臍帶血血常規及網織紅細胞相關參數在α-珠蛋白生成障礙性貧血中的診斷價值研究*

莫超越，楊珍琳，鄺俊健

廣西壯族自治區梧州市中醫醫院：1.檢驗科；2興龍社區衛生服務中心；3臨床藥學部，廣西梧州 543002

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)是我國廣西、廣東、云南等地的高發病[1]，又稱為海洋性貧血，可分為α-地貧和β-地貧，目前該疾病除輸血及骨髓移植外，尚無其他理想的治療方案。因此，在高發地區進行產前篩查及基因診斷是防止出現重型地貧的有效手段。當前由于國內醫療資源分布的不均一性，以及其他經濟等原因，地貧的基因診斷未能全部展開，對于一些靜止型及標準型的患者，由于沒有癥狀或癥狀較輕，容易被忽略而不做產前篩查，加大了地貧的發生率。有α-地貧基因的新生兒臍帶血經電泳后可出現特征性的血紅蛋白(Hb)Bart′s帶，可根據其濃度分為靜止型、標準型、中型、重型α-地貧，Hb Bart′s帶一般在出生3～6個月后消失。近年來，成年人血常規及網織紅細胞相關參數對地貧診斷的研究已有報道，但臍帶血相關參數的研究相對較少。本研究旨在通過臍帶血的血常規及網織紅細胞相關參數對α-地貧進行診療探討，并分析其診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年8月至2019年12月在本院出生的新生兒729例作為研究對象，選取臍帶血電泳出現Hb Bart′s帶的105例α-地貧新生兒作為電泳異常組，無Hb Bart′s帶的624例新生兒作為電泳正常組，其中217例Hb<145 g/L新生兒作為電泳正常貧血組，407例Hb≥145 g/L新生兒作為電泳正常對照組。

1.2診斷標準 新生兒貧血標準：Hb<145 g/L[2]；新生兒臍帶血診斷正常參考為：無異常Hb區帶，出現Hb Bart′s帶者可臨床診斷為α-地貧[3]。根據新生兒臍帶血Hb Bart′s濃度對α-地貧進行分型：Hb Bart′s<3%為靜止型；Hb Bart′s為3%～20%為標準型；Hb Bart′s>20%～40%為中型(HbH)；Hb Bart′s>80%為Hb Bart′s胎兒水腫綜合征[4]。

1.3儀器與試劑 血常規及網織紅細胞采用日本Sysmex公司XT-4000i全自動血細胞分析儀及其原裝配套試劑檢測。Hb電泳采用美國海倫娜SPIFE3000電泳儀及其配套耗材檢測。嚴格按上述儀器的操作技術規范執行。

1.4方法 采用乙二胺四乙酸二鉀真空采血管采集新生兒臍帶血，采用XT-4000i全自動血細胞分析儀進行血常規及網織紅細胞計數分析，取上述抗凝臍帶血經處理后采用美國海倫娜SPIFE3000電泳儀進行Hb電泳檢測。檢測指標包括Hb、紅細胞計數(RBC)、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、網織紅細胞百分比(RET%)、網織紅細胞絕對值(RET#)、未成熟網織紅細胞指數(IRF)、低熒光強度網織紅細胞(LFR)、中熒光強度網織紅細胞(MFR)、高熒光強度網織紅細胞(HFR)、網織紅細胞血紅蛋白含量(Ret-He)、Hb Bart′s。

2 結 果

2.1電泳異常組與電泳正常組血常規和網織紅細胞相關參數比較 電泳異常組Hb、MCV、MCH、MCHC、MFR、Ret-He均低于電泳正常組，而RBC、HFR均高于電泳正常組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 電泳異常組與電泳正常組血常規和網織紅細胞相關參數比較

組別nRET%RET#LFRMFRHFRRet-He(pg)電泳異常組1054.73±2.20220.5±78.177.1±5.117.2±2.95.7±3.124.1±3.0電泳正常組6244.58±1.40198.5±53.577.8±5.717.8±3.44.4±3.230.4±2.4t0.6922.775-1.192-1.9824.117-20.140P0.4900.0600.2340.0480.0010.001

2.2電泳異常組與電泳正常貧血組、電泳正常對照組相關參數比較 電泳異常組MCV、MCH、MCHC、 Ret-He均低于電泳正常貧血組，而RBC、RET#、HFR則均高于電泳正常貧血組，差異均有統計學意義(P<0.05)；電泳異常組Hb、MCV、MCH、MCHC、 Ret-He均低于電泳正常對照組，而RBC、RET#、HFR則均高于電泳正常對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；電泳正常貧血組RBC、Hb、RET#均低于電泳正常對照組，而RET%則高于電泳正常對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 電泳異常組與電泳正常貧血組、電泳正常對照組血常規及網織紅細胞相關參數比較

注：與電泳異常組比較，*P<0.05;與電泳正常貧血組比較，#P<0.05。

2.3電泳異常組不同類型α-地貧新生兒血常規及網織紅細胞相關參數比較 標準型MCV、MCH、MCHC、RET%、RET#、MFR、Ret-He均低于靜止型，差異均有統計學意義(P<0.05)，而RBC、LFR則高于靜止型，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 電泳異常組不同類型α-地貧新生兒血常規及網織紅細胞相關參數比較

注：由于中間型僅1例，t、P值為靜止型與標準型比較的值。

2.4血常規及網織紅細胞相關參數診斷α-地貧的診斷效能分析

2.4.1電泳異常組與電泳正常組ROC曲線分析 MCH、MCV 、Ret-He的ROC曲線下面積(AUC)達0.950、0.930、0.936，RBC、Hb、MCHC、RET%、RET#、IRF、LFR、MFR、HFR的AUC分別為0.271、0.768、0.864、0.528、0.418、0.455、0.545、0.566、0.365，均低于0.900。經分析上述AUC大于0.900的參數的約登指數取值，MCH的cut off值為31.45 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.848，特異度為0.942；MCV的cut off值為96.80 fL時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.810，特異度為0.958；Ret-He的cut off值為28.05 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.876，特異度為0.888。見圖1、表4。

圖1 電泳異常組與電泳正常組相關參數的ROC曲線

表4 電泳異常組及電泳正常組的MCV、MCH、Ret-He診斷α-地貧的AUC、cut off值、靈敏度和特異度

2.4.2電泳異常組與電泳正常貧血組ROC曲線分析 MCH、MCV、Ret-He的AUC達0.950、0.929、0.923，RBC、Hb、MCHC、RET%、RET#、IRF、LFR、MFR、HFR的AUC分別為：0.096、0.482、0.863、0.580、0.377、0.454、0.547、0.551、0.376。經分析上述AUC大于0.900的參數的約登指數的取值，MCH的cut off值為31.65 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.857，特異度為0.935；MCV的cut off值為96.90 fL時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.81，特異度為0.959；Ret-He的cut off值為28.65 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.914，特異度為0.843。見圖2、表5。

圖2 電泳異常組與電泳正常貧血組相關參數的ROC曲線

表5 電泳異常組與電泳正常貧血組MCV、MCH、Ret-He 診斷α-地貧的AUC、cut off值、靈敏度和特異度

2.4.3電泳異常組與電泳正常對照組的ROC曲線分析 MCH、MCV、Ret-He的AUC分別為0.951、0.931、0.943，RBC、Hb、MCHC、RET%、RTE#、IRF、LFR、MFR、HFR的AUC分別為0.364、0.920、0.864、0.501、0.440、0.456、0.544、0.574、0.358。經分析上述AUC大于0.900的參數的約登指數的取值，MCH的cut off值為31.45 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.943，特異度為0.848；MCV的cut off值為96.80 fL時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.958，特異度為0.81；Ret-He的cut off值為27.95 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.909，特異度為0.867。見圖3、表6。

圖3 電泳異常組與電泳正常對照組相關參數的ROC曲線

表6 電泳異常組與電泳正常對照組MCV、MCH、Ret-He診斷α-地貧的AUC、cut off值、靈敏度和特異度

2.4.4MCH、MCV、Ret-He聯合檢測診斷α-地貧的效能分析 采用多元Logistic回歸方程計算再進行ROC曲線分析，MCH、MCV、Ret-He聯合檢測預測α-地貧的AUC達0.954，比單項[MCV、MCH、Ret-He的AUC分別為0.929、0.950、0.936]均有所提升。見圖4。

圖4 MCH、MCV、Ret-He聯合檢測診斷α-地貧的ROC曲線

3 討 論

地貧是由于珠蛋白基因的缺失或突變使Hb中的珠蛋白肽鏈生成障礙，表現為珠蛋白肽鏈的一種或幾種合成減少或不能合成，導致Hb不穩定，從而使紅細胞容易被破壞的一組小細胞低色素溶血性貧血，是一組常染色體隱性遺傳性疾病[5]。由于地貧基因突變或缺失的多樣性，臨床上可表現為無臨床癥狀或輕度到重度貧血[6]。當前，基因分析是地貧臨床診斷的金標準，但其實驗操作煩瑣費時，且要求有專業的操作技術人員，所以在基層醫院難以廣泛推廣。對于相對簡單的Hb電泳，因人員配置原因，在基層醫院特別是鄉鎮衛生院同樣也難以開展。對于一些血紅蛋白濃度正常的地貧患者，尚無一種較合理且易獲得的指標提示其已罹患地貧，故婚育檢查時常會漏掉對這部分人的監測，造成重型地貧患兒出生率加大的風險。

Hb Bart′s是新生兒臍帶血中特殊的Hb，是國際公認篩查新生兒α-地貧簡單且準確的檢測指標[7]。有研究顯示，臍帶血可作為新生兒篩查α-地貧的有效依據[7]。電泳篩查與基因診斷的符合率達89.95%，而彭蘭芬等[8]的研究結果顯示其符合率高達94.60%。黃玲芳[9]認為，不同Hb Bart′s帶濃度高低影響到其與基因診斷的符合率，Hb Bart′s帶濃度為1%～2%時其符合率只有50.00%，而濃度大于3%時符合率達到100.00%。由此可以認為，Hb Bart′s帶濃度越大，地貧陽性預測值越大，其罹患α-地貧的可信度就越高[10]。本研究應用電泳方法分析Hb Bart′s帶濃度判斷新生兒為α-地貧患兒的方式比較符合目前中國廣大農村地區及基層衛生單位，有現實意義。

當前血常規的一些參數是篩查成人地貧的有效指標[11]，MCH及MCV是2項首選指標，也符合地貧作為小細胞低色素疾病的一個血液學表象，應用成人靜脈血網織紅細胞相關參數篩查地貧也有報道[12-13]，但采用新生兒臍帶血方面的研究相對較少。成人的指標是否適合新生兒地貧的篩查，不同地區的指標是否有相同的取值，都要通過研究予以確認。ROC曲線是以靈敏度作為縱坐標，1-特異度作為橫坐標的曲線圖，診斷指標準確性越大，其AUC越大。一般認為AUC為0.5～0.7時，表示診斷價值較低，>0.7～0.9時表示診斷價值中等，0.9以上時表示其診斷價值較高[14]。若想提高靈敏度，也會提高假陽性率，若要提高特異度，漏檢率也隨之升高，所以cut off值是以約登指數最大的原則取得的靈敏度和特異度作為診斷指標最合適的取值[14]。本研究對729例新生兒臍帶血通過電泳和血液學指標測定，經統計分析，MCH、MCV、Ret-He在診斷α-地貧時的AUC達0.950、0.930、0.936，而其他指標均小于0.900，經分析其約登指數的取值，MCH的cut off值為31.45 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.848，特異度為0.942；MCV的cut off值為96.80 fL時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.810，特異度為0.958；Ret-He的cut off值為28.05 pg時，其診斷α-地貧的靈敏度為0.876，特異度為0.888，具有很高的診斷價值。林慶芳等[15]研究認為，臍帶血MCV對新生兒α-地貧有較好的診斷價值，其cut off值為98.30 fL，與本研究結果相近。

網織紅細胞是未成熟的紅細胞，已有相關研究表明，成年人的網織紅細胞參數對于地貧的診斷可提供參考，但少見新生兒臍帶血網織紅細胞相關參數對于協助診斷地貧是否有臨床意義[16]。本研究發現，新生兒臍帶血網織紅細胞常規參數對診斷α-地貧的價值不大。有研究認為，無論新生兒有無貧血，造血功能也處于增生旺盛狀態，會有大量未完全成熟紅細胞進入血液中，且新生兒臍帶血中有極高水平的促紅細胞生成素，遠遠高于健康人群[16]，所以常規參數沒有較大的參考價值，但新參數Ret-He對地貧的診斷價值較高。本研究發現，電泳正常貧血組MCV和Ret-He與電泳正常對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。在電泳異常的α-地貧組細分中，MCV水平越低，Ret-He也有相應低的取值，且特異度較高。從原始幼稚紅細胞發育至網織紅細胞后，紅細胞內Hb合成就會停止，其濃度在之后整個紅細胞生命周期中都會比較穩定[17-18]。在各種病理情況下，若骨髓生成的紅細胞表現為低色素紅細胞時，其前身的網織紅細胞也表現為低色素性[19]，所以Ret-He可以及時反映出骨髓生成紅細胞的狀態，且當機體處于炎癥狀態時仍不受影響，是一項很好的診斷指標。

綜上所述，臍帶血MCH、MCV和網織紅細胞新參數Ret-He對于協助診斷α-地貧有較高的應用價值，且準確、便捷、快速、經濟，可作為篩查新生兒α-地貧的有效指標，特別對于未開展地貧基因及電泳檢測的基層單位，應用上述指標能有效提高α-地貧的篩查診斷率，可以指導建立新生兒地貧檔案及成年后的婚育咨詢，對提高人口健康素質有極其重要的意義，應在臨床上推廣應用。