ALDH2基因G487A位點多態性與2型糖尿病患者腦梗死風險的關系*

王少津，許麗娃，吉家釵

（海口市人民醫院全科醫學，海南海口570208）

2 型糖尿病是由胰島素分泌不足或胰島素抵抗引起的血糖升高疾病，若血糖濃度長期無法控制，會引起心、腦、腎的嚴重并發癥[1]。2 型糖尿病有很多慢性并發癥，其中腦梗死較常見[2]，嚴重影響患者身心健康。ALDH2 是一種ALDH 同工酶，位于線粒體內，是催化乙醛等多種醛類物質氧化代謝的關鍵酶[3]。而乙醇作為一種神經麻醉劑，可引發心率失常，降低腦血流量，與腦梗死的發生有關。有報道稱，ALDH2基因多態性是急性腦梗死的危險因素之一[4]，但ALDH2基因多態性與2 型糖尿病患者腦梗死風險的關系研究較少。本研究探討2 型糖尿病患者腦梗死風險與ALDH2基因多態性的關系，旨在對其發生腦梗死的風險評估提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月—2020年1月海口市人民醫院收治的116 例2 型糖尿病患者為研究對象，根據是否發生腦梗死分為腦梗死組71例和非腦梗死組45例。腦梗死組男性42 例，女性29 例；年齡50～79 歲，平均（64.16±6.82）歲。非腦梗死組男性24 例，女性21 例；年齡50～78 歲，平均（63.24±7.36）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會審批，患者及家屬知情并簽訂知情同意書。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準①符合2 型糖尿病診斷標準[5]；②符合腦梗死相關診斷標準[6]，并經CT 證實。

1.2.2 排除標準①合并惡性腫瘤；②自身免疫性疾病；③重度肝、腎功能異常；④冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（以下簡稱冠心病）、心肌梗死等疾病。

1.3 主要試劑與儀器

DNA 快速抽提試劑盒（上海喬羽生物科技有限公司，貨號：QY-MY296J），基因組DNA 擴增試劑盒（上海機純實業有限公司，貨號：JC-A78139）。ExF24086V 和分光光度儀（Nanodrop 2000）購自美國賽默飛世爾科技有限公司，CFX96 qRT-PCR 儀（德國Bio-Rad 公司）。

1.4 觀察指標

記錄所有研究對象的吸煙史、飲酒史等資料，采用全自動生化分析儀檢測患者血清甘油三酯（Triglyceride, TG）、總膽固醇（total cholesterol, TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoproteincholesterol, LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（highdensity lipoprotein-cholesterol,HDL-C）水平。

1.5 基因組DNA提取及擴增

收集所有患者抗凝血液標本，常溫解凍，嚴格按血液基因組DNA 快速抽提試劑盒說明操作，提取外周血基因組DNA。ALDH2基因多態性位點G487A 引物根據Gen bank 公布序列用Primer 5.0 生物軟件設計。采用限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應（PCR-RELP） 對ALDH2基因進行分型。PCR 反應體系：滅菌雙蒸水14.2 μl，10×PCR 緩沖液2 μl，dNTP 1.6 μl，Taq 酶0.2 μl，DNA 模板1 μl，正反向引物各0.5 μl。PCR 反應條件：95℃預變性3 min，95℃變性30 s，60℃退火45 s、72℃延伸30 s，共計35 次循環，72℃繼續延伸10 min。結束后離心并純化產物。G487A正向引物序列：5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′；反向引物序列：5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′，長度200 bp。由蘇州吉瑪生物技術有限公司提供目的因片段測序，判斷ALDH2基因的多態性。

1.6 統計學方法

數據分析采用SPSS 25.0 統計軟件。計數資料以構成比或率（%）表示，比較用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗；影響因素的分析用多因素Logistic 回歸模型。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

腦梗死組與非腦梗死組性別、年齡、飲酒及吸煙比例、HDL-C 水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組TC、TG、LDL-C 水平比較，經t檢驗，差異有統計學意義（P＜0.05），腦梗死組高于非腦梗死組。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 Hardy-Weinberg平衡定律檢驗

根據Hardy-Weinberg 平衡定律，非腦梗死組與腦梗死組ALDH2基因G487A 位點基因型的期望值和觀察值均符合遺傳平衡定律（P＞0.05）。見表2。

表2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗結果

2.3 ALDH2基因G487A位點多態性分析

兩組ALDH2基因G487A 位點GG 型比例比較，經χ2檢驗，差異有統計學意義（P＜0.05），腦梗死組低于非腦梗死組；兩組AG 型、AA 型比例比較，差異有統計學意義（P＜0.05），腦梗死組高于非腦梗死組。兩組ALDH2基因G487A 位點A 等位基因頻率分布比較，差異有統計學意義（P＜0.05），腦梗死組高于非腦梗死組。見表3。

表3 ALDH2基因G487A位點多態性分析 例（%）

2.4 2 型糖尿病患者發生腦梗死的影響因素分析

以2 型糖尿病患者是否發生腦梗死為因變量，以TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALDH2基因G487A位點野生GG 型、雜合子AG 型、純合子突變AA型為自變量，進行多因素Logistic 回歸分析，結果顯示：TG[=2.396（95%CI：1.029，5.531）]、LDL-C[=2.512（95% CI：1.012，3.238）]、ALDH2基因G487A 位點（以野生GG 型為參照）雜合子AG 型[=3.107（95% CI：1.456，6.634）]、純合子突變AA型[=3.464（95% CI：1.594，7.528）]是2 型糖尿病患者發生腦梗死的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表4 2型糖尿病患者發生腦梗死的多因素Logistic回歸分析參數

續表4

3 討論

腦梗死發病率近年來不斷攀升，其發生與遺傳、環境等因素相關[7]。2 型糖尿病患者腦部出現明顯的血液循環障礙，腦組織缺血性壞死是發生腦梗死的病變基礎[8]。ALDH2與心肌缺血性損傷和腦缺血性損傷有關。已有研究發現，ALDH2基因多態性是2 型糖尿病患者并發冠心病的影響因素[9]。但ALDH2基因多態性是否影響2 型糖尿病發生腦梗死仍未有定論。隨著分子生物學技術的快速發展，ALDH2基因及其基因突變與2 型糖尿病發生腦梗死風險越來越受到關注。

ALDH2是乙醛脫氫酶家族的重要成員，位于人類第12 號染色體上（12q24.2），其有13 個外顯子，在外顯子12 中有一個突變位點，G→A，可使整個分子結構發生變化，導致ALDH2 喪失催化活性。ALDH2 是乙醇的重要代謝酶，主要分布在線粒體中，在乙醛氧化成乙酸的過程中起非常重要的作用，ALDH2等位基因的突變使第504 位谷氨酸變為賴氨酸[10]。機體無法降解乙醇是心、腦血管疾病的主要誘因之一，其在血管疾病的發生中扮演著重要角色，隨著全球飲酒人數不斷增加，酒精相關性疾病發生率逐年提升[11]。乙醇在人體代謝存在個體差異。有研究發現，ALDH2基因多態性與肝炎、肝硬化、酒精性心肌病及其他酒精相關疾病有關[12-14]。有研究發現，ALDH2基因多態性與心血管疾病相關[15]。吳和弟等[16]研究發現，ALDH2基因型多態性與老年2 型糖尿病患者冠狀動脈狹窄及其嚴重程度均有密切關系。侯經遠等[17]調查中國南方客家人群發現ALDH2基因AG/AA 基因型可增加該群體急性心肌梗死發生的風險性。劉春苗等[18]研究發現ALDH2基因檢測結果分為3 種，GG 型、AG型和AA 型，H 型高血壓腦梗死組患者AA/AG 型及A 等位基因的頻率明顯高于H 型高血壓患者的非腦梗死組患者，說明A 等位基因可能增加H 型高血壓腦梗死的危險。Hardy-Weinberg 平衡定律分析顯示本研究樣本具有群體遺傳學代表性。本研究結果顯示，2 型糖尿病腦梗死組患者AA/AG 型及A 等位基因的頻率高于2 型糖尿病非腦梗死組患者，提示2 型糖尿病患者腦梗死與ALDH2基因多態性有關。鐘偉清等[4]研究發現腦梗死患者血清TC、TG、LDL-C 水平顯著高于非腦梗死者。本研究結果表明，腦梗死組2 型糖尿病患者TC、TG、LDL-C 水平高于非腦梗死組，提示TC、TG、LDL-C 可能參與2 型糖尿病患者發生腦梗死。多因素Logistic 回歸分析結果顯示，TG、LDL-C、ALDH2基因G487A位點雜合子AG 型、純合子AA 型突變是2 型糖尿病患者發生腦梗死的獨立危險因素，提示A 等位基因可能是2 型糖尿病患者發生腦梗死的危險因素。

綜上所述，ALDH2基因對多態性與2 型糖尿病患者發生腦梗死有關。但本研究是小樣本量研究，可能結果存一定的偏倚性，仍需進一步擴大地區和樣本進行深入探討。