穴位埋線法對膽固醇膽石癥大鼠血清總膽固醇及甘油三酯含量的影響

平蘭芝，唐徐韻，廖瑩瑩，何艷芹，張海濤，潘 莉

（貴州中醫藥大學針灸推拿學院，貴州 貴陽 550025）

膽石癥（cholelithiasis）又稱膽系結石病或者膽石病，是指膽管或者膽囊任何部位發生結石的疾病，是最常見的膽道疾病[1]，以上腹疼痛、寒戰發熱、黃疸、惡心嘔吐等為主要表現，并易誘發膽道梗阻、膽道感染、膽源性胰腺炎等，嚴重者可引起膽囊穿孔甚至危及生命[2]。膽石癥的類型按其所含成分可分為膽固醇結石、膽色素性結石、混合性結石3 類[3]。根據流行病學調查結果顯示[4，5]，膽石癥在我國的發病率從過去的3.1%升高至10.7%，隨著生活水平的增高和飲食結構改變，發病率呈現出逐年上升趨勢。膽石癥的發病機制尚未明確，目前的治療方法有藥物治療、體外沖擊波碎石治療、手術治療等方法[6]，療效顯著，但是復發率高。中醫治療膽石癥具有療效好、副作用小、安全性高、創傷小等優勢，并在臨床中進行運用推廣[7]。穴位埋線是針灸學的一種延伸和發展，也是長效針灸，它是將羊腸線埋入穴位，利用羊腸線對穴位的持續刺激，達到調整機體功能、改善病理狀態的效果[8]。本實驗通過對膽固醇膽石癥大鼠進行穴位埋線干預實驗，觀察其血清總膽固醇（TC）及甘油三酯（TG）含量的變化，旨在為臨床治療膽固醇膽石癥提供參考和依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF 級健康雄性Wistar 大鼠32 只，體質量（250±10）g，購自斯貝福（北京）生物技術有限公司，合格證號：SCXK（京）2018-0012。本實驗操作均符合動物倫理要求。

1.2 分組及造模 大鼠適應性飼養1 周后，采用隨機數字表法將32 只大鼠隨機分為空白組8 只，給予普通飼料喂養；其余24 只建立膽固醇膽石癥模型，本項目在既往研究的致石飼料方法基礎上進行改良，建立膽固醇膽石癥大鼠動物模型[9-11]，以蔗糖50%、酪蛋白20%、膽固醇1%，膽酸0.5%、豬油15%的比例配制致石飼料，喂食6 周后，將24 只造模大鼠隨機分成模型組、埋線組、針刺組，每組8 只。

1.3 主要儀器與試劑 9 號一次性埋線針（江西格蘭斯醫療有限公司），4-0 號羊腸線（山東博達醫療用品有限公司），華佗牌不銹鋼毫針（蘇州醫療用品廠有限公司，規格：0.25 mm×25 mm），離心機（Thermo Fisher Scientific，美國），多功能酶標儀（Molecular Devices，美國）。總膽固醇及甘油三酯試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.4 方法

1.4.1 治療方法 埋線組將9 號埋線所用4-0 號羊腸線按穴位所需剪成3～4 mm的長度，置于95%酒精中浸泡備用。將大鼠固定于鼠臺，參照全國高等中醫院校規劃教材《實驗針灸學》及中國針灸學會實驗針灸分會制定的《動物針灸穴位圖譜》選取并定位“陽陵泉”“膽囊穴”“足三里”“第10 胸椎夾脊”穴，局部脫毛，穴位處用75%酒精常規消毒，采用9 號埋線針，3～4 mm 羊腸線，刺入穴位4～5 mm，向內推針芯，同時緩慢退出針頭，將羊腸線植入穴區肌肉內。檢查有無出血，按壓針孔片刻。每7 d 為1 個療程，共2 個療程，每療程間隔2 d。針刺組將大鼠固定于鼠臺，用1寸的針灸針針刺大鼠“陽陵泉”“膽囊穴”“足三里”“第10 胸椎夾脊”穴，穴位取穴方法同埋線組，1 d/次，每7次為1 個療程，共2 個療程，每療程間隔2 d。空白組和模型組在干預期間正常飼養，不予治療。

1.4.2 指標檢測 最后1 次治療結束后，各組大鼠禁食不禁水12 h，取材前大鼠腹腔注射4%的戊巴比妥0.1 ml/100 g，麻醉后將大鼠仰臥固定于大鼠手術板上，打開腹腔，在十二指腸中找到白色透明的膽總管，觀察膽囊和膽總管成石情況；后經腹主動脈取血，將取到的8 ml 血液靜止2 h，3000 r/min 離心15 min，取血清，放于-80 ℃冰箱。1 d 后，根據血清總膽固醇及甘油三酯試劑盒說明書操作，測定各組大鼠血清中總膽固醇及甘油三酯含量。觀察造模前、造模后、治療后各組大鼠的一般情況，包括進食情況、精神狀態、活動情況、背毛情況。比較各組大鼠膽囊膽固醇結石成石率，治療后血清總膽固醇及甘油三酯含量。肉眼可見膽囊或膽管內有絮狀沉淀或肉眼可見膽囊有泥砂樣沉積物，可視作膽囊結石生成。膽囊膽固醇結石成石率（%）=每組生成膽囊結石大鼠數/每組大鼠數×100%。

1.5 統計學分析 所有數據采用SPSS 22.0 統計軟件進行統計，正態分布資料用（）表示，各組間比較使用單因素方差分析，兩兩比較用LSD 檢驗，以P＜0.01 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠一般情況觀察 造模前各組大鼠飲水正常，精神狀態良好，活動自如，反應靈活，動作敏捷，背毛有光澤，進食及大小便正常，無異常狀態出現；造模后空白組大鼠體重自然增長，狀態良好，飲食及大小便正常；其余各組大鼠飲食減少，活動遲緩，拱背，反應遲鈍，背毛松散無光澤，提示造模成功。治療后與模型組比較，針刺組和埋線組大鼠飲食、體重、精神狀態、拱背情況、背毛狀態等方面均有較好改善，實驗過程中未發生動物死亡。

2.2 各組大鼠膽囊膽固醇結石成石率比較 經解剖，大體觀察可見空白組大鼠膽汁清澈透亮；模型組大鼠全部可見有絮狀沉淀，埋線組成石率低于針刺組，可見絮狀沉淀。與模型組比較，埋線組和針刺組明顯降低了膽汁的渾濁度，抑制了膽固醇結石的形成，見表1。

表1 各組大鼠膽囊膽固醇結石成石率（n，%）

2.3 各組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯含量比較 模型組血清總膽固醇、甘油三酯含量高于空白組，差異有統計學意義（P＜0.01）；埋線組和針刺組血清總膽固醇、甘油三酯含量低于模型組，差異有統計學意義（P＜0.01），見表2。

表2 各組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯含量（，mmol/L）

表2 各組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯含量（，mmol/L）

注：與空白組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01

3 討論

膽固醇膽石癥在中醫學中歸屬“黃疸”“脅痛”“膽脹”等范疇，以“肝郁膽逆”“脾胃虛弱”為病機[12]。現代研究表明[13]，膽固醇膽石癥的發病機制主要與脂質代謝相關基因表達異常、腸道吸收膽固醇增加、膽固醇轉運的載體等有關，而血清甘油三酯水平與膽結石發病也具有密切的關系[14，15]。脂代謝異常可導致膽固醇合成限速酶活化，增加肝臟膽固醇的合成，從而造成膽汁中膽固醇的過飽和狀態，影響膽汁酸、膽固醇和磷脂三者的比例，使膽固醇更易析出形成結石[16]。本研究通過觀察大鼠一般狀態、膽囊和膽管成石率，檢測分析總膽固醇及甘油三酯的含量變化，可以評估膽固醇膽石癥的治療效果。

穴位埋線是針灸的延伸和進展，以線代針，對穴位持續刺激，以激發經絡氣血，協調機體機能、調和氣血、平衡陰陽，從而達到扶正祛邪的目的[17]。《靈樞·邪氣臟腑病形》記載：“膽合入于陽陵泉，膽病者……其寒熱者取陽陵泉。”故陽陵泉有通暢膽腑、清利濕熱之功；膽囊穴具有利膽通腑、清利濕熱之功，膽囊出現病變時，該穴為痛敏點，常為膽道疾病的定性穴；足三里為陽明經穴，陽明經多氣多血，且足三里為“強壯保健要穴”，對足三里進行埋線，具有健脾和胃、扶正培元、調補氣血，可增強人體免疫力；第10 胸椎夾脊可調節臟腑；故本實驗選取大鼠陽陵泉、膽囊穴、足三里、第10 胸椎夾脊共同疏泄肝膽之氣，調節臟腑，扶正祛邪。

葉露[18]研究發現，膽固醇膽石癥豚鼠表現為進食較少，皮毛干枯無澤，精神萎靡，活動緩慢。本實驗結果顯示，從大鼠的一般情況可以看出，與模型組相比較，埋線組和針刺組的飲食情況、精神狀態、拱背、背毛等情況均有明顯改善，提示穴位埋線和針刺可以緩解膽固醇膽石癥的癥狀表現。李炯等[19]研究發現肉眼可見膽囊有泥沙樣或絮狀沉淀，可視作膽囊結石生成。本實驗通過肉眼觀察膽囊及膽管的狀態提示造模成功，模型組大鼠全部成模，與模型組比較，經穴位埋線與針刺治療后，成石率明顯下降，說明穴位埋線和針刺均可有效降低膽固醇膽石癥的成石率，且穴位埋線效果優于針刺。

飲食中過多的膽固醇攝入可引起血液中膽固醇、甘油三酯等指標的升高，膽汁中膽固醇過飽和，隨后膽固醇結晶逐漸形成。本實驗結果顯示，膽固醇膽石癥大鼠經治療后，總膽固醇及甘油三酯含量較模型組均有改善，其中埋線組改善最為明顯且優于針刺組，說明穴位埋線療法可以通過刺激相應腧穴，能夠有效促進膽固醇膽石癥血清脂類代謝，降低血清膽固醇、甘油三酯含量，從而達到治療膽固醇膽石癥的目的，但其作用機制還需要進一步研究。

綜上所述，穴位埋線對于膽固醇膽結石具有良好的防治作用，為臨床開展穴位埋線防治膽固醇膽石癥提供了參考依據。