快速溶劑萃取-高效液相色譜法檢測花生中的克百威殘留量

周宏霞，王 楠，都 穎，張梅超，倪瑞敏

（威海市食品藥品檢驗檢測研究院，山東威海 264200）

克百威、3-羥基克百威等農藥常用于花生的種植和生長過程中，它們能防治多種害蟲。《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）中規定，花生中克百威的限量為0.2 mg/kg，其中克百威的殘留量包含克百威和3-羥基克百威。克百威和3-羥基克百威是廣譜性殺蟲、殺線蟲劑，具有觸殺和胃毒作用。它與膽堿酯酶結合不可逆，因此毒性較高[1]。對花生中的克百威殘留量進行檢測和監控，顯得尤為重要。

目前檢測克百威的方法有氣相色譜法[2-3]、氣相色譜-質譜法[4-5]、熒光檢測器-高效液相色譜法[6-9]、紫外檢測器-高效液相色譜法[10-11]、高效液相色譜-質譜法[12-15]等。目前比較常用的是熒光檢測器-高效液相色譜法，該方法靈敏度高，儀器配備要求不高。提取花生中克百威的方法有索氏提取、超聲波輔助提取、振蕩提取等，但過程煩瑣、周期長，不利于大批量檢測。快速溶劑萃取是近幾年發展起來的一種在高溫、高壓條件下快速提取固體或半固體樣品的前處理方法，具有快速高效的特點，已在多個領域廣泛應用[16]。本文采用快速溶劑萃取的方法提取花生中的克百威和3-羥基克百威，用高效液相色譜-柱后衍生法檢測。該方法操作簡單，自動化程度高，適宜于批量檢測工作。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

花生：市售，硅膠，硅藻土，乙腈（色譜純，thermo），甲醇（色譜純，thermo），丙酮（色譜純，thermo），OPA溶液（美國Pickering公司），氫氧化鈉溶液（美國Pickering公司），鄰苯二甲醛（美國Pickering公司），巰基乙醇（美國Pickering公司），克百威、3-羥基克百威標準品（農業部標準品，濃度100 mg/L），超純水。

1.2 儀器與設備

分析天平，玻璃研缽和研杵，旋轉蒸發儀，快速溶劑萃取儀，帶柱后衍生系統的高效液相色譜儀，Mili-Q純水系統。

1.3 實驗方法

1.3.1 液相色譜條件

（1）衍生條件。水解試劑流量0.3mL/min，OPA試劑流量0.3mL/min，水解溫度100℃，衍生溫度為室溫。

（2）色譜條件。C18柱（安捷倫Eclipe Pluse 4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫：42 ℃，流量1.0 mL/min進樣量：10 μL，流動相：A為甲醇，B為水。梯度洗脫程序：0～10 min時，B由80%降至45%；10～19 min時，B由45%降至20%，19～20 minB由20%升至80%；20～25 minB為80%。激發波長為339 nm，發射波長為445 nm.

1.3.2 快速溶劑萃取條件

溶劑：乙腈；溫度：100 ℃；萃取壓力：10 MPa；加熱時間：300 s；靜態時間：180 s；淋洗體積：40%；吹掃時間：100 s；循環次數：3次。

1.3.3 標準溶液配制

準確移取1 mL的克百威、3-羥基克百威標準溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得到10 mg/L的標準儲備液，用甲醇水溶液（1+1）逐級稀釋，得到0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.40 mg/L和 1.00 mg/L標準的工作液。

1.3.4 樣品前處理

稱取粉碎均勻的花生樣品5.0 g和5 g硅膠，放入干凈玻璃研缽種充分混合均勻，然后裝入33 mL萃取池中，加入1 g硅藻土填滿萃取池。裝好萃取池后，放入快速溶劑萃取系統中按照1.3.2的條件進行萃取。將萃取液轉移至雞心瓶中，45 ℃下旋轉蒸發至近干。用2.5 mL甲醇定容，過0.22 μm的有機濾膜，待上機檢測。

2 結果分析

2.1 萃取溶劑的選擇

萃取溶劑是影響萃取效率重要因素之一。本實驗選用丙酮和乙腈兩種有機試劑比對回收率的大小。經過實驗發現丙酮提取時，能把花生中的油提取出來，影響定容，并且雜質干擾多。乙腈萃取效果好，回收率高，因此選用乙腈為萃取溶劑。

2.2 流動相的選擇

流動相參考（NY/T 761—2008）中用到的甲醇和水，采用等度洗脫時，3-羥基克百威的的保留時間比較靠前，而克百威的保留時間比較靠后，兩者的保留時間相差比較大。因此采用梯度洗脫，前期甲醇的比例小，使3-羥基克百威的保留時間拖后，后期甲醇濃度增大，克百威出峰時間提前。這樣既能使目標物與雜質分離開來，又能保證一個樣品的分析時間不會太長。

2.3 線性范圍和檢出限

按照1.3.3制備的混合標準溶液，在優化的色譜條件下，以峰面積為縱坐標，3-羥基克百威和克百威的含量（質量濃度）為橫坐標，繪制工作曲線，在0.02～1.00 mg/L質量濃度范圍內，濃度與色譜峰面積線性關系良好，且相關系數均大于0.999。以信噪比（S/N）的3倍計算檢出限，在取樣為5 g時，克百威、3-羥基克百威的檢出限為0.01 mg/kg。校準曲線方程見表1所示。

表1 2種農藥的校準曲線

2.4 精密度和加標回收實驗

取空白的花生樣品進行加標實驗，加標濃度如表2所示，按照1.3.4樣品前處理方法對加標樣品進行前處理，按照1.3.1色譜條件進行測定，每個加標質量濃度水平平行測定6次。添加回收率實驗結果見下表2。

表2 加標回收實驗結果

3 結論

本文建立了快速溶劑萃取-高效液相色譜法測定花生中的克百威，該方法操作簡單，有機試劑用量少，自動化程度高，適用于批量檢測工作。實驗結果表明，克百威和3-羥基克百威在0.02～1.0 mg/L濃度范圍內線性關系好，相關系數在0.999以上，在0.01～0.10mg/kg加標水平時，回收率為86.3%～97.2%，相對標準偏差為1.22%～4.73%（n=6），方法的檢出限為0.01 mg/kg。該方法適用于花生中克百威殘留量的檢測。