針刺對慢性骨骼肌損傷模型大鼠血清LDH的影響

馬曉麗，張曉陶，楊 樺,3*

(1.寧夏醫科大學 中醫學院，寧夏 銀川 750004； 2.寧夏自治區第三人民醫院，寧夏 銀川 750021； 3.寧夏醫科大學 回醫藥現代化教育部重點實驗室，寧夏 銀川 750004)

慢性軟組織損傷是臨床常見病之一，是骨骼肌、筋膜韌帶、關節囊、骨膜以及脂肪等運動系統軟組織損害性病變的簡稱，其中以骨骼肌損傷最為常見，其病理基礎主要為損傷引起的慢性無菌性炎癥，引起肌痙攣、肌萎縮、瘢痕形成和粘連，導致局部血液循環障礙、組織缺血缺氧而產生疼痛[1]。目前，針對慢性骨骼肌損傷的認識及其機制研究已經成熟，但是在治療方面仍需進一步研究。現常見治療方法西醫有口服非甾體類抗炎藥物、手術治療等；中醫有內熱針治療、中藥口服、針刺治療、推拿治療及刮痧治療等。長期服用非甾體類抗炎藥物可帶來胃腸道損傷等副作用[1]；手術治療風險高且價格昂貴；內熱針治療術后會出現局部腫脹疼痛無力。中藥治療對急性軟組織損傷更有效，比較之下，針刺治療、推拿治療及刮痧治療優點顯著，其安全無副作用、操作方便、費用低且效果佳。故本研究通過研究針刺、推拿及刮痧3種方法對慢性骨骼肌損傷模型大鼠血清LDH活性的作用及影響，以明確針刺、推拿及刮痧在慢性骨骼肌損傷中的治療效果，現報道如下。

1 材料與試劑

1.1 實驗動物

健康雄性SD大鼠59只，鼠齡4～6周，體質量200～220 g，由寧夏醫科大學實驗動物中心提供(許可證號：SCXX(寧)2015-0001)。

1.2 針具

華佗牌一次性無菌針灸針，規格:0.30 mm×13 mm (蘇州醫療器械公司)。

1.3 儀器及主要試劑

TD5KR型高速離心機(長沙東旺實驗儀器有限公司)；CKX31顯微鏡(OLYMPUS Corporation，日本)；LDH檢測試劑盒(武漢基因美生物科技有限公司)； 五車道跑步機LE8710RTS(東樂自然基因生命科學有限公司)。

2 方法

2.1 動物分組

從59只大鼠中隨機抽出6只作為空白對照組，剩余53只大鼠為實驗組，對實驗組大鼠進行慢性骨骼肌損傷模型制備，造模結束后，從空白對照組和實驗組中各隨機抽出3只以檢測造模是否成功，然后將剩余50只實驗組大鼠隨機分為模型對照組、自然恢復組、刮痧組、推拿組及針刺組，每組10只。

2.2 慢性骨骼肌損傷模型制備與評價

選用經典大鼠下坡跑離心收縮模型誘導動物的慢性骨骼肌損傷模型。該模型由Armstrong[2]設計建立，以鼠類動物跑臺為實驗儀器，跑臺坡度為-16°，速度為18 m/min，持續時間為90 min以上。本實驗動物模型制備在Armstrong模型方案的基礎上延長運動時間，使運動大鼠每日運動時間達到150 min，運動時間為28天，以更好地誘導動物慢性骨骼肌損傷模型的形成。運動過程中可使用聲、光或毛刷刺激大鼠尾部，使動物始終保持在跑臺跑道的前1/3處，以保證跑臺上大鼠的運動強度。運動結束后，將動物放回籠內休養。

慢性骨骼肌損傷模型的評價采用HE染色法，觀察空白對照組和實驗組骨骼肌(股外側肌)組織病理變化，并用ELISA法檢測血清中LDH活性，以判斷造模是否成功。于造模結束后隨機抽取實驗組及空白對照組大鼠各3只，麻醉后取其股外側肌及心臟血后處死。對其股外側肌做HE染色觀察組織病理，經20倍光學顯微鏡觀察成片后結果如圖1、圖2所示：實驗組大鼠股外側肌肌纖維斷裂，組織水腫，炎細胞浸潤、纖維組織增生明顯且細胞界限不清；空白對照組肌纖維排列整齊，細胞界限清楚，無組織水腫及炎細胞浸潤，有少量纖維組織增生。

圖1 實驗組股外側肌組織病理(HE染色，×20)

圖2 空白對照組股外側肌組織病理(HE染色，×20)

采用ELISA法檢測其心臟血血清中LDH的活性變化，結果空白對照組LDH活性為(73.757±7.643)，實驗組為(136.149±3.959)，經統計學分析，實驗組和空白對照組比較，血清中LDH活性差異有統計學意義(P<0.05)。HE染色結果及血清中LDH 活性變化分析均說明實驗組大鼠慢性骨骼肌損傷模型已建立成功。

2.3 治療方法

2.4 取材及指標檢測

所有大鼠予以10%水合氯醛腹腔內注射麻醉后進行胸腔穿刺心臟取血5 mL，置于離心管內，靜置30 min后以3 000 r/min離心10 min，取上層血清，置于-80 ℃超低溫冰箱保存，以進行血清LDH活性檢測，然后將大鼠處死。血清LDH活性檢測采用ELISA法進行。

2.5 統計學方法

3 結果

3.1 固定對大鼠血清中LDH活性的影響

首先對空白對照組固定與未固定大鼠血清中LDH活性變化進行統計分析(未固定數據來自判斷造模是否成功時所取)，以觀察固定是否會對實驗結果產生影響。結果空白對照組大鼠固定與未固定其血清中LDH活性分別為：(66.279±4.295)、(67.408±5.130)，差異無統計學意義(P>0.05)，說明固定對大鼠血清中LDH的活性無影響。

3.2 干預后各組大鼠血清中LDH活性變化

干預后，針刺組、推拿組及刮痧組大鼠血清中LDH活性下降顯著，均明顯低于模型對照組(P<0.05)；且與自然恢復組比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。其中針刺組與刮痧組和推拿組比較，差異具有統計學意義(P<0.05)，而刮痧組與推拿組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結果提示：針刺、刮痧及推拿均可降低慢性骨骼肌損傷模型大鼠血清中LDH活性，其中針刺影響最明顯。見表1。

表1 干預后各組大鼠血清中LDH活性變化

3 討論

慢性軟組織損傷疾病是以骨骼肌、筋膜、韌帶、關節囊、脂肪等軟組織附著點產生的無菌性炎癥為病理基礎的臨床常見病[4]，其中以骨骼肌損傷最為多見，屬中醫學“傷筋”范疇。

軟組織外科學觀點認為，無菌性炎癥是慢性軟組織損傷的病理特點, 也是產生疼痛的主要原因[5]，研究表明針刺對炎癥介質存在著雙向良性調節作用，能提高抗炎細胞因子水平，也能抑制致炎細胞因子的合成，減少炎癥反應[6]。

中醫認為可從氣血、臟腑、經絡三方面討論慢性軟組織損傷的病機，但無論是臟腑失和還是經絡阻塞，歸根結底都是因為氣血運行紊亂以致氣滯血瘀而出現疼痛[7]，故活血化瘀、減輕疼痛為傷筋的主要治則。足三里穴又名下陵、三里，歸屬于足陽明胃經，位于小腿外側，犢鼻下3寸，犢鼻與解溪連線上，氣血多行于此穴，具有提升正氣、疏經通絡、調氣血、補虛弱等諸多功效，《靈樞·九針十二原》對五輸穴經氣流注特點概括為：“所出為井、所溜為滎、所注為輸、所行為經，所入為合”，其中合穴經氣充盛且入合于臟腑。足三里穴為足陽明胃經之合穴，是足陽明脈氣充盛所入之穴，足三里同時是胃的下合穴，“合治內腑”，說明足三里穴有良好的健運脾胃的功效，能夠促進脾胃受納水谷，同時營養周身經筋，促進損傷修復[8]。刺激足三里能明顯改善血液的高黏滯性，降低紅細胞聚集指數，使紅細胞由聚集狀態成為相對分散狀態，說明針刺足三里能降低血液黏稠度、減少循環阻力、加快血流速度，從而起到活血化瘀的作用[9]。刺激足三里穴位所產生的鎮痛效應可被阿片樣受體特異阻斷劑納洛酮所逆轉，提示針刺足三里穴可激活內源性鎮痛系統，促使內源性嗎啡樣物質釋放而產生鎮痛效應[10]。環跳穴又名髀樞、樞中，歸屬足少陽膽經，位于臀區，股骨大轉子最凸點與骶管裂孔連線的外1/3與內2/3交點處，具有疏經通絡、活血化瘀、止痛強筋的功效，是足少陽膽經和足太陽膀胱經的交會穴，足太陽經分布于腰、臀和下肢的整個后面，足少陽經分布于人身整個側身部，兩經之經筋結于踝、膝、腘、臀和骶部，在經脈病候上，足太陽“主筋所生病”，足少陽“主骨所生病”，說明兩經脈善治筋骨病。刺激環跳穴可改善血液流變學異常，消除患者血液的“粘、濃、凝、聚”傾向，從而起到行氣血、通經絡的作用[11]；針刺環跳穴也可使痛覺信息經傳入神經進入脊髓，經痛覺中樞及神經體液整合加工，使疼痛性質發生變化，同時釋放神經介質5-羥色胺、內源性雅片等起到鎮痛作用[12]。

本研究選取足三里、環跳二穴進行研究，發現針刺、推拿、刮痧均可降低大鼠血清LDH活性，說明針刺、推拿、刮痧治療慢性骨骼肌損傷均有療效，其中針刺影響最明顯。本研究結果可供臨床醫師參考。