結核感染T細胞斑點試驗聯合結核分枝桿菌RNA恒溫擴增實時檢測技術在痰涂陰性肺結核診斷中的應用價值

李倫，張智輝

(平頂山市第一人民醫院 a.醫學檢驗科；b.呼吸內科，河南 平頂山 467000)

有研究顯示，全球每年約有600萬新增結核病患者，我國結核病形勢亦十分嚴峻[1-2]?；颊咴缙诙啾憩F為消瘦、乏力、低熱，目前臨床以細菌學檢查為“金標準”，但對于部分少痰或者無痰者，會出現漏診。結核感染T細胞斑點試驗(T cell spot test in tuberculosis infection，T-SPOT.TB)是通過刺激外周血單核細胞中特異性活化T淋巴細胞分泌γ干擾素，并檢測效應T細胞數量進行結核桿菌診斷。T-SPOT.TB受非結核分枝桿菌感染、卡介苗接種影響較小，但在活動性結核病患者中的診斷價值有限。結核分枝桿菌RNA恒溫擴增實時檢測技術(simultaneous amplification and testing method for mycobacterium tuberculosis，sAT-TB)是將結核分枝桿菌特異性16S rRNA作為靶目標，通過恒溫RNA擴增技術擴增靶標片段，熒光標記的探針與靶標片段的擴增產物雜交后釋放熒光信號，快速、準確進行診斷，根據判讀結果判斷待檢樣本中是否含有結核分枝桿菌。臨床研究發現，該技術在痰涂片陽性標本的肺結核患者中診斷靈敏度較高，但仍會出現誤診[3-4]。本研究選取806例痰涂陰性肺結核患者為研究對象，比較T-SPOT.TB、sAT-TB單獨檢測與聯合檢測在診斷痰涂陰性肺結核中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年6月至2019年12月平頂山市第一人民醫院收治的806例痰涂陰性肺結核患者為觀察組，男451例，女355例；年齡26～59歲，平均(42.63±7.34)歲；體質量指數(body mass index, BMI)17～26 kg·m-2，平均(21.79±2.03)kg·m-2。選取同期疑似肺結核患者100例為對照組，男56例，女44例；年齡25～58歲，平均(44.01±6.98)歲；BMI 17～27 kg·m-2，平均(22.01±1.98)kg·m-2。本研究經平頂山市第一人民醫院醫學倫理委員會審核通過。兩組患者性別、年齡、BMI比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 選取標準(1)納入標準：①觀察組經實驗室細菌學、組織學、影像學、臨床表現等檢查確診為痰涂陰性肺結核；②對照組存在肺部異常陰影，疑似肺結核，但經實驗室細菌學、組織學、影像學、臨床表現等檢查排除肺結核；③涂片抗酸染色連續3次呈陰性。(2)排除標準：①嚴重病毒感染史；②肝、腎功能障礙；③臨床資料不完整。

1.3 檢測方法兩組均接受T-SPOT.TB、sAT-TB檢測。(1)T-SPOT.TB檢測：取晨起7:30至8:30外周靜脈血5 mL，對外周血單個核細胞進行分離處理，采用上海仁度生物技術有限公司提供的相關試劑盒進行檢測，加入結核特異性抗原早期分泌靶向抗原和培養濾過蛋白作為刺激原，統計斑點數，定量分析淋巴細胞數量。陽性標準：①空白對照孔內斑點數目小于6個，但其他任何試驗孔內斑點數目減去空白對照孔內斑點數目后仍≥6個；②空白對照孔斑點數目>6個，但其他任何試驗孔內斑點數目是空白孔斑點數目的2倍以上。(2)sAT-TB檢測：采用結核分枝桿菌核酸檢測RNA恒溫擴增儀、試劑盒檢測。陽性標準：①dt≤35為陽性；②35

1.4 觀察指標(1)T-SPOT.TB、sAT-TB檢測單獨與聯合診斷痰涂陰性肺結核的診斷結果。(2)T-SPOT.TB、sAT-TB檢測單獨與聯合診斷的診斷效能。

1.5 統計學方法采用SPSS 22.0統計軟件處理數據，計數資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 診斷結果T-SPOT.TB診斷真陽性733例，真陰性57例，漏診73例，誤診43例；sAT-TB診斷真陽性540例，真陰性88例，漏診266例，誤診12例；聯合診斷真陽性799例，真陰性56例，漏診7例，誤診44例。見表1。

表1 診斷結果(n)

2.2 診斷效能聯合診斷痰涂陰性肺結核準確度、靈敏度、陰性預測值高于T-SPOT.TB、sAT-TB單獨診斷，漏診率低于T-SPOT.TB、sAT-TB單獨診斷，差異有統計學意義(P<0.05)；聯合診斷特異度、陽性預測值低于sAT-TB單獨診斷，誤診率高于sAT-TB單獨診斷，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 診斷效能比較[%(n)]

3 討論

影像學為目前臨床診斷痰涂陰性肺結核最常用的手段，但難以與其他肺部疾病區分，而涂片鏡檢法診斷靈敏度低。因而，尋找快速、準確的診斷方法已成為臨床工作重點。

經抗原提呈細胞處理后的結核分枝桿菌可活化、增殖T淋巴細胞，變為致敏淋巴細胞，若再次接觸結核分枝桿菌，會大量釋放細胞因子，發揮抗炎作用。免疫應答的強度不僅與機體免疫狀態相關，還與結核分枝桿菌數量密切相關[5-7]。T-SPOT.TB 試驗檢測特殊抗原刺激后產生IFN-γ T細胞數量，而IFN-γ與抗原數量、疾病活動狀態有關，肺結核患者經抗結核治療后，結核分枝桿菌的數量下降，細胞免疫應答強度隨之下降，受到抗原活化后產生IFN-γ T細胞數量減少，故T-SPOT.TB試驗會導致假陰性，誤診率較高，故需與其他診斷方案聯合使用，以提高診斷價值[8-9]。

sAT-TB以RNA恒溫擴增技術、實時熒光檢測技術為基礎，具有檢測速率快、靈敏度高等優點。王靜等[10]指出，sAT-TB可區分死菌和活菌，診斷痰涂陰性肺結核ROC曲線下面積達0.670，能避免假陽性、臨床判斷不準確等問題，在結核病篩查中具有重要價值。本研究發現sAT-TB診斷痰涂陰性肺結核，特異性高達88.00%，能有效降低誤診率。此外，RNA易降解，能有效避免污染問題。本研究結果顯示，聯合診斷痰涂陰性肺結核準確度、靈敏度、陰性預測值高于T-SPOT.TB、sAT-TB單獨診斷，漏診率低于T-SPOT.TB、sAT-TB單獨診斷，提示T-SPOT.TB、sAT-TB聯合能有效提高痰涂陰性肺結核準確度、靈敏度、陰性預測值，主要與二者的診斷原理不同有關，T-SPOT.TB具有較高靈敏度，而sAT-TB特異度較高，聯合診斷能充分發揮二者優勢，提高診斷價值，減少漏診，但聯合診斷特異度、陽性預測值低于sAT-TB單獨診斷，必要時需實施細菌培養，以降低誤診風險。

綜上所述，T-SPOT.TB、sAT-TB聯合能有效提高痰涂陰性肺結核診斷的準確度、靈敏度、陰性預測值，降低漏診率，但特異性較低，必要時需實施細菌培養，以降低誤診風險，可為臨床診斷及制定治療方案提供影像學依據。