妊娠期高血壓疾病血白細胞水平與胎盤FaS基因表達的相關性研究

楊微微，梅麗娜，王家建，陸艷

有研究表明妊娠期高血壓疾病（HDCP）患者胎盤中Fas的表達顯著高于正常孕婦[1-2]。外周血白細胞計數水平升高與高血壓患病和發生風險有關，慢性炎癥參與高血壓的發生和發展[3]，但關于各類外周血白細胞計數對HDCP疾病影響的研究較少，關于外周血白細胞計數和Fas基因相關性的研究更少。本研究擬通過檢測白細胞、淋巴細胞、中性粒細胞計數及胎盤組織中Fas 基因miRNA的表達量情況，進一步探討各類外周血白細胞計數水平和Fas 基因表達對HDCP的影響及相關性，旨在為HDCP的防治提供參考。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017 年1—6 月浙江省湖州市婦幼保健院收治的妊娠期高血壓（HDP）患者和重度子癇前期患者各30例，分別納入HDP 組和重度子癇前期組，HDP及重度子癇前期診斷標準參照第9 版《婦產科學》診斷標準[4]。另納入同期30例無妊娠合并癥且選擇擇期剖宮產的正常妊娠孕婦作為對照組。排除：多胎妊娠、糖尿病、慢性高血壓、心腦血管病、自身免疫性疾病、慢性腎臟病史、甲狀腺功能亢進、妊娠并發癥（前置胎盤、胎盤早剝、母兒血型不合）、復發性自然流產、長期吸煙及孕期或長期特殊用藥者。本研究方案經湖州市婦幼保健院醫學倫理委員會批準（倫理批號：2021-013）。所有納入研究的孕婦均簽署知情同意書。

1.2 方法 入院第2天清晨空腹狀態下，在肘靜脈處采集1～2 ml 靜脈血置于抗凝管中，用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝，采用希森美原裝標準試劑經XN9000 全自動血液細胞分析儀檢測患者血液指標，包括白細胞計數、中性粒細胞計數及淋巴細胞計數。患者剖宮產術中胎盤娩出后，立即在胎盤母體面正中近臍帶處取250～500 mg的組織，避開出血、壞死組織及鈣化部位，立即置入液氮浸沒以便迅速降溫，液氮運輸。標本離體取樣后立即保存在－80℃中。采用美國Applied Biosystems 公司訂制莖環逆轉錄引物、熒光PCR 引物和探針，取10 ng RNA采用AppliedBiosystems 公司的逆轉錄試劑盒（TaqMan?MicroRNAReverseTranscription Kit）進行逆轉錄，熒光定量PCR法檢測各組胎盤組織中的Fas 基因miRNA 表達情況。

1.3 統計方法 采用SPSS26.0統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-檢驗；采用Spearman 相關性分析。＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3 組一般資料比較 3 組年齡及孕次差異均無統計學意義（均＞0.05），3 組孕周差異有統計學意義（＜0.05），見表1。

表1 3 組一般資料比較

2.2 3 組血白細胞、淋巴細胞和中性粒細胞計數比較 3 組血白細胞、淋巴細胞和中性粒細胞計數差異均有統計學意義（均＜0.05），重度子癇前期組血白細胞、淋巴細胞及中性粒細胞計數均高于對照組（均＜0.05），HDCP 組白細胞和中性粒細胞計數均高于對照組（均＜0.05），重度子癇前期組淋巴細胞計數高于HDCP 組（＜0.05），見表2。

表2 3 組血白細胞、淋巴細胞和中性粒細胞計數比較 ×109/L

2.3 3 組Fas 基因miRNA 表達情況 HDP組和重度子癇前期組Fas 基因miRNA 表達量均高于對照組（均＜0.05），見圖1及表3。

表3 3 組Fas 基因miRNA 表達情況

圖1 Fas 基因miRNA的熒光定量PCR 溶解曲線圖

2.4 相關性分析 外周血白細胞、中性粒細胞及淋巴細胞計數與胎盤中Fas表達均呈正相關（=0.400、0.421、0.277，均＜0.05）。

3 討論

HDCP 發生的重要環節在于血管內皮的損傷和免疫功能的失調，其體內的多種炎癥因子與正常孕婦存在明顯差異[5]。白細胞是人體血液中非常重要的一類血細胞，參與機體的免疫炎癥反應。當病菌侵入人體體內時，白細胞能通過變形而穿過毛細血管壁，集中到病菌入侵部位，將病菌包圍和吞噬。近年來研究表明，白細胞計數與高血壓的發生風險存在相關性[6]；Kim等[7]對韓國15654 名健康體檢者進行橫斷面研究，結果提示白細胞總數、中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞計數水平升高與高血壓患病風險增加有關。本研究結果顯示外周血白細胞及淋巴細胞與HDCP的發生存在密切關系，且隨疾病嚴重程度的增加而升高。Amidu 等[8]研究顯示淋巴細胞計數增加與HDCP的嚴重程度相關；本研究也進一步證實不同血白細胞參數對HDCP的發生和發展有一定的預測價值，重度子癇前期組白細胞、淋巴細胞及中性粒細胞計數高于對照組（均＜0.05），這說明炎癥反應是引起HDCP特別是重度子癇前期的一個重要因素。

Fa（sCD95/APO-1）是一種I類跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體（TNF/NGF）超家族[9]。Fas/FasL系統的通過清除過多的活化淋巴細胞以維持免疫系統的內穩定[10]。有研究發現經免疫組化分析檢測HDCP 胎盤絨毛滋養細胞Fas表達明顯升高[11]；Fas的異常表達在子癇前期的發病過程中也扮演著重要角色[12]。本研究結果顯示Fas 基因miRNA 表達量水平在HDP 組及重度子癇前期組中明顯高于對照組，且在重度子癇前期組中Fas 基因miRNA的表達量高于HDP 組（均＜0.05）；這證實Fas基因miRNA的表達量與HDCP的發生及發展有密切關系。HDCP的基本病理改變是全身小血管的痙攣，Allaire等[13]發現HDCP患者胎盤絨毛滋養細胞FaS 表達顯著高于正常組，分析認為滋養細胞Fas高表達致使孕婦循環血中白細胞凋亡延遲。本研究結果顯示外周血白細胞、中性粒細胞及淋巴細胞計數與胎盤中Fas 表達均呈正相關性（均＜0.05）。因此，白細胞計數水平檢測作為基層水平的普遍檢測手段，對HDCP的診斷及病情進展有較高的臨床應用價值。