張家界莓茶害蟲
——斜紋夜蛾

王逸才，袁思琦，洪艷云，鄧武成，胡維軍，李春萍，陳建芝，易圖永

（1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，湖南 長沙 410128；2. 張家界莓茶發(fā)展服務(wù)中心，湖南 張家界 427000；3. 衡陽市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊(duì)，湖南 衡陽 421000）

茅巖莓茶（moyeam）又稱藤茶、土家甘露茶，學(xué)名為顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata），屬葡萄科蛇葡萄屬的藤本植物[1]，為藥食兩用植物，具有疏風(fēng)解毒、祛瘀消腫、止血止痛等功效[2]，民間常采其幼嫩葉片制作成茶品，治療感冒發(fā)燒、口腔潰瘍、慢性咽炎、外傷等[3]。顯齒蛇葡萄中主要次生代謝物以黃酮類化合物為主，含量高達(dá)45.52%[4]，對神經(jīng)保護(hù)、抗心肌缺血、降壓、改善學(xué)習(xí)記憶、抗胃潰瘍、保護(hù)生殖組織、抗炎、抗腫瘤以及降血糖等都有良好的作用[5]。據(jù)《永定鄉(xiāng)土志》史冊中記載，茅巖莓茶至今已有700 a以上歷史，是張家界土家族、苗族常用藥之一[6]。由于莓茶具有較高經(jīng)濟(jì)價值，張家界市已將發(fā)展莓茶產(chǎn)業(yè)作為精準(zhǔn)扶貧、鄉(xiāng)村振興的重要舉措，并已進(jìn)行規(guī)模種植。隨著人工栽培面積的逐漸擴(kuò)大，莓茶病蟲害已成為阻礙莓茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素。筆者于2020年7月在張家界永定區(qū)三家館鄉(xiāng)茅巖莓茶種植基地發(fā)現(xiàn)了一種類似夜蛾科的害蟲，其初孵幼蟲聚集在莓茶葉背取食危害，高齡幼蟲直接取食葉片，形成孔洞、刻缺等。通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法鑒定其為斜紋夜蛾（Spodoptera litura）。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

張家界市永定區(qū)三家館鄉(xiāng)莓茶種植基地受害蟲危害的茅巖莓茶植株及其害蟲，2020年7月采集害蟲制作成的標(biāo)本（現(xiàn)保存于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 形態(tài)特征觀察在田間對危害癥狀和生長發(fā)育進(jìn)行初步觀察。室內(nèi)使用體視顯微鏡（Nikon SMZ745T）進(jìn)行仔細(xì)觀察，并拍照記錄形態(tài)特征。

1.2.2 分子生物學(xué)鑒定使用CTAB法[7]提取昆蟲DNA，以提取的總DNA為模板，用擴(kuò)增線粒體基因的通用引物[8]COI-F：5'-GGTCAACAAATCATAAAGATA TTG-3'，COI-R：5'-TA- AACTTCAGGGTGACCAAAAAA T-3'，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為25 μL：模板DNA 1 μL，上下游引物各0.4 μL，Taq PCR Super Mix 12.5 μL，dd H2O補(bǔ)至25 μL。PCR擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性3 min；94℃變性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，33個循環(huán)；最后72℃延伸10 min，4℃保存。

PCR產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，將目的片段送北京擎科生物科技有限公司進(jìn)行COI序列測定。測序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行BLAST比對，并從NCBI上下載相近物種序列，最后利用MEGA X構(gòu)建鄰接樹（Neighbour-joining tree：NJ tree）[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 害蟲田間危害癥狀與室內(nèi)飼養(yǎng)觀察

2020年7月30日在茅巖莓茶田間發(fā)現(xiàn)的被害葉片癥狀如圖1所示，被取食危害的葉片呈灰褐色并伴有害蟲排泄物，其上有不規(guī)則“窗口”形咬痕，背面取食部位留有少許濕滑液體，幼蟲卵塊為黃白色。

圖1 茅巖莓茶的害蟲危害癥狀

將發(fā)現(xiàn)的害蟲帶回室內(nèi)飼養(yǎng)觀察，害蟲于8月17日化蛹，8月28日成蝶（見圖2），根據(jù)其形態(tài)特征初步判斷該蟲為夜蛾科害蟲。

圖2 害蟲室內(nèi)飼養(yǎng)的生長發(fā)育情況

2.2 害蟲形態(tài)特征

使用體視解剖鏡觀察害蟲的形態(tài)特征如圖3所示。幼蟲蟲體黃褐色，12體節(jié)，體長約46 mm；頭部光滑、淺褐色，有明顯蛻裂線呈倒“Y”型；背部可見背中線和四條對稱的亞背線；胸部3節(jié)，3對胸足，胸足棕黃色，其跗節(jié)末端有爪；腹部8節(jié)，4對腹足（位于第3～6腹節(jié)）和1對臀足（位于第8腹節(jié)），腹足淺黃色；中胸至腹節(jié)在亞背線內(nèi)側(cè)各有黑色斑2對。成蟲體長約13 mm，翅展約29 mm，體色暗褐色或灰白色，胸部背面有白色叢毛，前翅灰褐色，花紋較多；后翅白色半透明，無斑紋；觸角為絲狀，復(fù)眼發(fā)達(dá)，黑色。

圖3 害蟲的形態(tài)特征圖

2.3 COI序列測定結(jié)果

對害蟲DNA使用COI-F/COI-R引物擴(kuò)增，凝膠電泳檢測結(jié)果得到大小約700 bp的片段。通過測序得到核苷酸序列為685 bp，將序列與GenBank中相關(guān)DNA序列進(jìn)行BLAST比對，結(jié)果表明害蟲DNA與Spodoptera litura序列的一致性達(dá)到99%，選取NCBI BLAST同源性較高的昆蟲DNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（見圖4），發(fā)現(xiàn)該害蟲與Spodoptera litura聚集在同一分支上。根據(jù)上述結(jié)果結(jié)合害蟲的形態(tài)學(xué)特征，初步確定該害蟲為斜紋夜蛾。

圖4 基于COI基因的29種近緣種的NJ分子系統(tǒng)發(fā)育樹

3 結(jié)論與討論

經(jīng)形態(tài)特征和分子生物學(xué)鑒定，得出了危害張家界市永定區(qū)三家館鄉(xiāng)茅巖莓茶的害蟲為斜紋夜蛾（Spodoptera litura）。斜紋夜蛾是一種季節(jié)性長距離遷移的害蟲，也是一種雜食性和暴食性，產(chǎn)卵量大、繁殖能力強(qiáng)，活動隱蔽、不易被發(fā)現(xiàn)的世界性害蟲[10]。斜紋夜蛾喜高溫少雨，在夏旱的7～8月高溫少雨氣候條件下，很容易在茶樹上爆發(fā)[11-12]。筆者在調(diào)查時發(fā)現(xiàn)，茅巖莓茶田間斜紋夜蛾的發(fā)生與危害在8月較為嚴(yán)重，臨近9月時其發(fā)生和危害有所下降，可見斜紋夜蛾對茅巖莓茶的發(fā)生與危害與當(dāng)?shù)氐母邷靥鞖庥嘘P(guān)。但斜紋夜蛾在茅巖莓茶田間的具體危害特性、發(fā)生及分布、生活史等還有待進(jìn)一步調(diào)查研究。