血清微小RNA-21表達水平與腎癌患者術后復發率的關聯性

王梓軒，宋東奎

(鄭州大學第一附屬醫院 泌尿外科，河南 鄭州 450052)

腎癌源于腎小管上皮細胞，約占全身惡性腫瘤的3%，占腎原發性惡性腫瘤的85%～90%，病死率高達40%[1]。目前治療腎癌的主要方式為腫瘤切除術，可延長患者生存期，但復發率仍較高。腎癌患者術后復發與是否發生轉移具有一定的聯系，故需從分子水平了解腎癌，尋找有效的分子標志物，為評估或判斷復發提供幫助[2]。微小核糖核酸(microRNA，miR)屬于內源化保守非編碼的單鏈小分子RNA，與腫瘤分期、轉移以及預后等密切相關[3]。本研究探討血清miR-21表達水平與腎癌術后復發的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年1月至2017年12月鄭州大學第一附屬醫院收治的108例腎癌患者作為觀察組，均接受腫瘤切除術治療。另選同期100例健康體檢者作為對照組。對照組：男46例，女54例；年齡35～70歲，平均(52.54±8.71)歲。觀察組：男52例，女56例；年齡34～72歲，平均(53.03±9.46)歲；臨床分期為Ⅰ期36例，Ⅱ期34例，Ⅲ期38例；腫瘤直徑≤4 cm 50例，>4 cm 58例；血清miR-21表達水平為高表達52例，低表達56例。兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。研究對象均簽署知情同意書。本研究經醫院醫學倫理委員會審核通過。

1.2 納入標準和排除標準(1)納入標準：觀察組患者經手術活檢、病理檢查等確診為腎癌，符合手術指征且同意手術治療。(2)排除標準：①合并全身感染性病變；②曾經接受過免疫治療以及放化療；③合并其他部位的惡性腫瘤。

1.3 miR-21檢測方法采集受檢者空腹肘靜脈血4 mL，以3 000 r·min-1離心15 min，室溫下放置約30 min，取上清液。采用逆轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)法檢測血清miR-21的表達水平。使用由上海雨婷生物科技公司提供的RNA提取試劑盒提取總RNA，逆轉為cRNA，再進行基因擴增，以GAPDH作為內參基因，利用Primer 5軟件對內參基因以及目的基因的引物進行設計和合成。miR-21的上游引物為5’-TTTGGCTCTGACCATTCTGT-3’，下游引物為5’-GTCCTCACCTGAGGGACCC C-3’，40個循環，曲線溶解，將每個孔設置為3個復孔，選用Threshhold設置下Ct平均值，采用2-△△Ct法計算miR-21表達水平。

1.4 觀察指標(1)比較對照組和觀察組血清miR-21表達水平。(2)隨訪2 a，比較miR-21不同表達水平的腎癌術后復發率。根據血清miR-21的表達水平將患者分為高表達組和低表達組。復發標準為治療后患者病情加重。(3)分析血清miR-21表達水平與術后復發率的關聯性。

2 結果

2.1 血清miR-21表達水平觀察組血清miR-21相對表達水平(8.43±3.39)較對照組(1.61±0.67)高(t=19.761，P<0.001)。

2.2 術后復發率隨訪2 a，因搬家、轉院治療等原因失訪6例?；颊哐錷iR-21低表達者52例，復發率為11.54%(6/52)；血清miR-21高表達者50例，復發率為52.00%(26/50)。高表達組術后復發率高于低表達組(χ2=19.383，P<0.001)。

2.3 患者血清miR-21表達水平與術后復發率的關系血清miR-21表達水平與術后復發率呈正相關(r=0.578，P=0.002)。

2.4 腎癌患者術后復發的影響因素不同性別、年齡、腫瘤直徑的腎癌患者術后復發率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移以及血清miR-21高表達水平的腎癌患者的術后復發率較高(P<0.05)。見表1。

表1 腎癌患者術后復發的單因素分析[n(%)]

2.5 腎癌患者術后復發的多因素分析以術后復發率作為因變量(術后復發=1，無術后復發=0)，對單因素分析中有意義的自變量進行分析，并給予賦值，即TNM分期(Ⅰ期=1，Ⅱ期=2，Ⅲ期=3)、有淋巴結轉移(有=1，無=0)以及血清miR-21表達水平(高表達=1，低表達=0)，TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移以及血清miR-21高表達水平均為腎癌患者術后復發的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 腎癌患者術后復發的多因素分析

3 討論

腎癌屬于泌尿系統常見腫瘤，早期無特異臨床癥狀，缺少早期的診斷方式，且其進展的風險較高[4]。目前治療腎癌的方式為手術治療，但術后遠期生存預后較差，術后復發率為20%～40%。因此，需尋找有效評估預后的血清生物標志物。

本研究前期依據生物信息學和相關研究進展進行大量篩選工作，發現在甲狀腺癌、宮頸癌、大腸癌、膽管癌等多種腫瘤中miR-21的表達水平是上調最為頻繁的miR之一。本研究結果顯示，觀察組血清miR-21表達水平高于對照組。隨訪2 a發現，血清miR-21高表達者術后復發率高于低表達者，說明miR-21高表達的腎癌患者術后復發率較高。此外，Pearson相關分析發現血清miR-21表達水平與術后復發率呈正相關，說明血清miR-21的表達水平越高，術后復發率越高，可為臨床評估預后提供參考依據。miR屬于眾多小RNA中一員，其產生是一個較為復雜的過程，目前并未完全明確。隨著研究逐漸深入，發現其參與和調節細胞周期的各個環節，在細胞的增殖、分化和凋亡等相關生物學過程中具有重要作用[5]。miR-21在翻譯的過程中對p27產生抑制效果，而p27主要作用為控制細胞分裂G1期和S期之間的轉化，從而促使細胞周期停滯在靜止期，miR-21高表達可抑制p27的作用，繼而促進細胞快速增殖[6]。在腫瘤形成期間，血管內皮生長因子發揮重要作用，可為腫瘤提供豐富血供，而miR-21可間接調控腎癌患者的VEGF基因表達，促進病情發展[7]。此外，miR-21還能對腫瘤細胞的變形和浸潤能力產生影響，利于腫瘤細胞對基膜組織的突破，進而導致泌尿系統移行上皮細胞的破壞和損傷，從而促進腫瘤細胞的浸潤[8]。為更好地預防腎癌患者術后復發率的升高，本研究進行危險因素分析，其結果顯示，TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移以及血清miR-21高表達水平的腎癌患者的術后復發率較高，多因素logistic回歸分析顯示，TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移以及血清miR-21高表達水平均為腎癌患者術后復發的獨立危險因素，說明腎癌患者伴有TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移以及血清miR-21高表達水平中任意一項，術后復發風險均可升高。因此，臨床需針對性給予干預措施以降低術后復發風險。

綜上所述，腎癌患者的血清miR-21表達水平較高，且其表達水平與術后復發率呈正相關，可為預后評估提供可靠的參考依據，并針對伴有TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移以及血清miR-21高表達水平的腎癌患者給予積極干預措施，以改善預后。