利用超靈敏真菌毒素快檢法建立 高效的食品加工過程質量監控體系

林玉惠，陳偉民，袁如英，黃敘吟，劉麗強

（1.汕頭市天悅科技創新研究院有限公司，廣東汕頭 515063；2.江南大學，江蘇無錫 214122）

黃曲霉毒素對人類和動物的健康有一定的毒害作用，真菌毒素的毒性最強，嚴重可致癌，甚至致死，危害巨大[1-2]。 糧油食品是基礎食品原料，是生活中的主要食品。這類食品是淀粉、油脂含量較多的物質，易被黃曲霉、寄生曲霉等產生的衍生物黃曲霉毒素污染[3]，被污染的農作物可將真菌毒素傳遞到食品中，具有較大食品安全隱患，對居民身體健康造成嚴重威脅[4-5]。超靈敏真菌毒素快檢法的應用有利于建立高效的產品質量安全監控體系，對提高產品的安全性具有較大的作用。

常用的真菌毒素檢測方法主要有液相色譜-質譜法、熒光光度法、同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜-柱前衍生法、高效液相色譜-柱后衍生法、高效液酶聯免疫吸附篩查法、薄層色譜法、高效液相色譜法、免疫親和層析凈化液相色譜法、試劑盒法、速測卡法等[1]，其中速測卡法具有靈敏性、快速性、特異性強等優勢，真菌毒素快速檢測具有廣闊的發展前景。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

大米、燕麥、花生

1.1.2 主要試劑

70%甲醇水溶液；AFB1膠體金快速定量檢測卡；膠體金快速定量檢測稀釋液；甲醇（CH3OH）：色譜純；乙腈（CH3CN）：色譜純；正己烷（C6H14）：色譜純；三氟乙酸（CF3COOH）。

1.1.3 主要儀器設備

分析天平（0.001 g和0.000 1 g）；超聲波振蕩器；磁力攪拌器；離心機（轉速6 000 r/min）；定時計時器；孵育器；熒光免疫分析儀；高速粉碎機；微波烘干機；液相色譜儀：配熒光檢測器；氮吹儀；電熱恒溫箱；pH計。

1.2 實驗方法

1.2.1 檢測驗證對象

參考標準《糧食衛生標準的分析方法》（GB/T 5009.36— 2003），確定本次驗證糧食制品為大米、燕麥和花生在各自生產工藝過程中不同質量關鍵控制點取樣進行檢測驗證，驗證的真菌毒素為黃曲霉毒素B1。驗證方法為常規普通檢測方法用《食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》（GB 5009.22—2016）中的高效液相色譜-柱前衍生法和快速檢測方法用膠體金快速測試卡法，采用自主研發的黃曲霉毒素B1膠體金快速定量檢測卡（定量范圍為2.5～50 μg/kg）[2]。

1.2.2 樣品的制備

汕頭市天悅科技創新研究院有限公司根據大米、燕麥和花生等各種物料生產工藝過程中各關鍵控制點進行取樣。

1.2.3 各物料的生產工藝流程及質量安全關鍵控制點設定

（1）大米制作成復水米飯工藝流程及質量安全控制點設定。工藝流程為：大米→清洗→蒸煮→烘干→成品（復水米飯）。質量安全關鍵控制點為：①原料大米；②蒸煮后米飯；③成品復水米飯。

（2）燕麥的生產工藝流程。燕麥→清洗→蒸煮→壓片→烘干→成品（燕麥片）。質量安全關鍵控制點為：①原料燕麥；②蒸煮后壓片燕麥；③成品燕麥片。

（3）花生制作花生油。花生→清洗→脫干→壓榨→成品油（花生油）和花生渣。

質量安全關鍵控制點為：①原料花生；②花生油；③花生渣。

2 結果與分析

2.1 復水米飯生產過程質量檢測

由表1可知，大米生產過程關鍵控制點檢測結果的準確性。根據同一關鍵控制點2種不同檢測方法的檢測結果，每個關鍵控制點共進行3批次有效的檢測，總共出現誤判次數為0次，故判定準確率為100%。

表1 復水米飯生產過程質量檢測

2.2 燕麥片生產過程質量檢測

由表2可得，燕麥生產過程關鍵控制點檢測結果的準確性。根據同一關鍵控制點2種不同檢測方法的檢測結果，每個關鍵控制點共進行3批次有效的檢測，共出現誤判次數為0次，故判定準確率為100%。

表2 燕麥片生產過程質量檢測結果

2.3 花生油生產過程質量檢測結果

由表3可得花生生產過程關鍵控制點檢測結果的準確性。根據同一關鍵控制點2種不同檢測方法的檢測結果，每個關鍵控制點共進行3批次有效的檢測，共出現誤判次數為0次，故判定準確率為100%。

表3 花生油生產過程質量檢測結果

2.4 穩定性

根據上述檢測結果，按照超過限量標準判定為陽性的原則，3種不同產品批次在各關鍵控制點的測定結果可見檢測對比正確、穩定。

2.5 快捷性

以上的檢測過程中，每次快檢檢測時間都在15 min以內，測定結果快速、穩定。

3 結論

本研究通過采用自主研發的黃曲霉毒素B1膠體金快速測試卡，同時結合精密儀器、精密試紙等的精確定量檢測，強化集成創新，研發快速檢測和非定向篩查技術及產品，有效開展產品生產過程中關鍵控制點的黃曲霉毒素B1（真菌毒素）的檢測和監控的驗證，為糧油食品生產安全的檢測提供精確裝備，建立高效質量監控體系，驗證可以取代傳統檢測方法確保食品生產過程的質量。黃曲霉毒素B1膠體金快速測試卡，具有快速測定和操作簡單的優點，在生產過程中能大大地提高檢測效率，可快速有效開展生產過程及產品中黃曲霉毒素B1的檢測和監控，確保食品生產過程質量安全，具有重要的經濟價值和社會價值。