甜瓜蒂藥材質量標準提升研究

馮淑萍

（山西省運城市食品藥品檢驗所，山西 運城 044000）

甜瓜蒂為葫蘆科植物甜瓜Cucumis melo L. 的干燥果柄，有涌吐痰食、除濕退黃功效。甜瓜蒂別名苦丁香、甜瓜把、瓜丁、瓜蒂，始載于《神農本草經》并被列為上品。其主要含有葫蘆素系化合物，包括葫蘆素B，D，E，異葫蘆素B 等，還含有皂苷、甾醇、氨基酸等。葫蘆素是一類高度氧化的四環三萜類化合物，具有抗癌、抗炎、保肝、提高機體免疫力等藥理作用。葫蘆素系化合物中，葫蘆素B 含量超過80%，是抗肝炎、肝癌的有效單體。有研究表明，葫蘆素B 對體外腫瘤有顯著抑制作用，可促進腫瘤細胞發生氧化應激損傷，可抗小鼠肝纖維化，可抑制食管癌細胞增殖、遷移、克隆，促進細胞凋亡[1－6]。甜瓜蒂現收載于1987 年版《山西省中藥材標準》，但僅有來源、性狀、性味、功能主治、用法用量、注意、貯藏項。現擬修訂甜瓜蒂藥材的地方質量標準，增加顯微鑒別，薄層色譜鑒別，水分、灰分、雜質及含量測定項。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695 型高效液相色譜儀，含紫外－可見光檢測器(美國Waters 公司）；Agilent Cary 3500 型紫外－可見分光光度計(美國Agilent 公司)；ME55 型、ME155DU 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為十萬分之一）；KQ－250E 型超聲儀(昆山市超聲儀器公司)。

1.2 試藥

葫蘆素B 對照品（成都曼思特生物科技有限公司，批 號 為MUST－11081601，規 格 為20 mg，含 量 為99.2%）；甜瓜蒂對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號為1178－200001）；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水。

甜瓜蒂藥材樣本來源：2 組采自運城夏縣尉郭鄉白張村，批號分別為20180512，20180517，均為白皮瓜；2 組采自運城稷山縣太陽鄉白池村，批號分別為20180615，20180619，均為白皮瓜；2 組采自運城新絳縣龍興鎮橋東村，批號分別為20180713，20180719，均為花紋瓜；2 組采自運城聞喜縣裴社鄉大澤村，批號分別為20180723（花紋瓜），20180729（白皮瓜）；2 組購自忻州，批號分別為XZ－2019－1，XZ－2019－2，均為花紋瓜。10 組藥材樣本(編號1 ～10 號)基源鑒定結果均符合規定。

2 方法與結果

2.1 顯微鑒別

樣本橫切面顯微結果：木栓層為數列細胞，斷續可見；表皮細胞扁長方形，外被角質層；皮層內有1 圈由數列厚壁細胞組成的環，細胞呈多角形，直徑32 ～45 μm，壁木化，腔大；維管束雙韌型，纖維束排列成環；木質部導管較大，明顯；髓大，由薄壁細胞組成，常呈空洞狀。10 批樣品顯微特征基本相同，重復性較好。詳見圖1。

圖1 藥材樣品橫切面顯微特征圖Fig.1 Microscopic characteristics of the cross－section of Pedicellus melo

2.2 薄層色譜鑒別

取藥材樣品適量，研為粉末，取約1 g，加入乙醇10 mL，超聲（功率300 W，頻率40 kHz）處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL 使溶解，即得供試品溶液。取甜瓜蒂對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。取葫蘆素B 對照品，加乙醇制成每1 mL 含3 mg 的對照品溶液。照薄層色譜法[2020 年版《中國藥典（四部）》通則0502]試驗，吸取上述3 種溶液各3 ～5 μL，分別點于同一硅膠G 板上，以二氯甲烷－乙酸乙酯（2 ∶1，V／ V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液（取磷鉬酸5 g，加無水乙醇使溶解成100 mL，即得），105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點。詳見圖2。

圖2 甜瓜蒂薄層色譜圖Fig.2 TLC chromatograms of Pedicellus melo

2.3 水分、灰分、雜質檢查

水分：測定結果見表1。結合2020 年版《中國藥典（四部）》通則0212 果實類藥材的水分規定，將水分限度定為不得過12.0%，納入標準。

表1 藥材樣品水分及灰分測定結果（%）Tab.1 Determination result of moisture and ash in the sample（%）

灰分：測定結果見表1。據此將甜瓜蒂藥材總灰分的限度定為不得過4.0%，納入標準。

雜質：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則2301“雜質檢查法”檢查，結果10 批藥材樣品所含雜質極少，故不列入標準。

2.4 含量測定

2.4.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Waters Xbridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇－水（60 ∶40，V／ V）；流速：1.0 mL／min；檢測波長：228 nm；進樣量：10 μL。在此色譜條件下，指標成分葫蘆素B 與其他峰能達到基線分離。詳見圖3。

圖3 甜瓜蒂高效液相色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of Pedicellus melo

2.4.2 溶液制備

對照品溶液：取葫蘆素B 對照品適量，精密稱定，加55%乙醇制成每1 mL 含80 μg 的溶液，即得。

供試品溶液：取藥材樣品粉末約1 g（過3 號篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入55%乙醇50 mL，稱定質量，超聲處理45 min，放冷，再稱定質量，用55%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得[7－13]。

2.4.3 方法學考察

線性關系考察：精密量取2.4.2 項下對照品溶液（80.24 μg／mL），逐步稀釋為系列對照品溶液，按2.4.1項下色譜條件進樣測定，以峰面積為縱坐標（Y）、進樣量（X，μg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y ＝19.972 X－3.231 7，r ＝0.999 8（n ＝7）。結果表明，葫蘆素B 進樣量在0.081 2 ～1.611 3 μg 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，按2.4.1 項下色譜條件連續進樣6 次，測定峰面積。結果的RSD 為0.72%（n ＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：稱取同一批藥材樣品（批號為20180512）5 份，精密稱定，按2.4.2 項下方法制備供試品溶液，按2.4.1 項下色譜條件進樣，測定峰面積，并計算含量。結果葫蘆素B 的平均含量為0.574%，RSD ＝1.61%（n ＝5），表明方法重復性較好。

穩定性試驗：取樣品（批號為20180512），依法制備供試品溶液，室溫下按2.4.1 項下色譜條件，分別于0，2，4，8，12，24 h 時進樣測定峰面積。結果的RSD為0.94%（n ＝6），表明供試品溶液室溫下24 h 內穩定性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的藥材樣品粉末（批號為20180615），平行6 份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入葫蘆素B 對照品適量，依法制備供試品溶液，按2.4.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n ＝6）Tab.2 Results of the recovery test（n ＝6）

2.4.4 樣品含量測定及限度制訂

取10 批藥材樣品適量，依法制備供試品溶液，再按2.4.1 色譜條件測定藥材樣品中葫蘆素B 含量，平行測定2 次，取平均值，結果見表3。據此擬訂最低藥材樣品含量為0.22%，根據藥材樣品最低值下浮10%，暫定本品含葫蘆素B 不得少于0.20%。

表3 10 批藥材樣品含量測定結果（%，n ＝2）Tab.3 Content determination of cucurbitacin B in 10 batches of samples（%，n ＝2）

3 討論

預試驗中分別選用不同的薄層色譜展開劑，包括三氯甲烷－乙醇（5 ∶1，V／ V），石油醚－乙酸乙酯（5 ∶1，V／ V），二氯甲烷－甲醇（1 ∶1，V／ V），二氯甲烷－甲醇（3 ∶1，V／ V），二氯甲烷－甲醇（7 ∶1，V／ V），二氯甲烷－乙酸乙酯（2 ∶1，V／ V），結果表明，以最后一種為展開劑時，展開所得的薄層色譜圖斑點較多、譜圖清晰，且分離度較好，因此選用該展開劑進行試驗。

所測10 批藥材樣品在性狀、顯微鑒別、薄層色譜、水分、灰分、雜質方面檢測結果差異不大，但含量測定結果顯示，不同來源的藥材樣品中葫蘆素B 含量差異較大，可能與各地土壤、氣候、采收時間有關。