B7-H4與CR-1水平對非小細胞肺癌的預測價值

葉瑞萍，儲焰南

肺癌是較為常見的惡性腫瘤，我國人口基數大，每年肺癌新發病例及死亡病例均遠超其他國家。我國腫瘤登記中心數據顯示，2014年新發肺癌78.15萬例，肺癌發病率位居男性惡性腫瘤第1位，女性惡性腫瘤第2位[1]。根據肺癌的生物形態特征，可將其分為非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）和小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）。NSCLC約占肺癌總數的85%，大多數NSCLC患者在確診時已處于Ⅲ～Ⅳ期，同時可存在轉移病變，患者預后較差，5年生存率較低[2]。對NSCLC患者實現早期診斷，有助于提高患者5年生存率，改善患者預后。尋找特異性的腫瘤標志物輔助診斷NSCLC已成為臨床研究熱點。負性共刺激分子B7同源體4（negative costimulatory molecule B7 homolog 4，B7-H4）屬于B7家族成員為一種免疫協同共刺激分子，在乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤組織中存在表達，在促進腫瘤細胞逃逸發揮重要作用[3]。NSCLC患者血清中B7-H4水平可以反映腫瘤TNM分期、組織分化及淋巴轉移情況，B7-H4可能參與了NSCLC的發生與發展，有望成為NSCLC診療的新靶點[4]。畸胎癌衍生生長因子-1(carcinoembryonic gene Cripto-1，CR-1)屬于表皮生長因子家族成員，在胃癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中表達水平較高[5]。盡管糖類抗原125(CA125) 和細胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 segments，CYFRA21-1）為中國原發性肺癌診療規范（2015年版）推薦的肺癌常用診斷標志物[6]，但其對NSCLC的早期診斷價值，有待進一步研究。NSCLC具有高度特異性，同時在宿主的壓力下，腫瘤細胞也不斷發生基因突變，單一腫瘤標志物對NSCLC的敏感性及特異性較差，對其早期診斷價值較為有限。本研究擬定量檢測NSCLC患者外周血中B7-H4、CR-1的水平，探討其對NSCLC的預測價值。

1 對象與方法

1.1 對象 收集2017年1月—2019年12月中國科學院合肥腫瘤醫院收治的75例NSCLC患者作為NSCLC組，其中男59例，女16例；平均年齡（55.26±14.12）歲；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期29例，Ⅲ～Ⅳ期46例；病理類型：鱗癌39例、腺癌35例、大細胞癌1例。同時收集綜合醫學部同期就診的113例肺部良性疾病(benign lung diseases，BLD)患者作為BLD組，其中男81例，女32例；平均年齡（54.27±16.15）歲；肺部感染62例，慢性阻塞性肺病43例，支氣管擴張8例。2組患者的性別、年齡進行比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 評價標準 NSCLC組納入標準：①年齡≥18歲者；②經過病理及細胞學確診為NSCLC者；③為新診斷病例，未接受化療、靶向治療、免疫治療及手術治療者；④NSCLC分期參照國際抗癌聯盟的第七版TNM分期標準[7]。BLD組納入標準：①年齡≥18歲者；②無其他原發性惡性腫瘤者；③未合并嚴重肝腎功能不全、自身免疫性疾病、精神系統疾病等對本項研究可能造成影響的疾病者。排除標準：合并其他惡性腫瘤者，嚴重心、肝、腎功能不全者。本研究經中國科學院合肥腫瘤醫院醫學倫理委員會批準，入組患者或其直系親屬對本項研究知情，并簽署知情同意書。

1.3 方法 患者入院后，采集清晨空腹血標本5～8 ml，室溫靜置30 min，2 000 r/min，5 ℃離心10 min后，分離吸取上清，置入－86 ℃超低溫冰箱待測。采用B7-H4 DuoSet定量檢測試劑盒（R&D Systems公司，美國）檢測患者血清B7-H4水平；采用CR-1 DuoSet定量檢測試劑盒（R&D Systems公司，美國）檢測CR-1水平；采用CA125定量檢測試劑盒（北京熱景生物技術有限公司，中國）檢測CA125水平；采用CYFRA21-1定量檢測試劑盒（北京熱景生物技術有限公司，中國）檢測CYFRA21-1水平。以上指標檢測均采用酶聯免疫吸附法，利用酶標儀（賽默飛公司，美國）測定OD值，繪制標準曲線，計算各指標水平。

1.4 觀察指標 觀察并比較2組患者血清B7-H4、CR-1、CA125及CYFRA21-1水平。

1.5 統計學處理 應用SPSS 22.0及Gaphpad Prism軟件對數據進行統計分析。符合正態分布的計量資料以±s表示，2組間均數比較采用獨立樣本t檢驗，多個樣本間的均數比較，采用單因素方差分析，計數資料以率（%）表示。采用Pearson相關分析血清B7-H4、CR-1與CA125、CYFRA21-1含量的相關性。Logistic回歸分析評價發生NSCLC的危險因素。繪制ROC評價B7-H4、CR-1及B7-H4聯合CR-1對NSCLC的預測價值，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 血清B7-H4、CR-1、CA125及CYFRA21-1水平比較 NSCLC組血清B7-H4、CR-1、CA125、CYFRA21-1水平均高于BLD組，差異有統計學意義（P＜0.01）（表1）。

表1 2組血清B7-H4、CR-1、CA125及CYFRA21-1水平比較

2.2 NSCLC組血清B7-H4、CR-1與CA125及CYFRA 21-1水平的相關性分析 NSCLC組血清B7-H4水平與CA125、CYFRA21-1水平均呈正相關（P＜0.05）；血清CR-1水平與CA125、CYFRA21-1水平均呈正相關（P＜0.05）（表2）。

表2 非小細胞肺癌患者B7-H4、CR-1與CA125、CYFRA21-1水平的相關性分析[r值（P值）]

2.3 多因素Logistic回歸分析 以患者是否發生NSCLC（未發生=0，發生=1）作為因變量，將年齡（A＜60歲=0，≥60歲=1）、性別（男性=0，女性=1）、B7-H4（＜25.67μg/ml=0，≥25.67 0μg/ml=1）、CR-1（＜2.41 ng/ml=0，≥2.41 ng/ml=1）與CA125（＜21.85 U/ml=0，≥21.85 U/ml=1）及CYFRA21-1（＜2.56 ng/ml=0，≥2.56 ng/ml=1）納入多因素Logistic回歸模型，采用逐步進入法進行單變量多因素Logistic回歸分析（α入=0.10，α出=0.15）。結果顯示，B7-H4、CR-1、CA125和CYFRA21-1是發生NSCLC的危險因素(P＜0.05)（表3）。

表3 發生NSCLC影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 B7-H4、CR-1單獨及聯合檢測在NSCLC中的診斷價值 以患者發生NSCLC為標準，以患者B7-H4、CR-1水平為檢驗變量，繪制ROC曲線（圖1）。B7-H4和CR-1聯合預測患者發生NSCLC的AUC值（0.984）大于B7-H4的AUC值（0.912）和CR-1的AUC值（0.933），差異有統計學意義（P＜0.05）。B7-H4的最佳臨界值為25.65μg/ml，敏感性為93.81%，特異性為90.72%，CR-1的最佳臨界值為1.97 ng/ml，敏感性為94.71%，特異性為92.01%；其中B7-H4和CR-1聯合預測NSCLC的敏感性為95.64%，特異性為98.73%。

圖1 B7-H4、CR-1單獨及聯合檢測NSCLC發生的ROC曲線

3 討論

研究表明，在乳腺癌、肺癌、胃癌等腫瘤組織中均可發現B7-H4的異常表達，B7-H4的異常表達促進了腫瘤細胞的免疫逃逸[8-9]。此外，在受到腫瘤浸潤的血管內皮細胞以及腫瘤相關巨噬細胞中均可發現B7-H4的異常表達[10]。CR-1為表皮生長因子家族成員，在上皮間質轉化、腫瘤新生血管形成中發揮著重要作用，在結腸癌、乳腺癌、宮頸癌等腫瘤組織中高表達[11]。此外，CR-1與肺腺癌的分期、組織分型、淋巴結轉移密切相關[12]。本研究結果顯示，NSCLC組血清B7-H4、CR-1水平高于BLD組，表明血清B7-H4、CR-1水平升高，患者發生NSCLC的風險增加，與相關研究結果相符[13-14]；與BLD組比較，NSCLC組患者血清CA125、CYFRA21-1水平也較高，這與國內其他研究[15-17]結果一致。

本研究NSCLC組血清B7-H4、CR-1水平與CA125、CYFRA21-1水平呈正相關（P＜0.05），而CA125、CYFRA21-1水平早期診斷NSCLC的敏感性、特異性并不強。B7-H4作為負性調節因子，促使T細胞介導的細胞免疫降低，促進了腫瘤細胞的免疫逃逸，在NSCLC患者腫瘤組織中B7-H4分布彌散[18]，而CR-1作為胚胎干細胞的標志，在正常成人組織中并不出現，在肺癌腫瘤組織中存在高表達[19]。Park等[12]研究證實CR-1是預測早期NSCLC的腫瘤標志物之一；李春仙等[20]也研究證實NSCLC患者血清B7-H4水平顯著增高，且與臨床分期相關，是一種較好的預測NSCLC的腫瘤標志物，有助于NSCLC的診斷。在本研究中，NSCLC組均為確診病例，B7-H4在NSCLC患者腫瘤組織中廣泛分布，具有較高的敏感性；CR-1在正常組織中并不常見，但具有較高的特異性，二者聯合檢測能夠提高預測NSCLC的效能。研究結果還顯示，患者發生NSCLC時，血清B7-H4、CR-1水平可作為預測指標，患者血清B7-H4和CR-1水平聯合預測NSCLC發生的敏感性、特異性及AUC較單一檢測高。

綜上所述，血清B7-H4、CR-1水平在預測NSCLC中具有重要意義，二者聯合檢測較單一腫瘤標志物檢測更為敏感和高效，可為臨床診斷NSCLC提供參考依據。然而本研究為單中心研究，樣本數量較少，在進一步研究中，應當擴大樣本量，探討B7-H4、CR-1水平與NSCLC患者腫瘤分期、療效評價及預后的臨床價值，以期進一步提高該類患者的早期診斷及治療成功率。