標準：伴腎肝功能不全者；伴有消化性潰瘍者；伴神志疾患者。

1.2 治療方法

1.2.1 對照組：給予奧美拉唑腸溶膠囊(國藥準字H20059140)口服，20 mg/次，3次/d。予以葉酸片(國藥準字H35020215)口服，10 mg/次，3次/d。對合并HP感染者，加以PPI、鉍劑、抗生素組成三聯或四聯方案。

1.2.2 觀察組：于上述基礎上，加服半夏瀉心湯，組方：半夏12 g，干姜、大棗、人參、黃芩、炙甘草各9 g，黃連3 g。由我院煎藥室統一煎制，每日1劑，早晚分服。兩組均給予飲食指導。1個月為1個療程，連續治療3個療程。

1.3 觀察指標

1.3.1 甲基化特異性PCR：①DNA提取步驟為，分別抽取觀察組治療前后外周靜脈血各5 ml，DNA提取嚴格按說明書操作。DNA亞硫酸氫鹽修飾：取100 ng～1 μg DNA用NaOH和ddH2O調整至終體積20 μl，NaOH終濃度0.3 mol/L，經孵育后得到修飾后的DNA。②甲基化特應性PCR(MSP)：p16、PTEN基因甲基化(M)、非甲基化(U)上下游引物的設計應用Primer 5.0軟件處理，引物合成由上海捷瑞生物工程有限公司完成，引物序列見表1。③PCR反應條件：先以95 ℃熱啟動5 min；再95 ℃ 45 s，60 ℃ 45 s，72 ℃ 40 s，重復40次后以72 ℃延伸10 min。將PCR產物用2%凝脂糖瓊膠電泳后觀測結果。

表1 抑癌基因p16、PTEN擴增引物序列

1.3.2 中醫癥候評分：治療前后，觀察的主要癥狀的中醫癥候評分，包括胃脘痛、胃脘脹滿、舌象、食少、乏力和便溏，分為無、輕、中、重4級，分別記為0、2、4、6分。

1.4 療效標準 治愈：中醫癥候評分降低≥95%，主要癥狀消失且各項生化指標基本正常。顯效：中醫癥候評分減少70%～94%，主要癥狀及各項生化指標顯著改善。有效：中醫癥候評分降低30%～69%，主要癥狀及各項生化指標略有改善。無效：未及有效標準。總有效率=(治愈+顯效+有效)例數/總例數×100%。

2 結 果

2.1 兩組治療前后中醫癥候評分比較 見表2。治療后，兩組胃脘痛、胃脘脹滿、舌象、食少、乏力、便溏評分較治療前均顯著降低，且觀察組均低于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。

表2 兩組治療前后中醫癥候評分比較(分)

2.2 兩組臨床療效比較 見表3。觀察組臨床有效率82.61%高于對照組54.35%，差異具有統計學意義(P<0.05)。

表3 兩組臨床療效比較[例(%)]

2.3 觀察組治療前后血清p16、PTEN擴增產物變化 見表4(圖1、2)。治療后，觀察組p16、PTEN基因甲基化均受到抑制。血清p16基因甲基化率15.22%低于治療前甲基化率41.30%，血清PTEN基因甲基化率21.74%低于治療前甲基化率45.65%，差異具有統計學意義(P<0.05)。

表4 觀察組治療前后p16、PTEN基因甲基化比較[例(%)]

圖1 觀察組治療前后血清p16擴增產物電泳圖

圖2 觀察組治療前后血清PTEN擴增產物電泳圖

3 討 論

GED是一種胃黏膜上皮細胞及腺體發生異常分化，并在結構及功能上出現異型性改變的增生性病變，屬于胃癌前期病變，是胃癌級聯演變過程的必經階段和接近胃癌的臨界階段。幽門螺旋桿菌感染、飲食、環境等為其常見病因[11-12]。GED的臨床癥狀以胃脘痛和胃脘脹滿為主，屬于中醫“胃痞”和“痞滿”等范疇[13]。GED病灶主要在胃體和胃竇，其病情進展與脾、肝功能有關[14]。“水谷居于胃中，化糟粕而俱下大腸”，脾胃為中焦之臟而屬土，脾主升清，以升為健，胃主降濁，以降為順。肝屬木臟，主疏泄，條暢氣機。肝氣疏泄不及，脾氣難升，胃氣難降，造成脾胃升清降濁的功能失調。經曰：“濁氣在上，則生脹；清氣在下，則生飧泄”，由此可見，氣機的升降失常是引發胃痞、胃滿的重要病機。《黃帝內經》中，陰受之以入五臟，入五臟而滿閉塞。巢元方認為，臟腑痞塞而不宣乃營衛不和，陰陽隔絕之所致。李用粹認為，過食寒藥，常可致脾胃虧虛，胃脘作痛等。據此，胃脘痛、胃痞和胃滿等癥狀與陰陽失調亦關系密切[15]。

半夏瀉心湯乃仲景調理脾胃之經典用方。許愛麗等[16]、王艷威等[17]研究顯示，半夏瀉心湯可顯著提高慢性萎縮性胃炎患者機體免疫力、改善胃黏膜炎癥及臨床癥狀。本研究顯示，兩組治療后中醫證候各條目評分均顯著降低，且觀察組變化更明顯。在有效率上，觀察組優于對照組。這說明西醫常規與半夏瀉心湯聯用療效確切，可顯著改善GED患者臨床癥狀。分析其原因在于，方中半夏可消痞散結；黃芩、黃連清熱燥濕，可降上逆的濁氣；干姜可降凝滯寒邪；人參、炙甘草和大棗甘溫補中，可扶正驅邪，利于脾胃恢復氣機升降的功能。諸藥寒熱并用，扶正祛邪，起到調節脾胃陰陽平衡和氣機升降的功效[18-19]。因此，GED患者胃脘痛、胃滿等癥狀得到顯著改善。

p16、PTEN均屬抑癌基因。其中，p16所編碼的蛋白可與細胞周期蛋白D競爭結合周期蛋白依賴性激酶，對細胞周期相關的磷酸化過程起抑制作用，使細胞周期無法從G1期進入S期，進而起到抑制細胞增殖的作用[20]。PTEN可通過抑制絲裂原蛋白活化激酶阻滯細胞周期于G1期，抑制細胞的增殖[21]。基因甲基化是改變遺傳表現而不改變DNA序列的一種DNA化學修飾形式，其甲基基團的合成需要相關轉移酶的參與，甲基基團形成后，干擾RNA聚合酶基因識別，故而引發基因的正常轉錄及表達異常[22]。本研究治療后，兩組p16、PTEN甲基化率均有所降低，表明GED患者經半夏瀉心湯治療后，抑癌基因p16、PTEN的甲基化受抑制，利于抑癌基因p16、PTEN正常轉錄、編碼蛋白，進而有效避免了GED患者的病情向癌變進展。這可能是由于半夏瀉心湯處方中半夏、黃連等藥物含有復雜的化學組分，諸如半夏生物堿、谷甾醇等，可參與基因的甲基化和去甲基化過程[23-24]。因此，治療后觀察組p16、PTEN基因的甲基化率顯著降低。

綜上，半夏瀉心湯治療GED患者可明顯減輕臨床癥狀，提高其療效，且可抑制p16、PTEN基因的甲基化，從而延緩了GED患者病情向癌變進展。