真核起始因子4A及組蛋白乙酰轉移酶表達水平與卵巢癌患者FIGO分期的相關性

李川，楊金花

(鄭州人民醫院 病理科，河南 鄭州 450000)

卵巢癌具有發病隱匿、發病率高、惡性程度高、易遠處轉移等特點，是女性常見惡性腫瘤，多數患者就診時已存在遠處轉移或局部浸潤，不利于臨床干預[1]。因此，及早診斷并進行干預是改善卵巢癌患者預后的重要因素，尋找科學、可行的生物學診斷指標具有重要臨床價值。近年來，表觀遺傳學對惡性腫瘤進展影響的相關研究逐漸增多，為卵巢癌生物學指標研究提供新方向。組蛋白乙酰轉移酶(histone acetyltransferase，HAT)是組蛋白轉移酶家族成員，真核起始因子4A(eukaryotic initiation factor 4A，eIF4A)是翻譯起始復合因子，二者均在多種腫瘤中存在異常表達，但目前在卵巢癌相關研究中報道較少。本研究選取2012年12月至2014年10月鄭州人民醫院收治的43例卵巢癌患者和同期40例良性卵巢疾病患者作為研究對象，分析HAT、eIF4A對卵巢癌臨床診斷及預后評估的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年12月至2014年10月鄭州人民醫院收治的43例卵巢癌患者作為觀察組，另選取同期40例良性卵巢疾病(由于其他婦科疾病需進行部分卵巢切除，且術后病理證實為非卵巢癌)患者為對照組。對照組：年齡34～63歲，平均(48.57±6.52)歲。觀察組：年齡33～65歲，平均(50.03±6.71)歲；黏液性囊腺癌28例，漿液性囊腺癌15例。兩組年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 選取標準(1)納入標準：①經手術病理確診為卵巢癌；②臨床資料完善；③術前未經免疫治療或放化療干預。(2)排除標準：①臨床資料不完善；②國際婦產科協會(Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO)分期不明確。

1.3 檢測方法術中取得卵巢標本后以免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶兩步法進行檢測。用磷酸鹽緩沖液沖洗標本后以福爾馬林固定，采用石蠟包埋，酒精脫水，以4 μm厚度進行切片，脫蠟水化，高溫高壓下修復抗原；在切片上滴加過氧化酶，孵育10 min，設置溫度為37 ℃，滴加山羊血清封閉；滴加一抗，孵育過夜，設置溫度為4 ℃；以磷酸鹽緩沖液沖洗，滴加二抗，孵育20 min，設置溫度為37 ℃；以磷酸鹽緩沖液沖洗，加入過氧化物酶溶液，孵育20 min，設置溫度為37 ℃；以鮮二氨基聯苯胺顯色，復染，封片，于熒光顯微鏡下觀察；以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。采用半定量評分法判定，采用染色強弱與陽性細胞比率乘積評估表達水平。染色強弱：強計3分，中計2分，弱計1分，無計0分。陽性細胞比率：>75%計4分，>50%～75%計3分，>25%～50%計2分，5%～25%計1分，<5%計0分。9～12分為高表達，5～8分為中表達，1～4分為低表達，0分為陰性。所有患者均進行為期5 a的隨訪。

1.4 觀察指標(1)HAT、eIF4A陽性表達率。(2)不同FIGO分期HAT及eIF4A陽性表達率。(3)HAT、eIF4A陽性表達率與FIGO分期的相關性。(4)HAT、eIF4A表達水平與卵巢癌患者中位生存期的關系。(5)卵巢癌患者預后的影響因素。

1.5 統計學方法采用SPSS 22.0統計軟件處理數據。計數資料以頻數和率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Spearman秩相關分析HAT及eIF4A陽性表達率與FIGO分期的相關性，不符合正態分布的計量資料采用中位數表示，采用Mann-WhitneyU檢驗，采用多因素logistic回歸分析影響卵巢癌患者預后的因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HAT及eIF4A陽性表達率觀察組HAT陽性表達率低于對照組，eIF4A陽性表達率高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組HAT、eIF4A陽性表達率比較[n(%)]

2.2 不同FIGO分期HAT及eIF4A陽性表達率FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期HAT陽性表達率高于Ⅲ～Ⅳ期，eIF4A陽性表達率低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)。見表2。

表2 HAT、eIF4A陽性率與FIGO分期的關系[n(%)]

2.3 HAT及eIF4A陽性表達率與FIGO分期的相關性Spearman秩相關分析表明，HAT陽性表達率與FIGO分期呈負相關(r=-0.305，P<0.001)，eIF4A陽性表達率與FIGO分期呈正相關(r=0.373，P<0.001)。

2.4 HAT及eIF4A表達水平與卵巢癌患者中位生存期的關系HAT陰性表達患者中位生存期(30.7個月)較陽性表達患者(65.5個月)短，eIF-4A陽性表達患者中位生存期(31.5個月)較陰性表達患者(70.4個月)短(P<0.05)。

2.5 卵巢癌患者預后的影響因素多因素logistic回歸分析結果顯示，HAT陰性、eIF4A陽性是卵巢癌患者中位生存期短的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 卵巢癌患者預后的影響因素

3 討論

卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤，全球范圍內每年新發病例可達25萬，14萬以上患者因卵巢癌死亡[2]。卵巢癌發病機制與免疫、環境、遺傳等多種因素相關，既往研究主要集中于遺傳易感性[3]。近年來由于分子生物學的迅速發展，臨床逐漸關注表觀遺傳學異常改變，如組蛋白修飾、DNA甲基化、RNA調控等在卵巢癌中的作用。

HAT是組蛋白乙酰化過程中的重要成員，可通過組蛋白H3和組蛋白H4賴氨酸氨基端作用參與核苷酸修復、復制、轉錄、染色體重構等過程，HAT水平表達異常會造成蛋白乙酰化失衡，從而誘發腫瘤[4]。有研究指出，與正常卵巢組織相比，卵巢癌患者HAT水平明顯偏低[5]。eIF4A在多種腫瘤中均表現為過度表達，如淋巴瘤、乳腺癌、肝癌。卵巢上皮腫瘤組織中eIF4A陽性率明顯偏高[6]。eIF4A是翻譯起始復合因子，在對腺嘌呤核苷三磷酸依賴的DEAD-box RNA解旋酶中水平較高，可調控蛋白合成起始過程，若eIF4A表達失控則造成蛋白合成異常，從而誘發腫瘤。本研究結果顯示，觀察組HAT陽性表達率低于對照組，eIF-4A陽性表達率高于對照組，說明卵巢癌患者eIF4A及HAT陽性表達情況與良性卵巢疾病患者存在明顯差異，通過檢測eIF4A、HAT陽性表達情況對卵巢癌臨床診斷有一定的價值。進一步分析eIF4A及HAT與卵巢癌的關系發現，FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期HAT陽性表達率高于Ⅲ～Ⅳ期，eIF-4A陽性表達率低于Ⅲ～Ⅳ期，且Spearman秩相關分析表明，HAT陽性表達率與FIGO分期呈負相關，eIF4A陽性表達率與FIGO分期呈正相關。這說明通過檢測eIF4A及HAT陽性表達情況有助于鑒別卵巢癌FIGO分期，且eIF4A、HAT可能共同參與卵巢癌發生及進展過程。eIF4A為翻譯起始復合因子，其表達異常會造成蛋白合成失控，卵巢上皮細胞增殖失控及惡性轉化，并逐步進展為卵巢癌。HAT作為催化亞基，對組蛋白H4K16特異性乙酰化，促使染色質基因暴露，有助于轉錄因子結合，加快啟動基因轉錄過程。卵巢癌患者HAT呈低水平表達，降低乙酰化H4K16水平，導致基因組不穩定，增加染色體畸變風險，降低DNA修復功能，促使腫瘤發生。因此，eIF4A及HAT參與卵巢癌進展過程。多因素logistic回歸分析結果顯示，HAT陰性、eIF4A陽性是卵巢癌患者中位生存期短的獨立危險因素，提示通過檢測HAT及eIF4A表達水平可評估患者預后，有助于臨床早期指導干預。

綜上，HAT及eIF4A在卵巢癌患者中存在異常表達，與卵巢癌發生、進展關系密切，HAT陰性、eIF4A陽性則提示卵巢癌患者預后較差，通過檢測HAT及eIF4A表達水平有助于卵巢癌早期診斷及預后分析，可為臨床干預提供指導意見，具有較高的臨床價值。