雅培i1000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)DHEA-S和SHBG的性能驗(yàn)證

林城通 石文 陳林 黃愛(ài)軍 林海標(biāo)

廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部，廣州 510000

硫酸脫氫表雄酮（dehydroepiandrosterone sulfate，DHEA-S）是臨床評(píng)價(jià)腎上腺功能的指標(biāo)之一，是由腎上腺合成分泌的類(lèi)固醇激素。高水平DHEA-S 可提示多囊卵巢綜合征、腎上腺皮質(zhì)良性腫瘤或者惡性腫瘤。DHEA-S 可部分新陳代謝為活性雄激素以及雌激素，DHEA-S 水平增高可導(dǎo)致女性出現(xiàn)閉經(jīng)和男性化癥狀，和代表促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、降鈣素、雌激素和睪酮同時(shí)測(cè)定，以幫助診斷多囊卵巢綜合征，排除其他引起不孕、閉經(jīng)和多毛癥的原因。同時(shí)也有助于評(píng)估腎上腺功能，和區(qū)分腎上腺對(duì)雄激素分泌過(guò)多狀態(tài)由睪丸還是或卵巢引起的。性激素結(jié)合球蛋白（sex hormone-binding globulin，SHBG）是在結(jié)合狀態(tài)下以無(wú)生物學(xué)活性形式轉(zhuǎn)運(yùn)入血液，由肝細(xì)胞合成的一種球蛋白?？山Y(jié)合雌二醇、睪酮和雙氫睪酮，并調(diào)控女性機(jī)體中的性激素濃度，在多種婦產(chǎn)科疾病的發(fā)生發(fā)展中均有重要作用［1］。其可用于診斷多毛癥、雄激素過(guò)多癥，用于評(píng)價(jià)不孕婦女的排卵功能以及甲狀腺功能。

本研究依據(jù)ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》要求，做好實(shí)驗(yàn)室各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制［2］，參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）頒布的EP 系列文件，從測(cè)量原裝質(zhì)控品和臨床樣本出發(fā)，使用雅培i1000SR于2020年3月對(duì)各質(zhì)控品和臨床樣本進(jìn)行DHEA-S、SHBG的非隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)性研究，對(duì)DHEA-S 和SHBG 進(jìn)行非隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)性研究，建立性能驗(yàn)證方案［3-4］，對(duì)二者進(jìn)行精密度、正確度以及線性范圍性能驗(yàn)證和評(píng)價(jià)，為臨床診斷和治療評(píng)估提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 試劑儀器 美國(guó)原裝的雅培DHEA-S 測(cè)定試劑盒，批號(hào)01620H000；美國(guó)原裝的雅培SHBG測(cè)定試劑盒，批號(hào)00420I000。儀器為美國(guó)雅培i1000SR。

1.2 驗(yàn)證材料 美國(guó)雅培原裝DHEA-S 校準(zhǔn)品（批號(hào)02220F000）、SHBG校準(zhǔn)品（批號(hào)04220I000），用于測(cè)量校準(zhǔn)和試劑穩(wěn)定性驗(yàn)證的。美國(guó)伯樂(lè)公司的免疫質(zhì)控品：水平1、水平2（批號(hào)40362），用于精密度驗(yàn)證。來(lái)自2020年的國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心內(nèi)分泌室間質(zhì)評(píng)質(zhì)控品5 份（批號(hào)分別為20201、20202、20203、20204、20205），用于正確度驗(yàn)證。2020 年3 月分別收集的DHEA-S 和SHBG的高值和低值血清標(biāo)本，用于線性范圍驗(yàn)證。

1.3 方法 本次實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)熟悉性能驗(yàn)證方案并且經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)具備一定資質(zhì)，能按操作說(shuō)明書(shū)的要求對(duì)儀器進(jìn)行運(yùn)行、校準(zhǔn)和保養(yǎng)等正常操作，同時(shí)可根據(jù)ISO15189要求把握好實(shí)驗(yàn)室各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)控。

1.3.1 精密度驗(yàn)證 依據(jù)EP15-A3［5］來(lái)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：在當(dāng)天質(zhì)控在控和儀器狀態(tài)良好的前提下，使用2 個(gè)濃度水平的伯樂(lè)免疫類(lèi)質(zhì)控品，每天分析1 批，每批每個(gè)水平進(jìn)行5次重復(fù)測(cè)定，連續(xù)測(cè)定5 d，共需水平1和水平2質(zhì)控品，各25 份，每份200 μl。代入公式最終計(jì)算DHEA-S、SHBG的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。當(dāng)精密度小于廠家聲稱的時(shí)，通過(guò)驗(yàn)證。

1.3.2 正確度驗(yàn)證 依據(jù)EP15-A3［2］來(lái)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：取2020年國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心內(nèi)分泌項(xiàng)目室間質(zhì)評(píng)5 份質(zhì)控品（各5 份，每份200 μl）檢測(cè)結(jié)果，至少測(cè)定2 個(gè)水平。實(shí)驗(yàn)前充分混勻分析物，用實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)測(cè)定5 次，將檢測(cè)結(jié)果與說(shuō)明書(shū)標(biāo)示值或靶值進(jìn)行比對(duì)，參考CNAS-CL38 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明，計(jì)算DHEA-S 和SHBG 與靶值的偏倚，以1/2總允許誤差（TEa）作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.3 線性范圍驗(yàn)證 參考CLSI EP6-A 文件［5］，選用2020 年收集的高值血清樣本H（濃度接近廠家說(shuō)明書(shū)的高限值）和低值樣本L（濃度接近廠家說(shuō)明書(shū)的低限值）進(jìn)行驗(yàn)證。樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實(shí)驗(yàn)樣本相似，所選用的濃度水平應(yīng)覆蓋臨床重要評(píng)價(jià)濃度，如分析測(cè)量的最低限、最高限、不同的醫(yī)學(xué)決定水平等。將各2.5 ml 高值血清樣本H 和低值樣本L 按照L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H 關(guān)系各自配置混合成5個(gè)濃度，每個(gè)濃度各1.0 ml，分別測(cè)定3次。然后將雅培i1000SR所測(cè)量均值和靶值進(jìn)行線性回歸分析，得出實(shí)測(cè)值與理論值的線性關(guān)系公式Y(jié)=aX+b，并計(jì)算相關(guān)系數(shù)（R2），將得到的線性范圍與廠家聲稱的進(jìn)行比較，要求得到的相關(guān)系數(shù)R2≥0.95。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 根據(jù)EP 系列文件要求，采用Excel對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。采用SPSS19.0軟件來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，最終要求以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 精密度結(jié)果 分別對(duì)DHEA-S 和SHBG 5 個(gè)批次每個(gè)水平分別進(jìn)行5 次重復(fù)測(cè)定?？傻玫紻HEA-S水 平1 均值為152.82 μg/dL，得 到DHEA-S 水平2均值為595.72 μg/dL。由表1 可知，DHEA-S 濃度水平1 驗(yàn)證的批內(nèi)、總變異系數(shù)分別為1.20%、3.68%，DHEA-S 濃度水平2驗(yàn)證的批內(nèi)CV、總CV分別為1.48%，1.70%均小于廠家聲稱的6.25%的批內(nèi)CV 和8.33%的總CV，最后可得結(jié)論，精密度驗(yàn)證通過(guò)。由表1 可知，SHBG 水平1 均值為39.73 nmol/L，SHBG 水平2 均值為254.02 nmol/L。SHBG濃度水平1 驗(yàn)證的批內(nèi)CV、總CV 分別為4.00%，4.94%，SHBG水平2驗(yàn)證的批內(nèi)CV、總CV 分別為0.80%，2.03%，均小于廠家聲稱的6.25%的批內(nèi)CV和8.33%的總CV，最后可得結(jié)論，精密度驗(yàn)證通過(guò)［6］。

表1 雅培i1000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)DHEA-S、SHBG的精密度結(jié)果

2.2 正確度結(jié)果 由表2 可知DHEA-S的5 份質(zhì)控品測(cè)量均值分別為：7.42、2.76、13、21.79 和2.7，對(duì)應(yīng)靶值為7.98、2.96、13.65、20.81 和2.77，計(jì)算其驗(yàn)證偏差可得結(jié)果分別為-7.0%、-6.8%、-4.8%、4.7%和-2.5%，結(jié)果均小于衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心2020年室間質(zhì)評(píng)所采用的TEa的1/2，即小于要求范圍12.5%，認(rèn)為新檢測(cè)系統(tǒng)DHEA-S的偏倚屬臨床可接受水平，可用于臨床［7］。由表2 可知SHBG的5 份質(zhì)控品測(cè)量均值分別為：33.6、10.5、34.7、55.2和9.5，對(duì)應(yīng)靶值為35.20、10.90、35.20、56.6 和9.70，計(jì)算其驗(yàn)證偏差可得結(jié)果分別為-4.5%、-3.7%、-1.4%、-2.5%和-2.1%，結(jié)果均小于衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心2020年室間質(zhì)評(píng)所采用的TEa的1/2，即小于要求范圍12.5%，認(rèn)為新檢測(cè)系統(tǒng)SHBG的偏倚屬臨床可接受水平，可用于臨床［7］。

表2 雅培i1000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)DHEA-S、SHBG的正確度結(jié)果

2.3 線性范圍結(jié)果 從表3 可見(jiàn)，DHEA-S 最終驗(yàn)證的線性范圍是5.10～1 301.07 μg/dL。將DHEA-S 5個(gè)濃度L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H的測(cè)量均值結(jié)果5.10、334.33、650.40、981.03、1 301.07 μg/dL 與靶值4.00、378.00、752.00、1126.00、1 450.00 μg/dL 進(jìn)行線性回歸分析，得出實(shí)測(cè)值與理論值的線性關(guān)系，由圖1 可見(jiàn)稀釋度區(qū)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果為Y=0.889 1X-5.327 7，R2=0.999 3，結(jié)果大于0.995。測(cè)定的DHEA-S 線性范圍在廠家聲明范圍之內(nèi)，驗(yàn)證結(jié)論：通過(guò)，各稀釋倍數(shù)的標(biāo)本實(shí)測(cè)濃度與理論濃度的相對(duì)偏移均符合廠家聲明。從表3 可知驗(yàn)證的SHBG 線性范圍是1.90～221.13 nmol/L，將SHBG 5 個(gè)濃度L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H的測(cè)量均值結(jié)果1.90、54.60、107.53、153.67、221.13 nmol/L與靶值2.00、56.50、111.00、165.50、1 220.00 nmol/L 進(jìn)行線性回歸分析。得出實(shí)測(cè)值與理論值的線性關(guān)系，由圖2 可見(jiàn)稀釋度區(qū)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果為Y=0.986 3X-1.712 6，R2=0.996 6，結(jié)果大于0.995，測(cè)定的SHBG線性范圍通過(guò)，各稀釋倍數(shù)的樣本實(shí)測(cè)與理論濃度的相對(duì)偏移均符合廠家聲明［8］。

圖1 DHEA-S測(cè)定均值與靶值直線回歸圖

圖2 SHBG測(cè)量均值與靶值直線回歸圖

表3 雅培i1000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)DHEA-S、SHBG的線性范圍結(jié)果(%)

3 討 論

高水平的DHEA-S 可提示發(fā)生多囊卵巢綜合征、惡性腫瘤、腎上腺增生或腫瘤。低水平DHEA-S 可能由腎上腺功能紊亂或垂體機(jī)能減退-可導(dǎo)致調(diào)節(jié)腎上腺激素合成與分泌的垂體激素水平降低的疾病狀態(tài)引起。當(dāng)女性出現(xiàn)多毛癥、閉經(jīng)或男性出現(xiàn)青春期性早熟，以及考慮雄激素分泌過(guò)多（或不足）還有需要評(píng)估腎上腺功能時(shí)可進(jìn)行DHEA-S和其他激素檢測(cè)［9］。而SHBG的高低與疾病的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)系。SHBG 升高常見(jiàn)于肝硬化、甲狀腺功能亢進(jìn)、口服避孕藥或抗癲癇藥物等情況，SHBG 降低可見(jiàn)于多囊卵巢綜合征、多毛癥、肢端肥大癥或甲狀腺功能減退等。通過(guò)對(duì)SHBG 進(jìn)行檢驗(yàn)，可為多種疾病尤其是婦產(chǎn)科疾病的診斷及確定治療方案提供參考依據(jù)，進(jìn)而可以有效降低相關(guān)疾病的發(fā)病率［10］。

采用微粒子化學(xué)發(fā)光原理定量檢測(cè)DHEA-S 和SHBG的雅培i1000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀與傳統(tǒng)方法相比，有著操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢測(cè)速度快、無(wú)放射污染等優(yōu)點(diǎn)。而良好的儀器性能和檢測(cè)方法才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確，雖然廠家說(shuō)明書(shū)給出了雅培i2000SR相關(guān)性能指標(biāo)，但是其性能參數(shù)是在國(guó)外的最適條件下完成的，與本科室水質(zhì)、電壓穩(wěn)定性、環(huán)境溫濕度、操作人員素質(zhì)等外部條件均存在差異，所以本研究在使用前依據(jù)ISO15189要求和CLSI標(biāo)準(zhǔn)文件，對(duì)其進(jìn)行DHEA-S、SHBG的性能驗(yàn)證。精密度和正確度可用于驗(yàn)證重復(fù)測(cè)定值之間的一致程度和大批檢驗(yàn)結(jié)果的均值與其真值的一致程度［11］。良好的精密度和正確度是保證分析系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的前提，也是進(jìn)行其他方法學(xué)評(píng)價(jià)和驗(yàn)證試驗(yàn)的前提［12］。

本研究結(jié)果顯示，DHEA-S 批內(nèi)變異系數(shù)為1.20%、1.48%，總變異系數(shù)為3.68%、1.70%，均小于均小于二者的室間質(zhì)評(píng)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)；SHBG 批內(nèi)變異系數(shù)為4.00%、0.80%，總變異系數(shù)為4.94%、2.03%，均小于二者的室間質(zhì)評(píng)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)；DHEA-S 和SHBG 驗(yàn)證結(jié)果說(shuō)明精密度高，重復(fù)性較好，驗(yàn)證通過(guò)。DHEA-S 和SHBG的檢測(cè)偏倚均小于TEa的1/2，驗(yàn)證結(jié)果說(shuō)明二者指標(biāo)正確度高，其檢測(cè)結(jié)果可靠［13］。

綜上所述，雅培i1000SR 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)DHEA-S 和SHBG 具有精密度高、正確度高、線性相關(guān)性較好等特點(diǎn)，結(jié)果均符合實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量目標(biāo)以及ISO15189的要求。

利益沖突作者已申明文章無(wú)相關(guān)利益沖突。