酶聯免疫吸附試驗在急診艾滋病病毒抗體初篩中的應用價值

李愛紅

(林州市疾病預防控制中心 檢驗科，河南 安陽 456550)

艾滋病是臨床常見傳染性疾病，其主要傳播方式為性傳播，相關數據顯示，經性傳播途徑感染的艾滋病患者達98%，其中70%為男男同性傳播[1]。艾滋病在全球范圍內均有較高發病率，病死率較高，是16～60歲人群的主要致死疾病，是嚴重社會公共衛生安全問題。臨床尚缺乏艾滋病有效治療方案，及早確診并抑制疾病進展、預防控制傳播是主要限制方法。艾滋病病毒(human immunodeficiency virus，HIV)抗體檢測是判斷患者是否感染的主要依據，酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、膠體硒免疫層析法(immunochromatography assay，ICA)、明膠顆粒聚集試驗(gelatin particles agglutina，PA)均為臨床常用檢測方式，但何種方法對急診HIV抗體初篩診斷效果更好，仍需進一步數據證實。本研究選取疑似艾滋病患者，以分析ELISA法的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取林州市疾病預防控制中心2018年10月至2020年10月收治的107例急診疑似艾滋病患者為研究對象，男48例，女59例；年齡28～52歲，平均(40.17±5.44)歲。

1.2 選取標準(1)納入標準：①急診艾滋病病毒抗體初篩；②經疾病預防控制中心免疫印跡法檢測明確最終結果；③臨床資料完善。(2)排除標準：①合并其他血液系統疾病；②經抗HIV治療。

1.3 檢測方法

1.3.1采集血樣 抽取空腹靜脈血5 mL，離心(轉速 3 000 r·min-1，離心5 min)，取上清液置于-80℃待檢。

1.3.2ELISA法 選擇辣根過氧化物酶標記的充足HIV1+2抗原、HIV1+2包被的微孔板，根據說明書步驟采用ELISA法檢測HIV1+2抗體，試劑盒購自中山生物工程有限公司，生產批號為20060419。

1.3.3ICA法 根據免疫層析原理對血樣HIV1+2抗體進行定性，若血樣內含有HIV1+2抗體，則硒膠體-抗原將與HIV1+2抗體結合，試劑盒購自美國雅培公司，生產批號為42903U100。

1.3.4PA法 重組HIV1、HIV2抗原包被于人工載體明膠粒子，與抗體發生凝集反應，試劑盒購自日本伯樂富士瑞必歐株會社，生產批號為M260302。

1.4 觀察指標(1)ELISA法、ICA法、PA法檢測結果。(2)ELISA法、ICA法、PA法診斷效能，包括準確度、靈敏度、特異度、漏診率、誤診率。準確度為真陽性與真陰性例數之和與總例數之比；靈敏度為真陽性例數除以真陽性和假陰性例數之和；特異度為真陰性例數除以假陽性與真陰性例數之和；漏診率為假陰性例數除以真陽性與假陰性例數之和；誤診率為假陽性例數除以假陽性與真陰性例數之和。

2 結果

2.1 ELISA法、ICA法、PA法檢測結果以疾病預防控制中心免疫印跡法檢測結果為金標準，107例疑似急診艾滋病患者檢出陽性63例，陰性44例。ELISA法檢出陽性63例，陰性44例；ICA法檢出陽性59例，陰性48例；PA法檢出陽性58例，陰性49例。

2.2 ELISA法、ICA法、PA法診斷效能比較ELISA法、ICA法、PA法診斷急診艾滋病準確度、靈敏度、特異度、漏診率、誤診率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，且ELISA法診斷準確度、靈敏度、特異度最高，漏診率、誤診率最低。見表1。

表1 ELISA法、ICA法、PA法診斷效能比較[%(n/N)]

3 討論

自1981年發現艾滋病病毒，其在全球迅速蔓延，在特定人群及局部地區呈現高流行趨勢，如何有效預防、控制艾滋病傳播是醫療部門的研究重點。早期診斷是臨床防控的有效措施，既便于控制患者自身疾病進展，又能防止傳染他人。與其他病原微生物檢測相比，HIV檢測要求嚴格，任何細小的差別均可能對受檢者造成嚴重影響，因此臨床要求HIV檢測具有較高特異度及靈敏度。2004年衛生部門規定HIV檢測需分為初篩、復檢兩個步驟，其中復檢采用的免疫印跡法，為HIV抗體檢測金標準方案，準確率極高，但其局限性在于費用高昂、操作復雜，難以適用于臨床廣泛性篩查。為進一步減少檢測人員工作量、降低經濟支出，臨床要求HIV抗體初篩應盡可能準確。因此，選擇準確率較高的HIV抗體初篩方法具有重要意義。

ELISA法、ICA法、PA法均為HIV抗體初篩常用檢測方式。ICA法可對血樣中HIV抗體進行定性，若血樣中含有HIV抗體，則抗體與硒膠體-抗原相結合，在被固相包被的合成肽、重組抗原捕捉固定，形成紅線，從而明確診斷結果[2]。相關研究指出，ICA法用于HIV抗體檢測具有較高價值，對提高HIV陽性篩查檢出率有積極作用，可作為HIV感染診斷及風險評估的參考[3]。本研究中ICA法檢測存在數例漏診、誤診情況，其原因可能與抗原抗體效價、層析材料及滲透膜質量、試劑條保存情況等多種因素有關。明膠顆粒對HIV抗原具有致敏作用，而PA法以明膠顆粒為載體，與待檢血清混勻后，利用抗原抗體特異性結合原理產生明膠-抗原抗體復合物，產生凝集效應[4]。相關研究證實，PA法可輔助HIV抗體診斷，尤其對老年人、不孕育齡女性有重要價值，有助于提高檢測結果特異性[5]。ELISA法是一般抗體檢測較為簡單的常用方法，應用于HIV抗體檢測具有較高特異度、敏感度，臨床應用廣泛。目前國內實驗室常用ELISA法HIV檢測試劑盒為第4代試劑盒，與第1代、第2代、第3代相比特異度、敏感度明顯提高，且可同時檢測HIV p24抗體及抗原，與第3代相比可明顯縮短檢測窗口期，對HIV早期感染確診有重要價值[6]。相關報道證實，ELISA法檢測HIV抗體對高、低值質控血清檢出率均較高，顯示陽性樣本帶型分布，與常規膠體層析法相比尤其適用于急診艾滋病病毒抗體篩查[7]。ELISA法將HIV抗原包被于固相載體，加入酶標HIV抗原通過底物顯色，同時可采用酶催化底物反應產生放大作用，進而提高抗體反應靈敏度[8]。ELISA法檢測具有較高穩定性，幾乎不受溶血、脂血影響，室溫下即可操作，無需特殊設備，一次可見檢測多個樣本，適用于臨床廣泛性篩查。本研究結果顯示，ELISA法、ICA法、PA法診斷急診艾滋病準確度、靈敏度、特異度、漏診率、誤診率比較，差異有統計學意義，且ELISA法診斷準確度、靈敏度、特異度最高，漏診率、誤診率最低，提示ELISA法應用于HIV抗體檢測具有較高診斷價值。另外，本研究中ELISA法檢測發現假陽性、假陰性各1例，這可能與環境、人為因素、試驗時間長、類風濕因子等多種因素有關。因此，臨床在通過ELISA法進行檢測時，應注意加強質量控制，選擇靈敏度、特異度較高的試劑進行檢測，降低漏診、誤診風險，對檢測結果不明確的樣本，可結合ICA法、PA法診斷結果或采用不同試劑再次檢測，以提高診斷準確率。

綜上所述，ELISA法應用于急診艾滋病病毒抗體初篩具有較高臨床價值，可提高檢測準確度、靈敏度、特異度，降低漏診率、誤診率，可作為急診艾滋病病毒抗體初篩的首選方案。