參芪化瘀方對肝癌患者血清microRNA-139和循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平的影響研究

付嘯峰，謝壁元

(廣東省第二中醫(yī)院 腫瘤科，廣東 廣州 510095)

肝癌是中國三大常見惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人們生命健康。近年來，隨著臨床治療手段進(jìn)步，肝癌患者生存率明顯提高，但由于受到術(shù)后復(fù)發(fā)及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等的影響，肝癌遠(yuǎn)期療效仍然不佳[1-2]。MicroRNA是一類由內(nèi)源基因編碼的非編碼單鏈RNA分子，是一種重要的腫瘤標(biāo)志物，其在血液中的表達(dá)水平與腫瘤的診斷及預(yù)后密切相關(guān)[3-4]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)是指實(shí)體瘤或轉(zhuǎn)移灶釋放進(jìn)入外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞，是惡性腫瘤患者出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要原因，在評估腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、預(yù)后等方面的具有重要應(yīng)用價(jià)值[5-6]。本研究探討參芪化瘀方對肝癌患者的療效及血清microRNA-139與CTCs水平的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年3月-2020年9月廣東省第二中醫(yī)院收治的80例原發(fā)性肝癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合原發(fā)性肝癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②肝癌根治手術(shù)術(shù)后患者；③預(yù)計(jì)生存期>6個(gè)月；④患者及其家屬均知情并簽署同意書，研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②全身性感染；③自身免疫疾??；④藥物過敏或不耐受；⑤已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；⑥妊娠婦女等。采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組和研究組各40例。對照組中男26例，女14例；年齡42～68歲，平均年齡(60.35±6.58)歲；病程1～8年，平均病程(4.31±1.62)年；TNM病理分期：Ⅱb期14例，Ⅲ期16例，Ⅳa期10例。研究組男25例，女15例；年齡41～70歲，平均年齡(59.68±6.26)歲；病程1～8年，平均病程(4.63±1.49)年；TNM病理分期：Ⅱb期13例，Ⅲ期18例，Ⅳa期9例。兩組患者的臨床資料比較具可比性(P>0.05)。

1.2 方法

對照組給予奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶及醛氫葉酸(FOLFOX4)方案進(jìn)行化療，奧沙利鉑(賽諾菲杭州制藥，批號：20180112)：劑量85 mg/m2，靜脈滴注2 h，d1；5-氟尿嘧啶(北京斯利安藥業(yè)，批號：20180225)：劑量500 mg/m2，靜脈滴注20 h，d1-2。醛氫葉酸(嶺南制藥，批號：20180225)：200 mg/m2，d1-2；4周為一個(gè)化療周期。此基礎(chǔ)上，研究組給予參芪化瘀方(丹參、黃芪各30 g，生牡蠣、莪術(shù)各20 g，蛇舌草、白術(shù)、丹皮各15 g，黨參12 g，炙甘草6 g，蜈蚣1條)治療，常規(guī)水煎至200 mL，分早、晚兩次口服，100 mL/次，1劑/d。兩組患者治療8周后觀察療效情況。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組治療前及治療4周、8周后中醫(yī)證候積分變化情況，其中主證按照0、2、4、6 分評定，次證按照 0～3分4級法評定，得分累加為中醫(yī)證候積分。治療前及治療8周后對兩組患者采用重氮鹽法檢測總膽紅素(TBIL)水平，采用酶偶聯(lián)法檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平，采用連續(xù)監(jiān)測法檢測堿性磷酸酶(ALP)水平。比較兩組治療前及治療4周、8周后血清microRNA-139和循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)水平變化，分別于患者治療前及治療4周、8周后采集患者靜脈血(晨起未進(jìn)食)3 mL，離心機(jī)離心(3 000 r/min)10 min，收集血清，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測microRNA-139表達(dá)水平，miRNA熒光定量檢測試劑盒及耗材由LLC 公司提供；采用免疫熒光染色-染色體熒光原位雜交技術(shù)檢測CTCs表達(dá)水平，相應(yīng)試劑與耗材由默沙克生物公司提供。

1.4 療效評價(jià)

參照《實(shí)體瘤治療療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)-RECIST》[8]，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)及進(jìn)展(PD)。CR：治療后病灶消失且持續(xù)時(shí)間>4周；PR：治療后病灶區(qū)縮小>30%，同時(shí)持續(xù)時(shí)間>4周；SD：病灶區(qū)縮小<30%，或增大<25%；PD：病灶區(qū)增大>25%，或出現(xiàn)新病灶或死亡。統(tǒng)計(jì)并比較兩組有效率：(CR+PR+SD)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者中醫(yī)證候積分變化情況

治療4周、8周后，兩組患者中醫(yī)證候積分下降，且研究組更明顯(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者中醫(yī)證候積分變化情況 分)

2.2 兩組患者臨床療效情況

研究組總有效率(92.50%)明顯高于對照組(77.50%)(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者臨床療效比較 [n(%)]

2.3 兩組患者肝功能比較

治療8周后，兩組患者TBIL、ALT、AST及ALP升高，研究組TBIL、ALT、AST及ALP低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 治療前后兩組患者肝功能比較

2.4 兩組患者治療前后血清microRNA-139、CTCs 水平變化

治療前，兩組患者血清microRNA-139、CTCs 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療4周、8周后，兩組患者血清microRNA-139均升高，CTCs均降低(P<0.05)；研究組治療4周、8周后血清microRNA-139高于對照組，CTCs低于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組患者治療前后血清microRNA-139、CTCs 水平比較

2.5 兩組患者臨床安全性情況

治療期間，兩組患者臨床不良反應(yīng)發(fā)生無明顯差異(P>0.05)。見表5。

表5 兩組患者治療期間不良反應(yīng)比較 [n(%)]

3 討論

肝癌是臨床常見惡性腫瘤，相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，中國每年新發(fā)肝癌患者達(dá)百萬人以上，近年來發(fā)病率及病死率均呈上升趨勢[9-10]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肝癌屬于“癥瘕”“肝積”等范疇，其病因多是由于機(jī)體正氣虛弱、臟腑功能失調(diào)以及長期受到邪氣侵襲，導(dǎo)致氣滯血瘀、聚痰蘊(yùn)毒互博而發(fā)病，其病機(jī)特點(diǎn)為本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜之證[11]。中醫(yī)講究辨證治療，故以補(bǔ)正祛邪、活血解毒、散結(jié)消癥為治法，可起到標(biāo)本兼治的作用[12]。

參芪化瘀方為治療原發(fā)性肝癌的經(jīng)驗(yàn)方，對原發(fā)性肝癌具有較好的療效，該方主要由黨參、丹參、黃芪、牡蠣及莪術(shù)等多味中草藥組成，其中，黨參、黃芪益氣補(bǔ)虛，丹參活血祛瘀、涼血消癰，莪術(shù)補(bǔ)脾益氣，牡蠣軟堅(jiān)散結(jié)，蛇舌草清熱解毒，蜈蚣祛毒散結(jié)，全方具有扶正祛邪、活血解毒、散結(jié)消癥的功效[13]。此外，從現(xiàn)代藥理學(xué)角度看，該方還具有提高機(jī)體免疫功能、抑制腫瘤細(xì)胞等作用[14]。本研究結(jié)果顯示，研究組治療后總有效率明顯高于對照組，與左江偉[15]相關(guān)報(bào)道結(jié)果一致。這提示，參芪化瘀方對于提高肝癌術(shù)后患者的臨床療效作用重要。

MicroRNA-139是MicroRNA譜中重要成員之一，可通過下調(diào)Rho激酶2 抑制腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展與轉(zhuǎn)移。研究[16-17]顯示，miRNA-139在肝癌患者體內(nèi)存在明顯下調(diào)表達(dá)的情況，且與多種惡性腫瘤病情進(jìn)展、預(yù)后及臨床特征等都存在相關(guān)性，為判斷惡性腫瘤患者腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要指標(biāo)。CTCs是外周血中的各類腫瘤細(xì)胞的總稱，CTCs多為實(shí)體腫瘤病灶脫落而進(jìn)入外周血中，多數(shù)CTCs可發(fā)生凋亡或被吞噬，少數(shù)可逃逸并發(fā)展成為轉(zhuǎn)移灶[18]。研究[19]表明，外周血CTCs是肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其水平表達(dá)的高低與肝癌癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散以及肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。彭磊等[20]發(fā)現(xiàn)，對于發(fā)生轉(zhuǎn)移的肝癌患者治療一定時(shí)間后，病情穩(wěn)定或好轉(zhuǎn)，外周血中CTCs明顯減少，而對于病情出現(xiàn)惡化的患者，CTCs水平顯著升高。本研究結(jié)果顯示，治療4周、8周后，研究組microRNA-139高于對照組，CTCs低于對照組。結(jié)果提示，參芪化瘀方可顯著改善肝癌患者外周血中microRNA-139、CTCs的表達(dá)，從而有利于患者預(yù)后。

綜上，參芪化瘀方可明顯改善肝癌患者血清中microRNA-139、CTCs的表達(dá)，臨床療效滿意，安全性高，可作為肝癌患者臨床重要輔助治療手段進(jìn)行推廣應(yīng)用。