張家界莓茶害蟲
——斜紋夜蛾

王逸才，袁思琦，洪艷云，鄧武成，胡維軍，李春萍，陳建芝，易圖永

（1. 湖南農業大學植物保護學院，湖南 長沙 410128；2. 張家界莓茶發展服務中心，湖南 張家界 427000；3. 衡陽市農業綜合行政執法支隊，湖南 衡陽 421000）

茅巖莓茶（moyeam）又稱藤茶、土家甘露茶，學名為顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata），屬葡萄科蛇葡萄屬的藤本植物[1]，為藥食兩用植物，具有疏風解毒、祛瘀消腫、止血止痛等功效[2]，民間常采其幼嫩葉片制作成茶品，治療感冒發燒、口腔潰瘍、慢性咽炎、外傷等[3]。顯齒蛇葡萄中主要次生代謝物以黃酮類化合物為主，含量高達45.52%[4]，對神經保護、抗心肌缺血、降壓、改善學習記憶、抗胃潰瘍、保護生殖組織、抗炎、抗腫瘤以及降血糖等都有良好的作用[5]。據《永定鄉土志》史冊中記載，茅巖莓茶至今已有700 a以上歷史，是張家界土家族、苗族常用藥之一[6]。由于莓茶具有較高經濟價值，張家界市已將發展莓茶產業作為精準扶貧、鄉村振興的重要舉措，并已進行規模種植。隨著人工栽培面積的逐漸擴大，莓茶病蟲害已成為阻礙莓茶產業發展的主要因素。筆者于2020年7月在張家界永定區三家館鄉茅巖莓茶種植基地發現了一種類似夜蛾科的害蟲，其初孵幼蟲聚集在莓茶葉背取食危害，高齡幼蟲直接取食葉片，形成孔洞、刻缺等。通過形態學和分子生物學方法鑒定其為斜紋夜蛾（Spodoptera litura）。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

張家界市永定區三家館鄉莓茶種植基地受害蟲危害的茅巖莓茶植株及其害蟲，2020年7月采集害蟲制作成的標本（現保存于湖南農業大學植物保護學院）。

1.2 試驗方法

1.2.1 形態特征觀察在田間對危害癥狀和生長發育進行初步觀察。室內使用體視顯微鏡（Nikon SMZ745T）進行仔細觀察，并拍照記錄形態特征。

1.2.2 分子生物學鑒定使用CTAB法[7]提取昆蟲DNA，以提取的總DNA為模板，用擴增線粒體基因的通用引物[8]COI-F：5'-GGTCAACAAATCATAAAGATA TTG-3'，COI-R：5'-TA- AACTTCAGGGTGACCAAAAAA T-3'，進行PCR擴增。PCR反應體系為25 μL：模板DNA 1 μL，上下游引物各0.4 μL，Taq PCR Super Mix 12.5 μL，dd H2O補至25 μL。PCR擴增程序：94℃預變性3 min；94℃變性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，33個循環；最后72℃延伸10 min，4℃保存。

PCR產物在1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，將目的片段送北京擎科生物科技有限公司進行COI序列測定。測序結果在NCBI上進行BLAST比對，并從NCBI上下載相近物種序列，最后利用MEGA X構建鄰接樹（Neighbour-joining tree：NJ tree）[9]。

2 結果與分析

2.1 害蟲田間危害癥狀與室內飼養觀察

2020年7月30日在茅巖莓茶田間發現的被害葉片癥狀如圖1所示，被取食危害的葉片呈灰褐色并伴有害蟲排泄物，其上有不規則“窗口”形咬痕，背面取食部位留有少許濕滑液體，幼蟲卵塊為黃白色。

圖1 茅巖莓茶的害蟲危害癥狀

將發現的害蟲帶回室內飼養觀察，害蟲于8月17日化蛹，8月28日成蝶（見圖2），根據其形態特征初步判斷該蟲為夜蛾科害蟲。

圖2 害蟲室內飼養的生長發育情況

2.2 害蟲形態特征

使用體視解剖鏡觀察害蟲的形態特征如圖3所示。幼蟲蟲體黃褐色，12體節，體長約46 mm；頭部光滑、淺褐色，有明顯蛻裂線呈倒“Y”型；背部可見背中線和四條對稱的亞背線；胸部3節，3對胸足，胸足棕黃色，其跗節末端有爪；腹部8節，4對腹足（位于第3～6腹節）和1對臀足（位于第8腹節），腹足淺黃色；中胸至腹節在亞背線內側各有黑色斑2對。成蟲體長約13 mm，翅展約29 mm，體色暗褐色或灰白色，胸部背面有白色叢毛，前翅灰褐色，花紋較多；后翅白色半透明，無斑紋；觸角為絲狀，復眼發達，黑色。

圖3 害蟲的形態特征圖

2.3 COI序列測定結果

對害蟲DNA使用COI-F/COI-R引物擴增，凝膠電泳檢測結果得到大小約700 bp的片段。通過測序得到核苷酸序列為685 bp，將序列與GenBank中相關DNA序列進行BLAST比對，結果表明害蟲DNA與Spodoptera litura序列的一致性達到99%，選取NCBI BLAST同源性較高的昆蟲DNA序列構建系統發育進化樹（見圖4），發現該害蟲與Spodoptera litura聚集在同一分支上。根據上述結果結合害蟲的形態學特征，初步確定該害蟲為斜紋夜蛾。

圖4 基于COI基因的29種近緣種的NJ分子系統發育樹

3 結論與討論

經形態特征和分子生物學鑒定，得出了危害張家界市永定區三家館鄉茅巖莓茶的害蟲為斜紋夜蛾（Spodoptera litura）。斜紋夜蛾是一種季節性長距離遷移的害蟲，也是一種雜食性和暴食性，產卵量大、繁殖能力強，活動隱蔽、不易被發現的世界性害蟲[10]。斜紋夜蛾喜高溫少雨，在夏旱的7～8月高溫少雨氣候條件下，很容易在茶樹上爆發[11-12]。筆者在調查時發現，茅巖莓茶田間斜紋夜蛾的發生與危害在8月較為嚴重，臨近9月時其發生和危害有所下降，可見斜紋夜蛾對茅巖莓茶的發生與危害與當地的高溫天氣有關。但斜紋夜蛾在茅巖莓茶田間的具體危害特性、發生及分布、生活史等還有待進一步調查研究。