益氣活血解毒方聯合化療治療晚期卵巢癌療效及對患者免疫通路相關靶基因的影響

李成斐，朱 萍，于 佳，劉俊彥，劉葉玲

(1.海軍第九七一醫院，山東 青島 266000；2.山東第一醫科大學附屬腫瘤醫院，山東 濟南250000；3. 泰安市中心醫院，山東 泰安 271000)

卵巢癌具有發病率高的特點，嚴重影響患者的生存質量。臨床上多采用化療治療晚期卵巢癌患者，TC方案(紫杉醇聯合卡鉑)化療是晚期卵巢癌患者的常用治療方式，雖然可以降低晚期卵巢癌患者的病死率，但隨著化療次數的增加，在殺死腫瘤細胞的同時，也會增加化療藥物對正常細胞的毒性，加之部分患者耐受能力較差，治療效果仍需進一步提升[1-2]。中醫學中卵巢癌屬于“積聚” “癥瘕”等范疇，內有情志不節、外有六淫之邪、飲食不當等致氣虛血瘀而發病，應以健脾益氣、活血化瘀、解毒散結為治則[3-4]。益氣活血解毒方由青陳皮、莪術、川楝子、白術等多種中藥組成，常用于治療肺癌，具有健脾益氣，活血解毒的功效[5]。絲裂原活化蛋白激酶3(Mitogen-activated protein kinase3，MAPK3)、白細胞分化抗原(Cluster of differentiation，CD40)、殺傷細胞免疫球蛋白樣受體2DL3(Recombinant killer cell immunoglobulin like receptor 2DL3，KIR2DL3)、人類淋巴細胞抗原DQA(Human lymphocyte antigen，HLA-DQA)等免疫通路相關靶基因表達水平與卵巢癌患者腫瘤的發生、發展及預后密切相關[6]，但目前關于益氣活血解毒方聯合TC方案是否能夠調節MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA免疫通路相關靶基因表達的研究尚少，鑒于此，本研究選取108例晚期卵巢癌(氣虛血瘀型)患者，探究益氣活血解毒方聯合TC方案的治療效果，并分析免疫通路相關靶基因的表達情況，以期為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年2月至2020年3月本院收治的108例晚期卵巢癌氣虛血瘀證患者為研究對象，以隨機數字表法分為對照組和觀察組，每組均為54例。本研究經我院醫學倫理委員會審批通過。病例納入標準：①中醫診斷參照《中藥新藥臨床研究指導原則》[7]，符合氣虛血瘀證；②西醫診斷參照《卵巢惡性腫瘤診斷與治療指南(第四版)》[8]，符合Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌的診斷標準，經細胞學或病理組織學證實；③既往未接受過放療者；④均簽署知情同意書；⑤預計生存時間>3個月；⑥卡氏功能狀態(Karnofsky)評分≥60分。排除標準：①溝通障礙者；②伴有嚴重心、肝、腎等臟器功能不全者；③患精神系統疾病或存在認知障礙者；④自身免疫疾病者；⑤凝血功能障礙者；⑥伴有其他部位原發惡性腫瘤者；⑦對本研究中治療藥物過敏者。對照組年齡45～76歲，平均(60.12±6.78)歲；腫瘤分期：Ⅲ期38例，Ⅳ期16例；病理分型：漿液型39例，黏液型8例，其他7例；Karnofsky評分62～76分，平均(68.25±3.28)分；腫瘤分化程度：低分化12例，中分化28例，高分化14例。觀察組年齡46～76歲，平均(60.24±6.82)歲；腫瘤分期：Ⅲ期36例，Ⅳ期18例；病理分型：漿液型38例，黏液型7例，其他9例；Karnofsky評分61～75分，平均(68.32±3.31)分；腫瘤分化程度：低分化14例，中分化27例，高分化13例。兩組年齡、病理分型、腫瘤分化程度、Karnofsky評分等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法

1.2.1 對照組：采用TC方案化療。第1天給予患者靜脈注射卡鉑注射液(國藥準字H20020180)300～400 mg/m2，3周1次；第2天給予患者靜脈注射紫杉醇注射液(國藥準字H20113538)150 mg/m2，輸注時間>180 min，3周1次，21 d為1個療程，治療兩個療程，治療至患者出現嚴重不良反應或病情進展時應停止化療。

1.2.2 觀察組：在對照組的基礎上聯合益氣活血解毒方治療。中藥組方：青陳皮、莪術、川楝子各9 g，白術、白花蛇舌草、山藥各15 g，黃芩30 g，肉桂、三棱各6 g，全蝎5 g。水煎煮取汁400 ml，每日1劑，早晚各服用1次，200 ml/次。21 d為1個療程，治療2個療程。

1.3 觀察指標

1.3.1 觀察兩組治療前后中醫癥狀評分：治療前1 d、治療6周后分別評估兩組中醫癥候，參照《中藥新藥臨床研究指導原則》，內容包括氣短、膚色晦暗、乏力、疼痛、舌有瘀斑、舌有齒痕或舌苔薄白、舌暗、舌下靜脈青紫，按照癥候輕重程度分為3分(癥狀嚴重，不能堅持日常活動)、2分(癥狀較輕，勉強維持日常活動)、1分(癥狀不明顯，可進行日常活動)、0分(癥狀無)，癥狀累計總分為24分，癥狀累積總分越高代表癥狀越嚴重。

1.3.2 兩組治療前后T淋巴細胞亞群：治療前1 d、治療6周后分別采集患者的外周血5 ml，離心10 min，轉速為1500 r/min，離心半徑為10 cm，取上清液，采用流式細胞儀(貝克曼庫爾特商貿有限公司)檢測T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+細胞的比例。試劑盒生產廠家為上海研生實業有限公司。

1.3.3 兩組治療前后血液mRNA表達水平：采用實時熒光聚合酶鏈式反應(Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)法檢測外周血免疫通路相關靶基因表達水平，治療前1 d、治療6周后采集患者外周血5 ml，采用Trizol試劑從患者樣本中分離出總核糖核酸(Ribonucleic Acid，RNA)，采用反轉錄試劑盒(北京伊塔生物科技有限公司)將上述總RNA轉錄至互補脫氧核糖核酸(Complementary DNA，cDNA)。采用SYBR GReen熒光擴增試劑盒(哈爾濱新海基因檢測有限公司)平行測定3次，通過2-△△Ct法[9]計算MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA血液信使核糖核酸(Messenger RNA，mRNA)表達量。

1.3.4 比較兩組治療期間不良反應發生情況：根據世界衛生組織(WHO)提出的抗癌藥物不良反應分級標準[10]，根據不良反應程度從輕到重按照Ⅰ-Ⅳ級評估；兩組治療期間不良反應發生情況，內容包括貧血、惡心嘔吐、脫發、白細胞降低、血小板減少。

1.4 療效標準 根據實體腫瘤療效評估標準(1.1版)[11]評估兩組臨床療效，完全緩解(Complete remission，CR)：腫瘤完全消失；部分緩解(Partial response，PR)：腫瘤消退>50%；疾病穩定(Stable disease，SD)：腫瘤增大<25%或腫瘤消退≤50%；疾病進展(Progressive disease，PD)：出現新的病灶或腫瘤增大≥25%。臨床控制率=(CR+PR+SD)例數/總例數×100%。

1.5 統計學方法 采用SPSS 25.0統計學軟件進行分析。計數資料以[例(%)]表示，采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差表示，用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組治療前后中醫癥候評分比較 見表1。治療前，兩組中醫癥候評分比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組中醫癥候評分均比治療前低(P<0.05)，且觀察組低于對照組(P<0.05)。

表1 兩組治療前后中醫癥候評分比較(分)

2.2 兩組治療前后T淋巴細胞亞群比較 見表2。治療前，兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異無統計學意義(均P>0.05)；治療后，兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均比治療前高(P<0.05)，且觀察組高于對照組(均P<0.05)。

表2 兩組治療前后T淋巴細胞亞群比較

2.3 兩組治療前后血液mRNA相對表達水平比較 見表3。治療前，兩組MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA均降低(P<0.05)，且觀察組均比對照組低(P<0.05)。

表3 兩組治療前后血液mRNA相對表達水平比較

2.4 兩組臨床療效比較 見表4。觀察組臨床控制率比對照組高(83.33%與64.81%，P<0.05)。

表4 兩組臨床療效比較[例(%)]

2.5 兩組治療期間不良反應發生比較 見表5。兩組治療期間貧血、惡心嘔吐、脫發、白細胞降低等Ⅲ和Ⅳ級不良反應發生率相近(P>0.05)。

表5 兩組治療期間不良反應發生比較[例(%)]

3 討 論

晚期卵巢癌患者給予TC方案治療，雖能夠改善患者的臨床癥狀，但在化療的同時，可沖擊機體正常免疫系統功能，在增加生存率方面仍然存在一定的局限性[12-13]。當前，中西醫聯合治療在多種惡性腫瘤中取得良好效果[14-15]。晚期卵巢癌多伴有遠處轉移，惡病質出現，屬正衰而毒、痰、瘀強盛，病機多為氣虛血瘀，而中醫更注重扶正祛積、益氣養血，應以健脾益氣、活血化瘀、解毒散結為治則[16-17]。

本研究結果顯示，治療后觀察組氣虛血瘀證中醫癥狀評分低于對照組，且臨床控制率優于對照組，提示益氣活血解毒方聯合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者能夠改善臨床癥狀，療效顯著。益氣活血解毒方由青陳皮、莪術、川楝子、白術、白花蛇舌草、山藥、黃芩、肉桂、三棱等多種中藥組成，黃芪為君藥，味甘，性微溫，歸屬于肺、脾經，具有補氣固表、托毒化膿的功效；三棱、莪術均為臣藥，味苦，性平，歸屬于脾、肝經，具有消積止痛、破血行氣的功效，諸藥合同，可達活血化瘀、健脾益氣、解毒散結之功[18]。現代藥理學研究表明[19]，益氣活血散毒方能夠抑制腫瘤細胞的轉移、復制、轉錄以及翻譯。T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+可參與機體多種免疫反應，可在一定程度上反應機體免疫功能水平，本研究結果顯示，治療后觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比對照組高，提示益氣活血解毒方聯合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者，可調節機體的免疫炎性反應。既往研究[20]采用益氣活血解毒方治療晚期卵巢癌患者，可改善患者的生活質量及免疫功能，與本研究結果類似。MAPK3對腫瘤的生長具有協同抑制作用；CD40可促進腫瘤擴散和腫瘤血管的生成；KIR2DL3有助于恢復自然殺傷細胞的腫瘤作用；HLA-DQA能夠反應機體抗腫瘤免疫監視能力的強弱，本研究結果顯示，治療后觀察組MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA均低于對照組，提示益氣活血解毒方聯合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者，可下調MAPK3、CD40、KIR2DL3、HLA-DQA表達水平，從而發揮抗腫瘤作用，其具體的作用機制仍待進一步探究[21]。

本研究結果顯示，兩組治療期間Ⅲ和Ⅳ級不良反應發生率相近，提示益氣活血解毒方聯合TC方案用于治療氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者并不會顯著增加用藥不良反應。益氣活血解毒方全方配伍合理，藥性平和，用法、用量均符合晚期卵巢癌中醫治療規范[22]。

綜上所述，氣虛血瘀證晚期卵巢癌患者采用益氣活血解毒方聯合TC方案治療，能夠改善患者的臨床癥狀，療效顯著，調節機體免疫功能水平及相關免疫通路，且較安全。然而本研究部分評定結果依靠患者主觀感覺進行評定，另外本研究選取病例有限，研究結果可能存在一定偏差，仍需進一步深入研究，探明具體作用機理。